目的:观察肝细胞生长因子(HGF)对人毛囊生长的影响，并探讨其促进毛发生长的作用机制。方法:毛囊来源于中国医学科学院整形外科医院4例除皱术后患者废弃的正常头皮组织，分离单根毛囊进行体外器官培养。以常规培养为对照组，培养液中添加浓度为10 ng/ml的HGF作为实验组，显微镜下测量不同培养天数毛囊的生长长度；通过观察培养毛囊毛球部毛基质与毛乳头的形态，评价HGF对毛囊生长周期的影响。分离培养人毛囊上皮细胞，应用流式细胞术对其表面标志进行鉴定；以常规培养的毛囊上皮细胞为对照组，以培养基添加10 ng/ml的HGF处理48 h后的毛囊上皮细胞为实验组，收集细胞提取RNA，转录组测序分析HGF对毛囊上皮细胞基因表达的影响，应用real-time PCR对测序分析结果进行验证。各项定量数据以均值±标准差表示，2组间比较应用独立样本 t检验， P<0.05为差异具有统计学意义。 结果:随着体外培养时间的延长，毛囊生长趋于停止；毛囊体外培养7、10、14 d时，对照组毛囊生长长度(单位0.1 mm)分别为12.210±4.191、13.710±3.518、14.000±4.057，实验组HGF促进毛发生长，生长长度分别为16.700±5.143、18.800±4.917、23.000±7.196，差异具有统计学意义( t＝2.353， P<0.05； t＝2.962， P<0.01； t＝3.910， P<0.01)；分离培养的毛囊上皮细胞呈典型的铺路石样形态，表达上皮细胞表面标志分子CD49f；转录组测序结果显示，毛囊上皮细胞高表达上皮细胞标志基因KRT14、KRT5、KRT6A、CDH1、SOX9、CD49f，FPKM值分别为6 012±2 141、4 072±1 369、3 896±1 991、95.06±21.48、101.30±38.52、162.00±47.83；不表达或极低表达间质细胞标志基因THY1、DPP4、CDH2 (N-cadherin)、ACTA2、PDGFRA、COL1A1、COL3A1，FPKM值分别为0.740±0.825、0.632±0.765、0.000±0.034、1.674±1.235、0.000±0.014、2.526±3.531、0.000±0.015；与对照组相比，实验组经HGF处理后毛囊上皮细胞中改变的基因显著富集于细胞周期及细胞分裂相关生物学过程，相关基因的表达下调；Real-Time PCR验证显示CENPA、CDC20、UBE2C、CDK1、AURKB、NDC80分别降为对照组的0.689±0.053 ( t＝10.170, P<0.001)、0.676±0.121 ( t＝4.652, P<0.01)、0.761±0.148 ( t＝2.785, P<0.05)、0.599±0.153 ( t＝4.530, P<0.05)、0.706±0.113 ( t＝4.507, P<0.05)、0.579±0.092 ( t＝7.931, P<0.01)倍，差异具有统计学意义。 结论:HGF促进毛囊体外器官培养的生长并延长其生长时间；但在细胞水平上抑制毛囊上皮细胞增殖相关基因表达。

利用滋养外胚层（TE）细胞活检对植入前胚胎进行遗传学筛查已经有20多年的历史，但其在选择整倍体胚胎方面的优势仍然存在争议。近年来，胚胎废弃培养液中游离脱氧核糖核酸（cfDNA）的发现，为获得胚胎的细胞遗传学信息提供了一种潜在的无创替代方法。有研究报道胚胎cfDNA分析与TE、内细胞团（ICM）和整个囊胚（WB）的活检结果高度一致。然而，在cfDNA成为可靠的胚胎基因组信息来源应用于临床之前，仍然面临很多挑战。本文综述了基于培养液中的cfDNA的无创胚胎植入前遗传学检测（niPGT）的产生和现状，并对其局限性和未来前景进行了探讨，为niPGT应用于临床提供参考。

