系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种复杂的自身免疫疾病,传统治疗在部分重度和难治性患者中效果有限.近期研究显示,嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞疗法在SLE治疗中展现出了具有前景的疗效.生物标志物在精准评估治疗效果和安全性方面至关重要,CAR T细胞治疗与安全性评估标志物包括传统标志物和与CAR T细胞疗法相关的标志物.传统的SLE病情监测标志物,仍可用于CAR T细胞治疗基线随访和病情监测,如血清抗双链DNA、抗单链DNA和抗核小体等自身抗体的滴度下降,血清补体水平恢复正常,以及尿蛋白/肌酐比值的改善,均提示病情得到有效控制.CAR T细胞疗效监测标志物分为B细胞和T细胞标志物.输注后,B细胞数量下降,B细胞表型以初始B细胞为主,记忆B细胞和浆母细胞的比例显著降低,表明治疗取得了疗效.输注前,初始T细胞(CD45RA+CD27+)和中央记忆型T细胞(CD45RA-CD62L+CD27+)的高比例则提示更强的抗肿瘤效应;患者的CAR T细胞表达与早期记忆分化相关的转录因子,如T细胞因子7和淋巴增强子结合因子1,提示这些患者对CAR T细胞疗法更为敏感.输注后,CD25、CD69和CD137等T细胞激活标志物,以及CD57、PD-1和Tim-3等耗竭标志物的高表达,提示T细胞的杀伤能力受到限制.CAR T细胞治疗安全性标志物不仅包括CAR T细胞分泌的效应细胞因子(如白细胞介素-2和IFN-γ),还包括单核细胞和巨噬细胞产生的细胞因子(如IL-1和IL-8),其水平可用于评估CAR T细胞疗法最常见的毒副反应[细胞因子释放综合征(cytokine release syn-drome,CRS)和免疫效应细胞相关神经毒性综合征(immune effector cell-associated neurotoxicity syndrome,ICANS)].高水平的血清巨噬细胞炎性蛋白1α对于预测CAR T细胞治疗后发生严重CRS和ICANS的风险具有较高的价值.此外,基线血小板计数和中性粒细胞绝对值可预测血液毒性,由IL-8、IFN-γ和IL-1β组成的感染相关预测模型,能够有效预测患者输注后出现严重感染的风险.CAR受体结构设计、清除淋巴细胞的化疗方式,患者曾接受的治疗选择及自身免疫状态等都会影响CAR T细胞治疗的疗效及安全性.在当前及未来将开启的相关临床研究中,应纳入全面、规范的检测和评估体系,为CAR T细胞疗法在SLE等自身免疫疾病的应用,提供比较标准.

目的 设计合成系列以伊布替尼类似物为布鲁顿酪氨酸激酶(bruton's tyrosine kinase,BTK)激酶配体的蛋白降解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimeras,PROTAC)降解剂,并初步评价其体外活性.方法 以3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺为起始原料,通过取代、还原胺化、脱保护和水解等反应合成一系列新型PROTAC;通过MTS法和蛋白免疫印迹法(Western-blot)分别测定目标化合物对OCI-LY10 细胞的增殖抑制能力和BTK降解活性;通过分子对接考察分子配体与BTK蛋白的结合模式.结果 共合成了14 个BTK PROTAC降解剂,大部分化合物都具有一定的体外活性,其中化合物 15a表现出了较好的细胞增殖抑制活性(IC50=7.15 nmol·L-1)和BTK降解活性(DC50<10 nmol·L-1).结论 合成了结构新颖、活性较好的BTK PROTAC降解剂,对其构效关系进行了初步探索,可为BTK PROTAC降解剂的进一步研究提供参考.

