目的 研究复方一枝蒿颗粒体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用及对病毒诱导激活先天免疫信号通路的影响.方法 Viral ToxGlo法测定复方一枝蒿颗粒体外抗呼吸道合胞病毒的作用;Western Blotting法测定先天免疫通路蛋白表达的水平;流式微球技术测定细胞因子表达的水平.结果 复方一枝蒿颗粒在体外对呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用,且药物浓度与抗病毒作用呈量效关系;复方一枝蒿颗粒可促进先天免疫信号通路靶点核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α、NF-κB p65蛋白的表达水平,降低TANK结合激酶1(TBK1)、丝氨酸/苏氨酸激酶的表达水平,对RSV病毒诱导表达的炎症因子白介素-2(IL-2)、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α有明显的干预作用,表现出下调趋势.结论 复方一枝蒿颗粒可通过作用于先天免疫信号通路TBK1/NF-κB发挥免疫调节作用,从而达到抗呼吸道合胞病毒的作用.

目的:观察聚嘧啶束结合蛋白相关剪切子（PSF）高表达对低浓度4-羟基壬烯醛（4-HNE）诱导下人视网膜微血管内皮细胞（HRMECs）的影响，初步探讨其可能存在的机制。方法:将体外培养的对数生长期HRMECs分为4-HNE处理组、PSF高表达联合4-HNE组（PSF+4-HNE组）、PSF高表达+核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）联合4-HNE组（PSF+ML385+4-HNE组）、磷酸肌醇3激酶抑制剂LY294002预处理后4-HNE联合PSF组（LY294002+4-HNE+PSF组）。4-HNE处理组、PSF+4-HNE组、PSF+ML385+4-HNE组细胞培养基加入10 μmmol/L 4-HNE刺激12 h，PSF+4-HNE组、PSF+ML385+4-HNE组应用转染试剂脂质体2000将1.0 μg pcDNA-PSF真核表达质粒导入细胞中转染24 h后，PSF+ ML385+ 4-HNE组加入ML385（5 μmol/L）预处理48 h。LY294002+4-HNE+PSF组，除采用LY294002预处理外，4-HNE浓度、刺激时间以及质粒转染时间同前。Transwell检测PSF对HRMECs迁移能力的影响；Matrigel体外三维成型法检测PSF对HRMECs管腔形成的影响；流式细胞仪检测PSF对HRMECs中活性氧（ROS）水平的影响；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测PSF、Nrf2、血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白相对表达量以及磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（pAkt）蛋白相对表达量。两组间比较采用 t检验。 结果:4-HNE处理组、PSF+4-HNE组细胞数、迁移细胞数、完整管腔形成数分别为（1.70±0.06）、（0.80±0.13）个，（24.00±0.58）、（10.00±0.67）个和（725.00±5.77）、（318.70±12.13）个。两组细胞数、迁移细胞数、完整管腔形成数比较，差异均有统计学意义（ t=12.311、15.643、17.346， P<0.001）。流式细胞仪检测结果显示，4-HNE处理组、PSF+4-HNE组、PSF+ML385+4-HNE组ROS水平分别为816.70±16.67、416.70±15.44、783.30±17.41；组间两两比较，差异均有统计学意义（ t=16.311、14.833、18.442， P<0.001）。Western blot检测结果显示，4-HNE处理组、PSF+4-HNE组、LY294002+4-HNE+PSF组HRMECs中pAkt、Nrf2、HO-1蛋白相对表达量分别为0.08±0.01、0.57±0.04、0.35±0.09，0.17±0.03、1.10±0.06、0.08±0.11，0.80±0.14、2.50±0.07、0.50±0.05。与PSF+4-HNE组比较，LY294002+4-HNE+PSF组pAkt、Nrf2、HO-1蛋白相对表达量显著下降，差异均有统计学意义（ t=17.342、16.813、18.794， P<0.001）。 结论:PSF高表达通过活化磷酸肌醇3激酶/Akt通路上调HO-1的表达，从而抑制低浓度4-HNE诱导的HRMECs增生迁移和管腔形成。