胚胎在体外生长过程中会向培养液中释放游离DNA（cell-free DNA，cfDNA）。cfDNA指游离于细胞外的DNA片段，是胚胎发育过程中细胞生理性凋亡的产物。利用cfDNA进行无创胚胎植入前遗传学检测（non-invasive preimplantation genetic testing，niPGT）具有无创、操作简便等优点，已在胚胎染色体非整倍体检测及单基因疾病诊断方面取得了初步进展。然而，目前niPGT临床应用的有效性、母源污染和cfDNA来源等问题仍存在争议。本文对niPGT在临床方面应用现状及cfDNA来源进行综述，并对其局限性及未来应用前景提出观点，为niPGT应用于临床实践提供参考。

目的 探究不同的保存方式对开封后体外受精(IVF)实验室试剂潜在胚胎毒性的影响.方法 收集2022年7-10月于广州市妇女儿童医疗中心生殖医学中心常规精液分析且各项参数正常的废弃精子标本18份.将待检测的开封后卵母细胞及胚胎处理液(G-MOPS)、洗精受精液(G-IVF)、卵裂胚培养液(G-1)、囊胚培养液(G-2)试剂每种分为3组,Ⅰ组:取1/3体积待测试剂在无菌条件下分装并用封口胶密封;Ⅱ组:取1/3体积待测试剂在无菌条件下分装不用封口胶密封;Ⅲ组:余下1/3体积待测试剂不分装用封口胶密封,每组6份标本.每种试剂的3组均于4℃保存,在开封时及开封15、30 d时,以质控合格的前一批次G-IVF为对照,所有试剂平衡过夜后进行人精子存活试验(HSMA),72 h后计算并比较精子存活指数.结果 开封时各组试剂的精子存活指数比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),且3个时间段每组试剂精子存活指数均＞0.85.开封15d各组试剂的精子存活指数比较:G-1的 Ⅰ 组＞Ⅱ 组[(95.82±0.58)％vs.(94.38±0.64)％],4 种待测试剂 G-MOPS、G-IVF、G-1、G-2 的 Ⅰ 组＞Ⅲ组[(95.75± 0.48)％vs.(93.90±0.74)％、(97.25±0.67)％vs.(95.03±0.58)％、(95.82±0.58)％vs.(92.75±0.86)％、(93.92±0.74)％vs.(91.11±1.15)％],差异均有统计学意义(P均＜0.05).开封30d各组试剂的精子存活指数比较:G-IVF、G-1、G-2的Ⅰ 组＞Ⅱ 组[(97.00±0.61)％vs.(95.72±0.70)％、(95.05±0.81)％vs.(93.33±0.69)％、(93.45±0.67)％vs.(92.22± 0.85)％],4 种待测试剂 G-MOPS、G-IVF、G-1、G-2 的 Ⅰ 组＞Ⅲ组[(94.88±0.83)％vs.(92.90±0.62)％、(97.00±0.61)％vs.(94.18±0.58)％、(95.05±0.81)％vs.(92.10±0.61)％、(93.45±0.67)％vs.(90.32±0.51)％],差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 无论哪组试剂开封后在4℃保存30 d仍无潜在的胚胎毒性.相同时间点,开封后的试剂分装并用封口胶密封的保存效果更好.

