目的:探究黄芪甲苷对高糖诱导 RGC-5细胞氧化应激、凋亡、自噬的影响,并探究其与高尔基体应激之间的关系.方法:将不同浓度葡萄糖(5、35 mmol/L)处理的RGC-5细胞设为正常(NG)组、高糖(HG)组;不同浓度黄芪甲苷(20、40、60、80、100μmol/L)处理高糖 RGC-5细胞,筛选最适浓度 60 μmol/L.将 si-NC、si-高尔基磷蛋白 3(GOLPH3)转染至高糖和黄芪甲苷共处理的 RGC-5 细胞,设为黄芪甲苷+si-NC组、黄芪甲苷+si-GOLPH3组.细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞存活率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS);膜联蛋白 V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测细胞微管相关蛋白 1轻链 3-Ⅱ(LC3Ⅱ)、细胞微管相关蛋白 1轻链 3-Ⅰ(LC3Ⅰ)、自噬蛋白(p62)、高尔基体外膜蛋白(GOLPH3)的蛋白表达;实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验检测 GOLPH3表达.结果:与 NG组相比,HG组 RGC-5细胞存活率明显降低,ROS、MDA明显升高,SOD明显降低,细胞凋亡率明显升高,LC3Ⅱ蛋白明显升高,LC3Ⅰ、p62 蛋白明显降低,GOLPH3 的 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05).黄芪甲苷(20、40、60、80、100 μmol/L)处理高糖诱导 RGC-5细胞最适浓度为 60 μmol/L.黄芪甲苷明显反向调控 HG组细胞上述指标.沉默 GOLPH3能够明显增强黄芪甲苷对高糖诱导 RGC-5细胞中上述指标的负向调控.结论:黄芪甲苷可减轻高糖诱导 RGC-5细胞的损伤,抑制高糖诱导的氧化应激、凋亡和自噬,其潜在的机制与激活高尔基体应激有关.

探讨结直肠癌中S100P、环氧合酶-2（COX-2）、高尔基体磷蛋白3（GOLPH3）的表达情况及与肿瘤分期、侵袭深度的关系。研究发现直肠癌患者的S100P阳性表达量、COX-2、GOLPH3表达水平显著高于对照组；不同侵袭深度、临床分型、DUKE分期患者的S100P、COX-2、GOLPH3表达水平存在统计学意义。结直肠癌中S100P、COX-2、GOLPH3的表达情况及与肿瘤分期、侵袭深度的呈现正相关关系，可以作为临床效果评估依据之一。

目的:探讨高尔基磷蛋白3(GOLPH3)对人脂肪来源间充质干细胞(ADSC)增殖、迁移及成脂分化的影响。方法:分离培养人原代ADSC细胞。采用慢病毒载体在ADSC中过表达GOLPH3(GOLPH3过表达组，GPLPH3-over)，以空载体慢病毒作为对照(NC-over)。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、Transwell细胞迁移实验分别检测两组细胞的增殖和迁移能力，并经14 d成脂分化诱导后行油红O染色，观察脂滴数目。蛋白质印迹法(Western blot)检测两组细胞中特定成脂标志物过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)和增强子结合蛋白α(C/EBPα)蛋白水平的表达。组间比较采用 t检验。 结果:成功获得稳定过表达GOPLH3的ADSC。CCK-8结果显示，GOLPH3-over组增殖能力强于NC-over组(0.579±0.142比0.466±0.081， t＝3.127， P<0.05)。Transwell细胞迁移实验显示，GOLPH3-over组迁移能力强于NC-over组(39.000±2.646比25.000±3.000， t＝5.563， P<0.05)。油红O染色结果表明，GOLPH3-over组脂滴多于NC-over组(136 919±12 748比67 837±2 665， t＝9.187， P<0.05)。Western blot结果表明，GOLPH3-over组PPAR-γ(1.061±0.175比0.521±0.082， t＝4.904， P<0.05)和C/EBPα(3.120±0.171比2.196±0.174， t＝6.548， P<0.05)蛋白表达水平高于NC-over组高，差异均有统计学意义。 结论:过表达GOLPH3可以促进体外ADSC的增殖、迁移及其向脂肪细胞的分化。