目的:评价自拟停颤汤联合多巴丝肼片治疗中早期帕金森病（Parkinson disease，PD）阴虚风动证临床疗效。方法:将符合入选标准的2020年1月－2021年3月山东省潍坊市中医院84例中早期PD患者按随机数字表法分为2组，每组42例。对照组口服多巴丝肼片，观察组在对照组基础上加用自拟停颤汤。2组均治疗8周。分别于治疗前后进行中医证候评分，采用统一帕金森病评定量表（Unified Parkinson Disease Rating Scale，UPDRS）评估PD病情严重程度；采用ELISA法测定血清同型半胱氨酸（Hcy）、高迁移率族蛋白-1（HMGB1）、IL-6、IL-2、P物质及多巴胺（DA）水平；采用HPLC法检测谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）水平；采用超微量分光光度计测定OD值，以2 -??Ct法计算微小核糖核酸-124（miR-124）和微小核糖核酸-425（miR-425）相对表达量，评价临床疗效。 结果:观察组总有效率为88.1%（37/42）、对照组为73.8%（31/42），2组比较差异有统计学意义（ Z=-2.56， P=0.011）。观察组治疗后动作评分、震颤评分、上肢协调评分、步态评分及UPDRS评分低于对照组（ t值分别为7.23、5.80、4.25、4.17、15.00， P值均<0.001）。治疗后，观察组血清Hcy、HMGB1、IL-6、IL-2水平低于对照组（ t值分别为12.16、10.67、23.11、9.95， P<0.01），Glu［（71.28±6.46）μmol/L比（56.91±5.87）μmol/L， t=10.67］、GABA［（292.39±15.46）μmol/L比（248.51±14.38）μmol/L， t=13.47］水平高于对照组（ P<0.01）；P物质［（3.54±0.43）mg/L比（5.61±0.52）mg/L， t=19.88］低于对照组（ P<0.01），DA［（79.24±5.15）ng/L比（70.15±5.36）ng/L， t=7.93］水平及miR-124［（4.57±0.74）比（2.81±0.47）， t=13.01］、miR-425［（3.94±0.83）比（2.73±0.97）， t=6.14］相对表达量高于对照组（ P<0.01）。 结论:自拟停颤汤联合多巴丝肼片可通过升高PD患者血清miR-124和miR-425相对表达量，促进DA释放，减轻大脑氧化应激反应，降低血清炎性细胞因子水平，改善症状，保护神经细胞。

目的:探讨棕榈酸（PA）是否可诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞发生铁死亡。方法:将小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞分为正常对照组、PA组（1.0 mmol/L）、PA+凋亡抑制剂（Z-VAD-FMK）组（5 μmol/L）、PA+铁死亡抑制剂（Fer-1）组（5 μmol/L）、PA+坏死抑制剂（Nec-1）组（5 μmol/L），每组设置3个平行组。采用CCK8法检测细胞存活率，电镜观察细胞超微结构改变，FerroOrange试剂盒检测细胞内Fe 2+水平，丙二醛（MDA）试剂盒检测MDA水平，流式法检测活性氧（ROS）水平，实时荧光定量PCR法检测凋亡基因半胱氨酸蛋白酶3（ caspase3）、坏死基因受体结合丝氨酸苏氨酸激酶3（ RIPK3）、铁死亡相关基因长链脂酰辅酶A合成酶4（ ACSL4）、花生四烯酸-15-脂加氧酶（ ALOX15）、前列腺素内过氧化物合酶2（ Ptgs2）、铁蛋白重链（ FTH）、铁蛋白轻链（ FTL）和谷胱甘肽过氧化物酶4（ GPX4）的mRNA表达水平，Western blotting法检测活化型caspase3（cleaved caspase3）、RIPK3、ACSL4、ALOX15和Ptgs2的蛋白表达水平。两组间比较采用 t检验。 结果:与PA组相比，PA+Z-VAD-FMK组、PA+Fer-1组和PA+Nec-1组MIN6的存活率均更高（ P<0.01）。PA组MIN6细胞电镜下可见凋亡、坏死、及铁死亡相关的形态学特征。与对照组相比，PA组MIN6细胞内Fe 2+相对荧光强度、MDA水平、总ROS均更高； caspase3、 RIPK3、 ACSL4、 Ptgs2、 ALOX15的mRNA相对表达量均更高， FTH和 GPX4的mRNA相对表达量均更低；cleaved caspase3、RIPK3、ACSL4、ALOX15和Ptgs2的蛋白相对表达量均更高（均 P<0.01）。与PA组相比，PA+Fer-1组Fe 2+相对荧光强度、MDA水平、总ROS均更低； ACSL4、 Ptgs2、 ALOX15的mRNA相对表达量均更低， FTH和 GPX4的mRNA相对表达量均更高；ACSL4、ALOX15和Ptgs2的蛋白相对表达量均更低（均 P<0.01）。 结论:PA可诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞发生铁死亡。

