目的:验证循环微小核糖核酸(microRNA,miRNA)-124的稳定性、组织特异性及其检测铅神经毒性的灵敏性,为循环miR-124用于铅神经毒性评价提供依据.方法:采用Zea-Longa线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,采集血液样本离心、分装后立即检测或在室温、2～8℃和-70～-90℃条件下储存不同时间后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-124的表达;分别使用对乙酰氨基酚(1250 mg/kg)、异丙肾上腺素(2.5 mg/kg)和庆大霉素(80 mg/kg)建立大鼠肝毒性、心脏毒性和肾毒性模型,采集血液样本检测并比较造模前后循环miR-124的变化;使用醋酸铅(300、600 mg/kg)建立大鼠神经毒性模型,采用酶联免疫吸附测定方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测白细胞介素(interleukin,IL)-10、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的变化,比较检测到细胞因子和循环miR-124含量变化的时间评估其灵敏性.结果:以新鲜血液样本作为对照,血液样本室温保存6 h,2～8℃保存24 h,-70～-90℃保存36d以及3次冻融后循环miR-124仍保持稳定,稳定性可以支持实验室需求;循环miR-124在大鼠肝毒性、心脏毒性和肾毒性模型中均无明显改变,具有良好的组织特异性;与细胞因子相比,循环miR-124可以更灵敏地检测铅暴露引起的神经炎症.结论:循环miR-124具有良好的稳定性、组织特异性和灵敏性,可作为评价铅神经毒性的潜在的生物标志物.

目的 观察急性脑梗死(ACI)患者循环miR-124表达水平的变化及其与脑梗死体积和神经功能缺损程度的关系和其诊断价值.方法 选择ACI患者90例为观察组,另选取同期体检健康者40例作为对照组;按梗死体积将ACI患者分为3个亚组:小梗死组(<5 cm3,n=38),中梗死组(5~10 cm3,n=31),大梗死组(>10 cm3,n=21);根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,将ACI患者分为3个亚组:轻度组(≤6分,n=30)、中度组(7~14分,n= 34)、重度组(≥15分,n= 26).通过定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测循环miR-124相对表达水平;分析miR-124表达水平与脑梗死体积、神经功能缺损严重程度的关系.结果 观察组miR-124相对表达水平(2.93 ± 1.21)明显高于对照组(1.09 ± 0.55)(t=10.198,P<0.01);不同脑梗死体积3个亚组间miR-124相对表达水平比较有明显差异(F=20.963,P<0.01),即脑梗死体积越大,miR-124相对表达水平越低;相关性分析显示,miR-124相对表达水平与梗死体积呈负相关(r=-0.564,P<0.01);不同NIHSS评分3个亚组间 miR-124相对表达水平比较无明显差异(F= 1.170,P>0.05).结论 ACI患者循环miR-124水平明显升高,且其水平与脑梗死体积密切相关.

目的:对自发性高血压大鼠(SHR)行肾脏去交感神经术(RSD),检测其降压效果以及血和主动脉组织中miRNAs,探讨SHR大鼠肾脏去交感神经与主动脉miRNA相关性.方法:SHR对照组,SHR手术组,正常大鼠(WKY)对照组和WKY手术组,20只/组,SHR对照组和WKY对照组均为假手术组,SHR手术组和WKY手术组接受RSD.记录所有大鼠术前和术后4、8、16和24周尾动脉血压,采用RT-PCR检测血清miR-NAs及24周主动脉组织miRNAs(miR-150、miR-155、miR-124、miR-135a和miR-143/145).结果:4组大鼠不同时间点的血压、miRNAs均有差别(P<0.05),与SHR对照组比,SHR手术组的收缩压、舒张压和miR-NAs较低(P<0.05),同与WKY对照组比,WKY手术组的收缩压和舒张压较低(P<0.05),WKY对照和WKY手术组的miRNAs无统计学意义(P>0.05).结论:RSD可降低SHR血压,可能与降低主动脉组织和循环血清miRNAs表达有关.