目的:探讨高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)在胆囊癌中的表达及临床意义。方法:收集中国人民解放军联勤保障部队第904医院2014年1月至2019年1月行胆囊根治术的63例胆囊癌患者手术标本和临床资料，纳入胆囊癌组，男性21例，女性42例，平均年龄62.5岁。另取同期胆囊轻中度不典型增生的30例患者标本，纳入癌前病变组，男性9例，女性21例，平均年龄62.4岁。取因肝脏创伤或巨大肝血管瘤行外科手术的20例患者切除的正常胆囊标本，纳入正常组，男性7例，女性13例，平均年龄61.9岁。免疫组化检测各组胆囊组织GOLPH3、NLRP3、Ki-67的表达，并计数阳性率。log-rank检验及Cox回归分析胆囊癌患者GOLPH3、NLRP3表达与生存预后的关系。结果:GOLPH3、NLRP3、Ki-67在胆囊癌组、癌前病变组、正常组表达依次降低。胆囊癌组织中GOLPH3、NLRP3表达阳性率均与Ki-67表达阳性率呈正相关( r＝0.972和 r＝0.969，均 P<0.05)。多因素分析，GOLPH3阳性( HR＝4.891，95% CI：1.776～13.470)、NLRP3阳性( HR＝3.006，95% CI：1.273～7.099)是胆囊癌患者术后生存的独立危险因素(均 P<0.05)。 结论:GOLPH3和NLRP3蛋白在胆囊癌组织中高表达，GOLPH3和NLRP3阳性是胆囊癌患者术后生存的独立危险因素。

目的:探究高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)对肝内胆管癌干细胞特性的影响及其机制。方法:利用TCGA数据库(35例胆管癌组织和9例正常组织)分析GOLPH3在胆管癌中的表达。免疫组织化学分析25例胆管癌根治手术患者癌组织和癌旁组织中GOLPH3的表达模式。将GOLPH3敲低质粒和对照质粒转入肝内胆管癌细胞系(HuCCT1)，荧光显微镜和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。集落形成实验检测细胞增殖能力。肿瘤球形成实验和Western blot检测干细胞样特性。样本数据采用非配对 t检验。 结果:TCGA数据库中胆管癌组织的GOLPH3表达高于正常组织(P< 0.001)。敲低GOLPH3抑制了HuCCT1细胞的增殖能力和干细胞特性，对照组的细胞克隆数目高于敲低组[(175.72±16.04)个比(67.33±5.69)个， t＝11.024， P<0.01]；对照组的肿瘤球平均直径高于敲低组[(244.43±38.82) μm比(131.32±19.86) μm， t＝4.593， P<0.01]；单层细胞中对照组的SOX2蛋白表达水平高于敲低组(0.75±0.07比0.39±0.08， t＝4.304， P<0.05)；单层细胞中对照组的CD44蛋白表达水平与敲低组比较，差异无统计学意义(0.31±0.11比0.23±0.09， t＝0.916， P>0.05)；球形细胞中对照组的SOX2蛋白表达水平高于敲低组(0.85±0.04比0.54±0.02， t＝12.357， P<0.01)；球形细胞中对照组的CD44蛋白表达水平高于敲低组(0.81±0.09比0.57±0.06， t＝7.841， P<0.05)。京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析和基因本体论(GO)注释提示GOLPH3的致癌作用与整合素通路激活有关。GOLPH3敲低后整合素(ITG)/局部黏着斑激酶(FAK)通路活性下降，单层细胞中对照组的ITGA2蛋白表达水平高于敲低组(0.70±0.07比0.42±0.09， t＝30.404， P<0.01)；单层细胞中对照组的ITGB1蛋白表达水平高于敲低组(0.68±0.10比0.42±0.04， t＝6.735， P<0.05)；单层细胞中对照组的p-FAK蛋白表达水平高于敲低组(0.61±0.04比0.39±0.04， t＝22.084， P<0.01)；球形细胞中对照组的ITGA2蛋白表达水平高于敲低组(0.82±0.08比0.56±0.05， t＝13.485， P<0.01)；球形细胞中对照组的ITGB1蛋白表达水平高于敲低组(0.85±0.06比0.64±0.03， t＝6.672， P<0.05)；球形细胞中对照组的p-FAK蛋白表达水平高于敲低组(0.77±0.11比0.51±0.08， t＝9.019， P<0.05)。 结论:GOLPH3在肝内胆管癌中高表达，其致癌机制可能与整合素通路激活有关。