目的:探讨miR-320a调控水通道蛋白4(AQP4)对阿尔茨海默病细胞模型的影响。方法:采用神经生长因子(NGF)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)为神经元细胞，观察PC12组和神经元细胞组的细胞形态。采用β淀粉样蛋白(Aβ)处理诱导的神经元细胞，构建AD细胞模型。根据处理因素的不同将培养细胞分为对照组(不做特殊处理)、miR-320a模拟剂组(加入miR-320a模拟剂50 nmol/L)、miR-320a抑制剂组(加入miR-320a抑制剂50 nmol/L)、Aβ处理组(加入Aβ)、Aβ+miR-320a模拟剂组(加入Aβ+miR-320a模拟剂50 nmol/L)和Aβ+miR-320a抑制剂组(加入Aβ+miR-320a抑制剂50 nmol/L)。采用CCK8法检测细胞活力。利用RT-PCR检测目标基因AQP4、miR-320a、Bax、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)mRNA的相对表达。采用免疫印迹法检测目标基因AQP4、Bax、Bcl-2蛋白的相对表达。结果:PC12经NGF诱导后，与PC12组比较，神经元细胞组泛素羧基末端水解酶-L1(Uch-L1)基因表达明显下调，神经丝蛋白(NFP)、微管结合蛋白2(MAP2)、AQP4基因表达明显上调，MAP2和AQP4蛋白相对表达明显增高。造模后，与对照组比较，Aβ处理组神经元细胞凋亡增加，细胞活力明显减低，miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显减少，Bax的mRNA及蛋白表达明显增加。与Aβ处理组比较，Aβ+miR-320a模拟剂组，细胞活力明显增加，miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显增加、Bax的mRNA及蛋白表达明显降低。与Aβ+miR-320a模拟剂组比较，Aβ+miR-320a抑制剂组细胞活力明显降低，miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显降低，Bax的mRNA及蛋白表达明显升高。结论:miR-320a可以上调AD细胞模型中AQP4的表达，减少细胞凋亡，增加细胞存活率。

目的:探究酪氨酸激酶结合蛋白(TYROBP)通过磷酯酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号通路神经炎症及自噬过程的影响。方法:15月龄的C57BL/6J、 TYROBP－/－、淀粉样前体蛋白/早老素1( APP/ PS1)转基因雄性小鼠各10只，分为3组。八臂迷宫实验和新物体识别实验检测动物的学习记忆能力；免疫荧光检测小胶质细胞、NOD样受体家族3(NLRP3)炎症小体的活化情况；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达情况；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3、裂解的半胱氨酸蛋白酶1(cleaved Caspase-1)、选择性自噬接头蛋白1(SQSTM1)、微管相关蛋白轻链3B Ⅱ(LC3B Ⅱ)、TYROBP、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白的表达水平。 结果:与同月龄C57BL/6J小鼠相比， APP/ PS1小鼠学习记忆能力显著降低(均 P<0.05)；脑组织NLRP3炎症小体活化增加( P<0.05)，小胶质细胞呈激活状态，炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均增加(均 P<0.05)；自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、SQSTM1表达增加(均 P<0.05)；TYROBP、p-PI3K、p-AKT表达增加(均 P<0.05)。与同月龄C57BL/6J小鼠相比， TYROBP－/－小鼠炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白表达下降(均 P<0.05)，LC3B Ⅱ、SQSTM1、p-PI3K、p-AKT表达减少(均 P<0.05)。 结论:TYROBP可能通过激活PI3K/AKT信号通路促进炎症反应、抑制自噬过程，参与AD的发生发展。