MicroRNA是一类长度为18～24碱基的非编码小分子RNA,作为基因表达转录后调控因子,涉及多种生理、病理过程,包括调节脂质代谢和动脉粥样硬化.通过机体代谢,miR-126、miR-155、miR-221/222、miR-124、miR-145、miR-133、miR-663、miR-29等可参与动脉粥样硬化的形成和发展.目前有超过30种miRNA,包括miR-33、miR-122、miR-223和miR-27a/b也在调节脂肪酸生物合成及氧化,胆固醇的流出等脂质代谢中起重要作用.此外,“循环miRNA”的发现为其成为动脉粥样硬化性疾病的新型生物标志物提供可能.本综述通过探讨miRNA调节脂质代谢途径,参与动脉粥样硬化的发生、发展过程,为动脉粥样硬化疾病提供新的分子学观点并为深入研究其治疗靶点提供理论依据.

背景:骨关节炎是多因素介导的复杂疾病,发病机制尚待挖掘,随着基因层面的不断深入研究,非编码核糖核酸调控作用显现并得以研究.通过检测软骨细胞退变miRNA表达谱变化有助于更好地理解骨软骨细胞退变的分子机制,并为骨关节炎的诊断和治疗开辟新的途径.目的:探讨基质细胞衍生因子1刺激骨关节炎软骨细胞后miRNA表达谱变化,为基因层面延缓关节软骨退变提供实验基础.方法:对10例膝关节骨关节炎患者于全膝关节置换手术过程中截骨后残留的软骨组织进行软骨细胞培养,随机分为实验组与对照组,两组细胞培养基为含体积分数10％胎牛血清及青链霉素双抗的高糖DMEM培养基.实验组培养基中另外加入100μg/L基质细胞衍生因子1,对照组不做任何处理.两组软骨细胞培养48 h后,进行下一步实验用于miRNA芯片筛选和实时定量PCR验证.软骨组织标本取材前皆告知患者并征得同意,该研究符合《医疗机构管理条例》相关要求,获得昆明医科大学第一附属医院伦理委员会批准.结果与结论:miRNA基因芯片初筛共有84个miRNAs发生变化,其中70个miRNAs上调,14个miRNAs下调.通过基因芯片筛选差异变化的miRNA,对变化显著的7个miRNA(miR-146a-5p、miR-124-3p、miR-130a-3p、miR-185-5p、miR-221-3p、miR-126-3p)进行qRT-PCR实验验证,其中miR-146a-5p、miR-124-3p及miR-126-3p的qRT-PCR结果与基因芯片结果一致.结果表明,基质细胞衍生因子1刺激骨关节炎软骨细胞后循环miRNA表达谱出现明显变化,miR-146a-5p、miR-124-3p及miR-126-3p可能与基质细胞衍生因子1刺激骨关节炎SDF-1/CXCR4信号通路反应有关.

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者外周血微RNAs(miRNAs)表达情况及其与炎性因子间的相关性.方法 选取2018年6月至2019年8月该院收治的首次发病的ACI患者316例为ACI组,另选取同期体检的健康志愿者60例为对照组.采用定量逆转录PCR(qRT-PCR)测定各组血浆miRNA-124、miRNA-128b、miRNA-153、miRNA-424,采用ELISA测定血清炎性因子[白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)].结果 ACI组血浆miRNA-124、miRNA-424水平明显低于对照组,血浆miR-NA-128b、miRNA-153及血清IL-6、IL-8、TNF-α、CRP水平明显高于对照组(P<0.05).中、重度组ACI患者血浆miRNA-128b、miRNA-153及血清IL-6、IL-8、TNF-α、CRP水平明显高于轻度组,且重度组明显高于中度组(P<0.05);中、重度组ACI患者血浆miRNA-124、miRNA-424水平明显低于轻度组,且重度组明显低于轻度组(P<0.05).大、中梗死灶组ACI患者血浆miRNA-128b、miRNA-153及血清IL-6、TNF-α、CRP水平高于小梗死灶组,且大梗死灶组高于中梗死灶组(P<0.05);大、中梗死灶组ACI患者血浆miRNA-124、miRNA-424表达水平明显低于小梗死灶组,且大梗死灶组明显低于中梗死灶组(P<0.05).ACI患者血浆miRNA-124、miRNA-424表达水平与血清IL-6、IL-8、TNF-α、CRP水平呈负相关,miRNA-128b、miRNA-153表达水平与血清IL-6、IL-8、TNF-α、CRP水平呈正相关(P<0.05).结论 ACI患者循环miRNAs存在差异表达,miR-NA-124、miRNA-424呈低表达,而miRNA-128b、miRNA-153呈高表达,且与炎性因子水平密切相关,可作为ACI病情评估的潜在生物标志物.