目的:构建表达报告基因荧光素酶和肿瘤相关抗原间皮素(mesothelin，MSLN)基因的胰腺癌细胞系，评估其作为靶细胞在评价免疫细胞的肿瘤杀伤效力中的应用。方法:构建表达荧光素酶、MSLN基因的慢病毒载体，包装慢病毒，感染胰腺癌细胞系，抗生素筛选后，有限稀释法获得单细胞克隆，并验证目的基因的稳定表达。实时无标记细胞分析(real-time cell analysis，RTCA)和荧光素酶活性检测方法体外检测免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤效力。将构建的细胞系接种B-NDG小鼠建立表达荧光素酶的胰腺癌肿瘤模型，利用活体成像技术检测荧光素酶表达水平，监测小鼠体内胰腺癌肿瘤生长情况。在胰腺癌小鼠模型中验证嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T，CAR-T)细胞的肿瘤杀伤能力。结果:本研究建立了稳定表达荧光素酶和MSLN基因的胰腺癌细胞系panc-1-luc、panc-1-luc-MSLN和capan-2-luc细胞。3种细胞的报告基因表达水平较高，与细胞数量呈正相关，panc-1-luc-MSLN细胞的MSLN阳性率达95.6%。体外肿瘤细胞杀伤试验结果表明MSLN-CAR-T细胞能特异性杀伤MSLN抗原阳性的panc-1-luc-MSLN细胞和capan-2-luc细胞，最小杀伤率分别为(70.00±18.19)%和(57.00±5.29)%，而对MSLN阴性的panc-1-luc细胞无杀伤作用。RTCA结果显示MSLN-CAR-T细胞对构建的3种胰腺癌细胞均有杀伤能力，最小杀伤率分别为(56.33±7.64)%、(93.00±2.65)%和(26.33±28.15)%；NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤不受MSLN限制。免疫缺陷小鼠胰腺癌模型结果显示，体内杀伤效力与体外荧光素酶活性检测结果一致。体内外试验证明，检测靶细胞荧光素酶表达活性，可以反映免疫细胞对靶细胞的杀伤效力。结论:本研究建立了稳定表达荧光素酶的多株胰腺癌单克隆细胞系，可用于体内外免疫治疗产品肿瘤杀伤效力的研究评价。

目的:总结国外脑卒中服务系统整合的策略、影响因素与评价方法，为我国脑卒中防治系统建设提供借鉴。方法:采用范围综述方法检索、筛选和分析文献。使用stroke、integration等检索词，获取PubMed等数据库2000—2021年的相关文献7 527篇。从文献中提取脑卒中系统整合策略、影响因素、评价方法与结果，并借鉴健康整合彩虹模型建立文献分析框架。结果:最终纳入103篇文献进行分析，均涉及系统整合策略，其中49篇涉及整合影响因素，32篇涉及整合评价。脑卒中系统整合策略包括服务覆盖、规范塑造和信息技术融合3类共13种形式；整合影响因素包括当地卒中服务资源、变革执行能力、社会发展水平与制度环境3类；系统整合评价包括系统性评价与个案评价2类。结论:脑卒中服务系统整合的基本目标是提高卒中服务的覆盖、质量和效率，内在驱动源自市场和技术2个方面。3类整合策略各有侧重而相互融合，深度嵌入于区域资源、制度、文化环境中，其评价面临着高度情景化和低普适性挑战。