目的:探究高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)通过PI3K/AKT/GSK3β信号调控子宫内膜癌(EC)细胞增殖与凋亡的机制。方法:将人子宫内膜腺癌HEC-1-B细胞分为对照组、GOLPH3组和GOLPH3＋GDC-0941组。通过转染GOLPH3 pcDNA质粒过表达GOLPH3，PI3K抑制剂GDC-0941用于阻断PI3K/AKT/GSK3β通路。分别通过CCK-8法、克隆形成实验和流式细胞术检测细胞活力、细胞增殖能力和细胞凋亡。通过Western blotting检测PI3K/AKT/GSK3β通路中蛋白磷酸化水平。结果:转染实验成功，且PI3K抑制剂GDC-0941不会影响GOLPH3 mRNA和蛋白的表达。对照组、GOLPH3组、GOLPH3＋GDC-0941组的相对细胞活力分别为(100.00±4.63)%、(131.56±7.85)%、(97.85±7.36)%，3组间差异有统计学意义( F＝7.437， P<0.001)；GOLPH3组高于对照组( P<0.001)，GOLPH3＋GDC-0941组低于GOLPH3组( P<0.001)。3组的细胞克隆形成数目分别为(46.86±3.56)个、(89.32±4.78)个、(46.48±4.05)个，差异有统计学意义( F＝20.437， P<0.001)；GOLPH3组多于对照组( P<0.001)，GOLPH3＋GDC-0941组少于GOLPH3组( P<0.001)。3组的细胞凋亡率分别为(5.17±0.61)%、(2.34±0.56)%、(6.85±0.53)%，差异有统计学意义( F＝11.643， P<0.001)；GOLPH3组低于对照组( P<0.001)，GOLPH3＋GDC-0941组高于GOLPH3组( P<0.001)。3组磷酸化PI3K/PI3K水平分别为1.00±0.09、3.32±0.19、0.93±0.06，磷酸化AKT/AKT水平分别为1.00±0.11、4.63±0.63、1.15±0.16，磷酸化GSK3β/GSK3β水平分别为1.00±0.08、4.06±0.57、1.04±0.14，差异均有统计学意义( F＝12.532， P<0.001； F＝16.792， P<0.001； F＝15.311， P<0.001)；各蛋白磷酸化水平GOLPH3组均高于对照组(均 P<0.001)，GOLPH3＋GDC-0941组均低于GOLPH3组(均 P<0.001)。 结论:在EC细胞中，过表达GOLPH3可通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路促进细胞增殖并抑制细胞凋亡，提示GOLPH3参与EC的发生和发展。

目的 探究脓毒症状态下老年小鼠脾脏树突状细胞(dendritic cell,DC)功能状态的异常改变及其与高尔基体应激反应和自噬反应的内在联系.方法 不同年龄小鼠(青年鼠 8周龄,老年鼠18 月龄)分别随机分为假手术组与脓毒症模型组(CLP组)(n =4).CLP组小鼠于术后24h处死并取脾脏组织.采用免疫磁珠法分离纯化脾脏DC,流式细胞术检测各组DC表面标志物及共刺激分子(CD80、CD86、MHC-Ⅱ)表达水平.分离纯化不同年龄小鼠脾脏DC,各自分为空白对照组、LPS刺激组(1 μg/mL)(n =4).免疫印迹法检测各组细胞高尔基体应激反应相关蛋白——高尔基体磷蛋白 3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)、高尔基体重组堆积蛋白 2(Golgi reassembly stacking protein of 55 kDa,GRASP55)以及高尔基体自噬相关蛋白高尔基体蛋白亚家族A成员2(Golgi matrix protein,GM130)、微管相关蛋白 1A和 1B(microtubule-associated proteins 1A and 1B,MAP1LC3B)表达水平.激光共聚焦显微镜检测高尔基体红色荧光探针(Golgi-tracker Red)在各空白对照组中的显示情况.进一步应用抑制高尔基体蛋白转运的莫能菌素(monensin,MON)(1 μg/mL)预处理,检测扰乱高尔基体稳态对小鼠DC功能分化的影响.结果 与青年小鼠比较,老年脓毒症模型小鼠脾脏DC活化障碍显著.CLP术后 24h老年小鼠脾脏DC表面标志分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达升高水平明显低于青年小鼠(P<0.05).对比健康小鼠脾脏DC胞内高尔基体的结构功能状态发现,与青年小鼠比较,老年DC胞内高尔基体结构蛋白GRASP55、GM130 呈高表达(P<0.001),提示高尔基体结构肿胀;高尔基体外膜蛋白GOLPH3表达减弱(P<0.001),提示蛋白修饰及转运功能低下.分离提取不同年龄小鼠脾脏DC进行体外培养并给予LPS刺激,发现脓毒症老年小鼠DC胞内高尔基体应激反应增强、自噬明显,与DC功能障碍密切相关.给予MON抑制高尔基体蛋白转运,观察到青年、老年小鼠DC胞内高尔基体均发生显著应激与自噬反应,青年小鼠DC免疫功能活化障碍,老年小鼠功能障碍则更为显著.结论 老年小鼠DC中高尔基体结构肿胀且功能受损,造成DC免疫功能活化障碍,与老年脓毒症免疫抑制密切相关.