背景:对胎儿、胎鼠及成鼠神经干细胞培养已有大量研究,但成体人自体神经干细胞培养相关研究较少.目的:通过改进原代培养方法,从颅内动脉瘤破裂脑出血患者血肿腔周边废弃脑组织中培养和鉴定神经干细胞,并进行冻存与复苏研究,建立成人自体神经干细胞库.方法:收集3例动脉瘤破裂脑出血(2例大脑中动脉瘤及1例前交通动脉瘤)手术中血肿腔周边的废弃脑组织各约500 mg以上,采用细小组织块接种法进行原代无血清悬浮培养成人自体神经干细胞,倒置显微镜下观察细胞生长情况,免疫荧光细胞化学技术检测神经干细胞标志物巢蛋白(Nestin)的表达.培养获得的神经干细胞球以体积分数4%胎牛血清诱导其贴壁生长,待细胞增殖达到一定数量后传代培养.传代后部分细胞予以冻存建库,并复苏继续传代及诱导分化培养.体积分数10%胎牛血清诱导神经干细胞分化,通过免疫荧光细胞化学技术检测胶质纤维酸性蛋白(标记星形胶质样细胞),β-tubulinⅢ(标记神经元样细胞),SOX10(标记少突胶质样细胞)蛋白的表达来测定神经干细胞的分化能力.结果与结论:改进培养方法后,3例患者废弃脑组织中,在无血清培养液中均可形成Nestin阳性表达的神经球,并可在体外大量扩增和连续传代.在给予体积分数10%FBS条件下神经球可分化为神经元样细胞、少突胶质细胞及星形胶质细胞,即β-tubulinⅢ,SOX10及胶质纤维酸性蛋白阳性表达.经传代培养至5代后,仍呈Nestin阳性即可维持其神经干细胞特征.冻存细胞复苏后生长状态良好且呈Nestin阳性,可继续传代扩增.结果表明,从动脉瘤破裂脑出血患者不同脑区(颞极及额底)血肿腔周边废弃脑组织中可成功培养获得自体神经干细胞,并可向神经元样细胞、少突胶质样细胞及星形胶质样细胞分化,使自体神经干细胞移植促进神经功能修复从实验室到临床应用成为可能.

目的 建立胚胎和子宫内膜共培养模型,探讨人自体单个核细胞(PBMCs)对培养液中白血病抑制因子(LIF)和胚胎表面LIF受体(LIFR)表达的影响.方法 于2015年5月至2016年5月期间,选择在郑州大学第二附属医院行辅助生殖技术助孕反复种植失败患者的内膜12例,分离出子宫内膜细胞.收集其外周血分离出PBMCs.收集2009年至2014年行辅助生殖技术助孕成功且分娩的患者的废弃胚胎.研究分为实验组(内膜-胚胎-PBMCs共培养)和对照组(内膜-胚胎共培养).共培养系统中加入含雌孕激素培养液当日为培养第0日.应用酶联免疫法检测培养后第1、第3、第5日两组培养液中LIF的浓度;应用免疫荧光方法检测实验组和对照组培养第5、第6日所形成囊胚表面LIF受体的表达情况,用Image J软件分析免疫荧光图像.结果 培养第3日实验组和对照组培养液中LIF浓度差异无统计学意义(P＞0.05),培养第5日时,实验组培养液中LIF浓度[(2 840.02±240.51) ng/L]明显高于对照组[(2 411.35±311.63) ng/L] (P=0.001).囊胚LIFR的免疫荧光吸光度(A)值实验组大于对照组(0.255 8±0.037 2比0.190 6±0.040 4,P=0.001).结论 在体外子宫内膜-胚胎共培养模型中,人自体PBMCs能提高子宫内膜LIF的表达,同时促进囊胚表面LIFR受体的形成,在胚胎着床过程中起重要作用.

目的 探讨辅助生殖技术中胚胎对培养液中葡萄糖和丙酮酸的吸收与胚胎囊胚形成的相关性.方法 选择2018年9月—2019年9月在首都医科大学附属北京妇产医院行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的受精第3天、细胞数在5细胞及以上、分级2级以上的胚胎进行囊胚培养,将囊胚培养后形成囊胚的废弃胚胎培养液作为囊胚组,囊胚培养后未形成囊胚的废弃胚胎培养液作为非囊胚组,分别用比色法和荧光法检测2组废弃培养液中葡萄糖和丙酮酸的浓度并进行组间比较.结果 囊胚组培养第3天培养液中葡萄糖浓度低于非囊胚组(P<0.05),丙酮酸浓度与非囊胚组比较差异无统计学意义(P>0.05).囊胚组培养第5天培养液中葡萄糖、丙酮酸浓度与非囊胚组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 胚胎在培养第3天对葡萄糖高利用与囊胚形成有关,培养第3天对葡萄糖高利用提示胚胎有高发育潜能.胚胎在培养第3天及培养第5天对丙酮酸的利用与囊胚形成的关系尚不明确.