目的:探讨抗生素骨水泥联合游离股前外侧组织瓣序贯治疗糖尿病足溃疡（DFU）创面的临床疗效。方法:采用回顾性观察性研究方法。遵义医科大学附属医院于2018年8月—2021年8月收治15例符合入选标准的DFU患者，其中男12例、女3例，年龄42~65岁，2型糖尿病病史5~19年。患者创面均合并局部骨骼、肌肉或肌腱缺损或外露，创面均于Ⅰ期清创后行抗生素骨水泥覆盖+Ⅱ期游离股前外侧嵌合穿支皮瓣（穿支皮瓣+肌瓣）或单纯游离股前外侧穿支皮瓣移植修复，拆除骨水泥并清创后的创面面积为9.0 cm×5.0 cm~20.0 cm×7.0 cm，皮瓣切取面积为10.0 cm×5.0 cm~22.0 cm×7.0 cm，肌瓣切取面积为5.0 cm×3.0 cm~8.0 cm×4.0 cm。组织瓣供区均直接缝合。随访时观察供区愈合情况、皮瓣成活情况。末次随访时，观察组织瓣质地、外形，双侧肢体有无新发溃疡，患者行走能力。结果:Ⅱ期术后随访8~21个月，供区均愈合良好，仅残留线性瘢痕；14例患者组织瓣完全成活，1例患者在Ⅱ期术后3周出现皮瓣部分坏死，经扩创+植皮后愈合。末次随访时，组织瓣质地良好、外形佳，患肢及对侧肢体无新发溃疡，患者日常行走功能无明显障碍。结论:采用抗生素骨水泥联合游离股前外侧组织瓣修复DFU创面，可快速控制感染，术后皮瓣成活率较高，患者日常行走功能无明显障碍。

目的:探讨结核抗原Ag85作用于巨噬细胞后对霍奇金淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响，以及结核感染在霍奇金淋巴瘤进展中的可能作用。方法:采用Transwell嵌套法建立霍奇金淋巴瘤细胞株KM-H2与人单核细胞白血病细胞株THP-1（模拟巨噬细胞）非直接接触共培养体系。KM-H2细胞单独培养为KM-H2组，Ag85干预的KM-H2细胞为KM-H2+Ag85组，KM-H2细胞与THP-1细胞共培养为KM-H2+THP-1组，Ag85干预的KM-H2细胞与THP-1细胞共培养为KM-H2+THP-1+Ag85组。采用CCK-8法检测各组KM-H2细胞的增殖情况，绘制生长曲线；采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况；采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞p53、c-myc、bcl-2、血管内皮生长因子受体3（VEGFR3）mRNA表达水平；采用蛋白质印迹法检测各组细胞bax、bcl-2蛋白的表达。结果:培养24、48 h后KM-H2+Ag85组细胞增殖能力均高于KM-H2组（均 P=0.001），而培养24、48、72 h后KM-H2+THP-1组细胞增殖能力均低于KM-H2组（均 P<0.05）；培养48、72 h后KM-H2+THP-1+Ag85组细胞增殖能力均低于KM-H2组（均 P<0.05），但与KM-H2+THP-1组相比，培养24、48 h后KM-H2+THP-1+Ag85组细胞增殖能力均增强，培养72h后两组间差异无统计学意义（ P>0.05）。KM-H2+Ag85组细胞凋亡率[（0.92±0.80）%]低于KM-H2组[（6.02±1.63）%]（ P<0.001），KM-H2+THP-1组细胞凋亡率[（8.57±0.57）%]高于KM-H2组（ P<0.05），而KM-H2+THP-1+Ag85组细胞凋亡率[（0.60±0.13）%]较KM-H2+THP-1组降低（ P<0.001）。KM-H2+Ag85组细胞bcl-2、VEGFR3 mRNA相对表达量均高于KM-H2组（ P值分别为0.018、0.017），c-myc mRNA相对表达量低于KM-H2组（ P=0.016），两组间p53 mRNA相对表达量差异无统计学意义（ P>0.05）；KM-H2+THP-1+Ag85组细胞p53 mRNA相对表达量低于KM-H2+THP-1组（ P=0.048），bcl-2、VEGFR3 mRNA相对表达量均高于KM-H2+THP-1组（ P值分别为0.016、0.021）。KM-H2+Ag85组细胞bax蛋白表达较KM-H2组降低（ P=0.019），bcl-2蛋白表达较KM-H2组增加（ P=0.001）；KM-H2+THP-1+Ag85组细胞bax蛋白表达较KM-H2+THP-1组降低（ P=0.011），两组间bcl-2蛋白表达差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:结核抗原Ag85可能通过影响巨噬细胞功能而抑制霍奇金淋巴瘤KM-H2细胞的凋亡，并增强其增殖活性。