目的:通过网络药理学研究半枝莲-党参药对治疗膀胱癌的作用机制。方法:查询中药系统药理学数据库分析平台（TCMSP）筛选半枝莲-党参药对的药物成分，使用Swiss Target Prediction预测药物成分的作用靶点；运用GeneCards获取膀胱癌的疾病靶点，利用venny 2.1获取交集靶点。使用STRING进行蛋白-蛋白相互作用分析并使用Cytoscape构建"药物-靶点-通路"网络，利用Metascape进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析。将裸鼠随机分为模型组和治疗组，建立膀胱癌小鼠模型。模型组小鼠灌胃等剂量溶剂，治疗组建模后第8天灌胃半枝莲-党参药对0.2 ml，剂量为342.86 mg/kg，2次/d。建模后第28天，测量裸鼠瘤体大小，并采用酶联免疫吸附试验法检测前列腺素G/H合成酶2（PTGS2）、PTGS1、核受体辅活化子2（NCOA2）、维甲酸X受体α（RXRA）、孕酮受体（PGR）、丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、网状内皮增生病毒癌基因同源物A（RELA）、蛋白激酶B1（Akt1）水平。结果:半枝莲-党参药对的45个药物成分通过多条通路直接作用于187个疾病靶点治疗膀胱癌，主要核心成分为槲皮素、木犀草素、汉黄芩素、7-甲氧基-2-甲基异黄酮、黄芩素、β-谷甾醇和豆甾醇等，关键靶点为PTGS2、PTGS1、NCOA2、RXRA、PGR、MAPK1、RELA和Akt1等。GO富集分析显示，生物过程主要涉及对激素的反应、细胞对脂质的反应、对外来刺激的反应、对细菌分子的反应等，细胞组分主要涉及转录调控复合体、膜筏、膜微区、RNA聚合酶Ⅱ转录调控复合物等，分子功能主要涉及转录因子结合、DNA结合转录因子结合、RNA聚合酶Ⅱ特异性DNA结合转录因子结合、核受体活性、配体激活的转录因子活性等。KEGG通路富集分析显示半枝莲-党参药对治疗膀胱癌的主要信号通路为晚期糖基化终产物及其受体（AGE-RAGE）、白细胞介素-17（IL-17）、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）、肿瘤坏死因子（TNF）、MAPK、缺氧诱导因子-1（HIF-1）、细胞凋亡、p53、Toll样受体等。动物实验验证显示，半枝莲-党参药对能够明显改善裸鼠的瘤体大小，同时也能改善PTGS2、PTGS1、NCOA2、RXRA、PGR、MAPK1、RELA、Akt1表达水平。结论:半枝莲-党参药对主要通过调节AGE-RAGE、IL-17、PI3K-Akt、TNF、MAPK、HIF-1、细胞凋亡、p53、Toll样受体等信号通路的PTGS2、PTGS1、NCOA2、RXRA、PGR、MAPK1、RELA、Akt1等靶点治疗膀胱癌。

目的:筛选非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂耐药相关微小RNA(miRNA，miR)并分析其生物学功能。方法:从高通量基因表达数据库(GEO)中搜索并下载与非小细胞肺癌顺铂耐药相关的miRNA芯片数据，并通过Targetscan和miRanda预测miRNA的靶基因，对靶基因行基因本体(GO)生物学进程分析，京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析，并构建蛋白与蛋白相互作用网络图(PPI)；进一步对KEGG通路行网路分析，并结合与顺铂耐药存在显著相关性的miRNA，构建miR-KEGG网路。组间数据比较采用 t检验。 结果:共筛选到GSE84200、GSE43249和GSE56036 3个数据库，总计23个与顺铂耐药相关的miRNA。Targetscan和miRanda共同预测的靶基因共计914个。GO功能富集分析表明这些基因主要以蛋白结合，信号传导和正性调节基因转录等生物学过程相关。KEGG通路分析显示这些基因主要参与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)等信号通路。PPI网路分析结合关键基因分析显示p53为关键基因。miR-KEGG网络分析显示miR-195-5p和miR-424-5p在顺铂耐药中发挥重要作用。结论:miR-195-5p和miR-424-5p可能在顺铂耐药中发挥重要作用，生物学分析预测有助于进一步认识miRNA在非小细胞肺癌顺铂耐药中的功能。