目的 探索人羊膜间充质干细胞来源外泌体(hAMSC-Exos)的分离、纯化与鉴定方法,为外泌体的生物学功能研究奠定基础.方法 由废弃的羊膜提取间充质干细胞;采取改良超速离心法分离、纯化培养液上清中的hAMSC-Exos;透射电镜观察、纳米粒子跟踪分析技术(NTA)、Western blot和流式细胞术用于hAMSC-Exos的鉴定外泌体.结果 成功用改良超速离心法分离出hAMSC-Exos,透射电镜(TEM)下观察呈中间凹陷的茶杯样结构;NTA结果显示样品直径符合外泌体直径大小;Western blot和流式细胞术证实外泌体表面特异性蛋白CD9、CD63、CD81表达阳性.结论 建立了hAMSC-Exos的提取纯化及鉴定方法,为它后续的研究提供依据.

目的 分析胚胎植入前无创基因检测对胚胎染色体异常的筛查效能.方法 选取2017年1月至2019年10月银川市妇幼保健院诊治的86例接受体外受精-胚胎移植且染色体异常高发患者作为研究对象,收集上述病例受精培养后第5日不适于移植和冷冻且可用于活检的108枚废弃囊胚及其培养液进行基因检测.比较两组全基因扩增成功率、染色体一致性、高通量测序结果,通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析植入前胚胎无创基因检测对胚胎染色体异常的筛查效能.结果 囊胚活检细胞及其对应培养液的全基因扩增成功率、染色体一致性比较,差异均无统计学意义(P>0.05).囊胚活检细胞与其对应培养液的染色体数目异常检出率,缺失、重复>16Mb检出率,异常和缺失、重复>16Mb检出率,总异常检出率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).经ROC曲线分析,植入前胚胎无创基因检测筛查胚胎染色体异常的AUC为0.835.在植入前胚胎无创基因检测中,女方高龄、反复植入和男方染色体异常均是染色体异常的影响因素,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 胚胎植入前行无创基因检测可评估胚胎染色体情况,筛查胚胎染色体异常的效能较高,值得进一步研究应用.

目的 比较不同年龄患者胚胎氨基酸代谢之间的差异,揭示不同年龄患者胚胎的氨基酸代谢规律,为改善胚胎培养环境、获得更优质胚胎从而提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功率提供依据.方法 选择接受IVF-ET治疗的患者,收集培养过胚胎的废弃培养液微滴,按女方患者的年龄分为<35岁组、35～39岁组、≥40岁组,每年龄组各收集20份培养液标本,共60份标本,另外选择同一时期同样培养环境下未培养过胚胎的培养液为空白对照组.采用高效液相色谱法(HPLC)检测标本中20种游离氨基酸的含量,比较不同年龄组培养液中氨基酸含量的差异.结果 3组胚胎培养液中天冬氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、苏氨酸、组氨酸、丙氨酸、牛磺酸、丙氨酰谷氨酰胺、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸以及赖氨酸含量比较差异有统计学意义(P均<0.05).<35岁组胚胎培养液中氨基酸减少量低于≥40岁组.<35岁组胚胎培养液中氨基酸转换量低于≥40岁组.结论 患者的年龄不同,其胚胎的氨基酸代谢是有差异的,患者的年龄越大,其胚胎的氨基酸减少量和氨基酸转换量越大.