为评估长链非编码RNA 核富集转录体1(long non-coding RNA nuclear enriched abundant transcript 1,lnc-NEAT1)/miR-124轴对儿童哮喘急性发作风险的预测作用,并探讨其与肺部通气功能、疾病严重程度及炎症的关联,连续纳入急性发作期哮喘患儿95例、缓解期哮喘患儿95例及健康对照儿童90例.哮喘患儿和健康儿童均进行肺部通气功能检测,并采集其外周血以检测血浆中lnc-NEAT1和miR-124的表达水平及炎性因子(TNF-a、IL-1β、IL-6和IL-17)水平,评估急性发作期哮喘患儿的疾病严重程度.结果显示,lnc-NEAT1/miR-124轴在急性发作期哮喘患儿中的表达量较缓解期哮喘患儿和健康儿童高(P＜0.001).受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线表明,lnc-NEAT1/miR-124轴可很好地区分急性发作期哮喘患儿与健康儿童[AUC 0.894,95％可信区间(confidence interval,CI)0.850～0.938]、缓解期哮喘患儿(AUC 0.830,95％CI 0.774～0.886),且能区分缓解期哮喘患儿与健康儿童(AUC 0.642,95％CI 0.562～0.722).在急性发作期哮喘患儿中,lnc-NEAT1/miR-124轴表达量与第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in 1 second,FEV1)/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)和FEV1％预计值均呈负相关(P＜0.001),与TNF-a、IL-1β、IL-6和IL-17呈正相关(P＜0.05),与急性发作期哮喘严重程度呈正相关(P＜0.001).在缓解期哮喘患儿和健康儿童中,lnc-NEAT1/miR-124轴表达量与肺通气功能无关联,而与TNF-a、IL-1β、IL-6和1L-17呈正相关(P＜0.05).该研究表明,循环lnc-NEAT1/miR-124轴在哮喘患儿中呈高表达,可预测儿童哮喘急性发作的风险,且其高表达与急性发作期哮喘患儿较差的肺通气功能、疾病严重程度和炎症水平相关.

目的 探讨不同剂量瑞舒伐他汀对卒中后认知障碍(非痴呆)(PSCIND)患者循环相关miRNA的影响.方法 纳入2018年1月至2020年3月于我院住院治疗的64例PSCIND患者,随机分为低剂量组、高剂量组,各32例.另纳入20例不耐受他汀类药物或对他汀类药物过敏的PSCIND患者为对照组.分别于入组时(T0)、治疗后3个月(T1)检测三组患者血清认知相关miRNA(miR-124、miR-134和miR-138)水平,并评估认知状态(MoCA评分和MMSE评分).结果 高剂量组ΔMoCA(U=2.140,P=0.032)和 ΔMMSE(U=2.041,P=0.041)均高于对照组.高剂量患者T1时MoCA较T0时明显升高(t=2.107,P=0.039).T1时低剂量组miR-134(t=2.255,P=0.027)、高剂量组miR-124(t=3.473,P<0.001)、miR-134(t=3.951,P<0.001)和miR-138(t=2.309,P=0.024),以及对照组miR-124(t=2.155,P=0.035)水平较T0时明显下降.T1时高剂量组患者miR-134水平明显高于对照组(t=2.098,P=0.039).低剂量组、高剂量组和对照组在ΔmiR-124(t低vs.对=2.953,P=0.004;t高vs.对=5.724,P<0.001;t低vs.高=3.765,P<0.001)、ΔmiR-134(t低vs.对=2.988,P=0.004;t高vs.对=4.785,P<0.001;t低vs.高=3.113,P=0.003)和ΔmiR-138(t高vs.对=4.024,t低vs.高=3.431,P<0.001)均存在明显差异,以高剂量组最为明显.相关性分析提示,高剂量瑞舒伐他汀治疗与 ΔmiR-134相关性最大(r=-0.304,P=0.005).结论 瑞舒伐他汀有助于改善PSCIND患者认知功能水平以及下调认知障碍相关miRNA浓度.

微RNAs(miRNAs)是参与机体许多重要生理过程的调节因子,循环miRNAs是存在于血液或其他体液中的细胞外游离miRNAs.近年来研究发现循环miRNA在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中表达失调,可作为潜在的临床生物标志物,如血清miR-181、miR-124、miR-1208和miR-125b水平异常在ALL的诊断、耐药性、治疗药物毒性和预后评估等方面有良好的应用前景.但ALL相关miRNAs的临床意义和检验参考值的建立仍需大规模临床试验进一步研究.