目的:分析靶向乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)-T细胞对表达HBsAg的肝癌细胞的杀伤作用。方法:构建HBsAg-CAR基因，通过慢病毒载体将其转导入T细胞(健康捐献者的血液中获取)，制备HBsAg-CAR-T细胞。制备CD19-CAR-T细胞作为Mock组，未转导的T细胞为Untransduced组。上述三种效应细胞分别与肝癌细胞共同培养，检测三组细胞对肝癌细胞的杀伤作用及抗肿瘤细胞因子(肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ、白细胞介素2等)释放水平。建立免疫缺陷NPG小鼠PLC/PRF/5肝癌皮下成瘤模型，随机分组，尾静脉注射HBsAg-CAR-T细胞(实验组， n＝5)或未转导的T细胞(对照组， n＝5)，注射后第15天测量肿瘤体积。 结果:体外培养过程中，HBsAg-CAR-T细胞具有较高的增殖能力及存活率，CAR的表达稳定。与表达HBsAg的肝癌细胞共培养后，HBsAg-CAR-T组释放的抗肿瘤细胞因子明显高于Mock组及Untransduced组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；HBsAg-CAR-T组对HBsAg表达阳性的肝癌细胞的杀伤率明显高于Mock组及Untransduced组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。实验组NPG小鼠肿瘤体积为(250.8±62.8)mm 3，低于对照组小鼠肿瘤体积(757.5±102.6)mm 3，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:HBsAg-CAR-T细胞能够特异性识别并杀伤HBsAg阳性肝癌细胞，并释放高水平的抗肿瘤细胞因子。

目的:分析某社区老年人对社区嵌入式养老服务综合体中不同养老方式选择意愿及其影响因素。方法:采用自设问卷通过分层变比抽样法抽取广州市某社区500例老年人进行社区嵌入式养老服务综合体养老方式选择意愿调查，应用多分类logistic回归分析方法对数据进行分析。结果:社区嵌入式养老服务综合体涉及服务中，家庭、社区居家和社区机构养老选择意愿分别为57.6%、31.2%、11.2%。logistic回归分析显示，大学及以上学历（ OR=2.514）、由家属照料（ OR=3.345）或无人照料（ OR=4.229）、每月经济收入为3 000~5 000元（ OR=1.891）、每月为养老支付1 000~3 000元（ OR=2.572）、健康状况一般（ OR=3.716）的老年人更愿意选择社区居家养老服务（均 P<0.05）；退休前有较好职业（ OR=9.813）、每月经济收入3 000~5 000元（ OR=3.222）、养老支付能力在3 000元以上（ OR=6.902）、健康状况较差（ OR=1.000）、无人照料（ OR=4.386）的老年人更倾向选择社区机构养老（均 P<0.05）。 结论:老年人仍以家庭养老为主，但是利用社会化养老的意愿更加主动和积极，文化程度、职业、经济状况、有无照料者和健康状况是影响老年人对社区嵌入式养老服务综合体中不同养老方式选择的主要因素。