高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)基因作为一种新的癌基因,在细胞内过表达时促进多种恶性肿瘤的生长和转移,与肿瘤密切相关.近年来研究表明,GOLPH3过表达与消化道肿瘤的发生、发展、预后密切相关,甚至有望成为肿瘤基因治疗的新靶点.

目的 分析高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)在结直肠癌组织中的表达情况,及其对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法 收集术前未经放、化疗治疗,经手术切除患者的结直肠癌组织及其相应的癌旁组织(40例);采用免疫组织化学法检测组织中GOLPH3的表达,分析GOLPH3与结直肠癌临床病理特征的关系;构建稳定沉默GOLPH3的结直肠癌细胞株,并设立阴性对照组和空白对照组,Western blotting法检测3组细胞中GOLPH3蛋白的表达,MTT法检测3组细胞的增殖活性,Transwell实验分别检测3组细胞的侵袭和迁移能力.结果 GOLPH3在癌组织中主要为阳性表达,且阳性表达率(65.0％)显著高于癌旁组织(35.0％)(P＜0.05);GOLPH3在TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、浸润深度≥2 cm、中低分化及有淋巴结转移的癌组织中的阳性表达率明显高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、浸润深度＜2 cm、高分化及无淋巴结转移的癌组织(P＜0.05).与阴性对照组和空白对照组比,基因沉默组GOLPH3蛋白表达量、细胞增殖活性、侵袭能力及迁移能力均明显降低(P＜0.05).结论 GOLPH3在结直肠癌组织中高表达,其表达与肿瘤分期、侵袭深度、分化程度及淋巴结转移有关,抑制GOLPH3基因表达可下调GOLPH3蛋白表达,抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移.

目的 探讨高尔基磷酸化蛋白3(GOLPH3)基因过表达对人结肠癌细胞HT29顺铂化疗敏感性的影响及其机制.方法 将HT29细胞分为4组:对照组(HT29)、转染组[小干扰RNA(siRNA)-GOLPH3]、实验组1(10μmol/L顺铂)、实验组2(siRNA-GOLPH3+ 10 μmol/L顺铂).反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测人结肠癌细胞转染后的沉默效果.噻唑蓝(MTT)、瘤球形成实验、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)流式细胞实验分别检测各组细胞增殖、成瘤、凋亡.Western blot检测各组细胞GOLPH3、P-糖蛋白(P-gp)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平.裸鼠随机分为4组,分别为裸鼠对照组(HT29+ NS)、裸鼠转染组(siRNA-GOLPH3 HT29+ NS)、裸鼠实验组1(HT29+顺铂)及裸鼠实验组2(siRNA-GOLPH3 HT29+顺铂),观察30 d内成瘤.结果 与对照组比较,转染组细胞中的GOLPH3 mRNA和蛋白的相对表达量明显降低(1.002±0.223比0.162 ±0.062;1.003±0.094比0.099±0.112)(P＜0.01),凋亡率明显升高[(1.843±1.298)％比(15.520±2.921)％,P＜0.01].在顺铂处理条件下,实验组2的A值(0.236 ±0.071)及瘤球数[(30.750±14.500)％]明显低于实验组1(0.746±0.085、212.800±30.380),而凋亡率明显高于实验组1[(59.400±2.392)％比(23.890±6.363)％,p＜0.01].裸鼠实验中转染组、实验组1、实验组2裸鼠腋窝皮下移植瘤体的体积均显著低于对照组[(1.738±0.121)、(1.573±0.224)、(0.625±0.189) mm3比(2.083±0.110) mm3],差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组1裸鼠自15d后其瘤体体积均大于同期实验组2裸鼠的瘤体体积(P＜0.01).与对照组比较,实验组1的GOLPH3、β-catenin、P-gp蛋白表达量同步升高(1.000±0.173比2.734±0.440,1.000±0.078比2.472±0.444,1.014±0.346比4.269±0.454)(P＜0.01).实验组2的GOLPH3、β-catenin、P-gp的蛋白表达水平较实验组1均明显降低(0.249±0.084比2.734±0.440;0.993±0.052比2.472±0.444;1.842±0.383比4.269±0.454)(P＜0.01).结论 GOLPH3基因过表达可通过激活Wnt/β-catenin细胞信号通路降低HT29结肠癌细胞对顺铂化疗的敏感度.