目的:探讨Kazal 5型丝氨酸蛋白酶抑制剂（serine protease inhibitor of Kazal type 5, SPINK5）基因突变致新生儿Netherton综合征（Netherton syndrome, NS）的临床特征及分子遗传学特点。 方法:回顾性分析2018年11月上海交通大学附属儿童医院收治的1例新生儿NS病例的临床资料，采用高通量测序及Sanger测序对其 SPINK5基因进行分析。在万方数据库、中国知网和PubMed数据库中检索2月龄以内确诊且有 SPINK5基因分析结果的NS病例。结合本例患儿和文献报道的病例，总结新生儿NS的临床特点、基因突变情况、治疗及随访情况。采用描述性统计分析。 结果:本例患儿生后陆续出现全身皮肤弥漫性红斑及脱屑、毛发稀疏、反复感染等表现，实验室检查发现血IgE升高（111 IU/ml），光学显微镜下毛发呈"竹节发"。 SPINK5基因分析发现患儿存在c.2468dup（p.Lys824Glufs*4）和c.377_378del（p.Tys126*）复合杂合突变，家系分析发现患儿的2个突变分别遗传自其父亲和母亲，确诊为 SPINK5基因突变致NS。经抗感染、注射丙种球蛋白、皮肤护理等综合治疗后皮疹好转，但反复感染，后放弃治疗自动出院，生后2月龄死于感染。共检索到NS病例报道11例，合并本例共12例NS新生儿。总结12例患儿最常见临床表现发现，有早期皮肤弥漫性红斑及脱屑12例、感染8例、毛发干结7例、高钠血症性脱水7例、高IgE 5例、生长迟缓4例、呼吸衰竭3例、特应性体质2例、腹泻2例及吞咽不协调、低体温、喘息、高血压、肝衰竭、代谢性碱中毒各1例。 结论:NS由 SPINK5基因突变导致，新生儿期NS临床表现多不典型。生后早期出现全身皮肤弥漫性红斑及脱屑、反复感染、毛发干结，尤其血IgE偏高的患儿，应考虑NS可能，基因检测有助于早期诊断、指导治疗，并为遗传咨询提供依据。

目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（PTEN）表达对活化肝星状细胞（HSC）的纽蛋白（vinculin）、细丝蛋白A（filamin A）及皮层肌动蛋白（cortactin）的影响。方法:体外培养活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6，将携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA（short hairpin RNA, shRNA）]的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN及对照空病毒Ad-GFP转染HSC；采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测各组HSC的PTEN mRNA及蛋白表达；借助激光扫描共聚焦显微镜，采用免疫荧光法检测各组HSC的vinculin、filamin A及cortactin表达变化，并利用Image-pro plus 6.0软件进行图像分析处理，计算所测蛋白荧光表达的积分光密度值（IOD）。实验分为3组：对照组（在腺病毒转染步骤以DMEM代替腺病毒液）、Ad-GFP组（转染仅表达绿色荧光蛋白的空病毒Ad-GFP）、Ad-shRNA/PTEN组（转染携带靶向PTEN的shRNA并表达绿色荧光蛋白的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN）。3组间均数比较采用单因素方差分析，组间比较采用LSD检验。结果:靶向PTEN的shRNA成功转染并显著下调HSC的PTEN mRNA及蛋白表达（ P < 0.05）；HSC的vinculin主要表达于细胞质，Ad-shRNA/PTEN组HSC的vinculin荧光IOD （19 758.83±1520.60）较对照组（7 737.16±279.93）及Ad-GFP组（7 725.50±373.03）显著升高（ P < 0.05），而对照组与Ad-GFP组之间HSC的vinculin荧光IOD差异无统计学意义（ P > 0.05）。3组HSC的filamin A荧光IOD差异无统计学意义（ P > 0.05），但3组HSC的filamin A亚细胞分布发生了变化，Ad-shRNA/PTEN组HSC的filamin A主要分布于细胞质，而对照组和Ad-GFP组HSC的filamin A主要位于细胞核，Ad-shRNA/PTEN组HSC的filamin A核质比（0.60±0.15）明显低于对照组（1.20±0.15）及Ad-GFP组（1.08±0.23）， P < 0.05；而对照组与Ad-GFP组之间HSC的filamin A核质比差异无统计学意义（ P > 0.05）。3组HSC的cortactin主要分布于细胞质，Ad-shRNA/PTEN组HSC的cortactin荧光IOD（54 688.50±2 095.53）较对照组（22 959.94±1 710.42 ）及Ad-GFP组（22 547.11±1 588.72）显著升高（ P < 0.05），而对照组与Ad-GFP组之间HSC的cortactin荧光IOD差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:PTEN表达下调使体外活化肝星状细胞的微丝结合蛋白vinculin及cortactin的表达上调，并使另一微丝结合蛋白filamin A的亚细胞分布发生改变即出现胞核向细胞质转位。