目的:研究电离辐射对胎肝与骨髓来源造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cells，HSPCs)的影响差异。方法:取14.5 d小鼠胎肝及8周龄小鼠骨髓，分选c-Kit +细胞体外接受 60Co单次5、10 Gy照射，检测HSPCs中细胞凋亡、线粒体活性氧(ROS)水平、集落形成能力、DNA损伤情况。将12只CD45.1背景的C57BL/6J小鼠按随机数表法分成骨髓组(BM)和胎肝组(FL)， 60Co全身照射，第1次4.5 Gy照射，间隔30 min后再进行第2次5 Gy剂量照射，6 h后进行移植，12周后检测嵌合率、谱系分化以及细胞周期。分选胎肝及骨髓的c-Kit +细胞检测线粒体压力。 结果:与骨髓HSPCs相比，照射后胎肝HSPCs的细胞凋亡比例显著升高( t＝16.21、12.27， P<0.05)，ROS水平显著增加( t＝68.72、18.89， P<0.05)；集落形成能力显著降低，在5 Gy时胎肝HSPCs成集落能力显著降低，照射剂量为10 Gy时完全不能形成集落( t＝12.41、15.67、9.46， P<0.05)；γ-H2AX免疫荧光染色结果显示，照射后胎肝HSPCs的DNA损伤更加严重，形成的Foci数量显著升高( t＝2.27、2.03， P<0.05)。这些结果表明，胎肝HSPCs对辐射更加敏感。移植结果显示，移植胎肝HSPCs的嵌合率低于骨髓细胞( t＝5.84， P<0.05)；在移植嵌合小鼠的骨髓与脾脏中，胎肝细胞组髓系细胞的比例高于骨髓细胞组，提示胎肝HSPCs体内重建能力低于骨髓HSPCs，并且更容易向髓系分化。细胞周期检测结果显示胎肝组S期比例显著高于骨髓组( t＝2.89， P<0.05)。线粒体压力结果显示胎肝HSPCs基础呼吸能力( t＝39.19， P<0.05)、质子泄漏( t＝6.64， P<0.05)、三磷酸腺苷(ATP)产生( t＝9.33， P<0.05)、耦联效率( t＝7.10， P<0.05)均高于骨髓c-Kit +细胞；呼吸储备能力( t＝5.53， P<0.05)低于骨髓细胞。 结论:利用多种方法对照射后胎肝及骨髓来源的HSPCs进行检测，明确了电离辐射对两种不同HSPCs功能的影响，为深入探索放射对不同发育阶段造血干细胞的影响奠定基础。

目的:构建靶向血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)可调控活性的小分子门控嵌合抗原受体T(smgCAR-T)细胞系统并在体外验证其抗肿瘤和可调节活性。方法:采用基因全长合成和磷酸钙转染法构建smgCAR-T及其阳性(CAR ＋-T)和阴性(CAR --T)对照细胞。同时构建表达VEGFR2的小鼠结直肠癌细胞(MCA38 VEGFR2＋)。验证并筛选构建成功的细胞后再体外验证CAR-T细胞靶向结合能力。在不同的效靶比下检测白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-γ的浓度来评估CAR-T细胞的体外分泌功能，用乳酸脱氢酶浓度评估CAR-T细胞的体外抗肿瘤活性。组间的比较采用 t检验或单因素方差分析。 结果:基因测序和流式细胞术证实CAR-T细胞和靶细胞构建成功。与对照组比较，CAR ＋-T细胞＋MCA38 VEGFR2＋组具有最强的靶细胞杀伤能力。在smgCAR-T细胞＋MCA38 VEGFR2＋组中，随着C16-(S)-3-甲基吲哚雷帕霉素(Rapalog)滴度升高靶细胞杀伤率逐渐升高；当Rapalog为40 nmol/L时杀伤率达到最大值，为(66.25±13.20)%。分别向smgCAR-T细胞＋MCA38 VEGFR2＋细胞组(A和B组)加入40 nmol/L的Rapalog后，在24 h时可观察到两组杀伤率出现同步升高[(44.25±6.24)%比(49.25±5.56)%， t＝1.197， P>0.05]，差异无统计学意义。在置换培养基后，再次添加了Rapalog的A组中观察到靶细胞杀伤率升高明显；而未再次添加Rapalog的B组中靶细胞杀伤率升高缓慢；此时，A和B组杀伤率差异有统计学意义[(89.00±3.16)%比(56.50±6.61)%， t＝8.873， P<0.01]。 结论:构建的smgCAR-T细胞在体外展现出一定的抗肿瘤活性，且其活性受小分子化合物Rapalog的可逆调控。