目的:探究微小染色体维持蛋白5(MCM5)对胶质母细胞瘤的恶性进展促进作用及机制。方法:(1)收集中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2020年9月至2021年9月术中切除的3例非肿瘤患者脑组织与3例Ⅳ级胶质母细胞瘤组织进行质谱检测及蛋白质组学定量分析，筛选差异表达的蛋白并进行功能富集分析。(2)在蛋白质组学的基础上筛选出在胶质母细胞瘤中高表达的目标蛋白MCM5，利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库验证其在胶质母细胞瘤中表达情况，并在收集到的临床标本中进行mRNA水平的进一步验证。(3)通过siRNA转染将U251细胞分为阴性对照组、敲低组-1(si-1组)、敲低组-2(si-2组)，采用CCK-8实验、平板克隆形成实验、EdU染色、Transwell实验及流式细胞术检测MCM5对胶质母细胞瘤恶性表型的调控作用。(4)利用TCGA数据库中胶质瘤患者的转录组数据，通过GSEA算法探究MCM5调控胶质母细胞瘤恶性进程可能的分子机制。结果:(1)在胶质母细胞瘤临床样本中筛选出表达上调的蛋白322种，表达下调的蛋白94种，其中MCM5在3份胶质母细胞瘤样本中均呈现为高表达。(2)基于TCGA数据库163例胶质母细胞瘤和207例非肿瘤脑组织的分析显示MCM5在胶质母细胞瘤中表达上调，差异有统计学意义( t=3.340， P=0.001)；针对临床收集的3份胶质母细胞瘤组织和3份非肿瘤脑组织的实时定量PCR(RT-qPCR)实验结果同样显示MCM5在胶质母细胞瘤中表达增高，差异有统计学意义( t=3.876， P<0.001)。(3)与阴性对照组比较，si-1组、si-2组细胞MCM5 mRNA及蛋白表达均显著下降，接种后第5天的增殖率显著降低，细胞克隆数量显著减少，EdU阳性细胞比例显著降低，G1期细胞比例显著上升，迁移能力明显受损，差异均有统计学意义( P<0.05)。(4)GSEA分析结果显示，MCM5高表达组mRNA在DNA损伤修复、E2F靶基因、MYC靶基因、上皮-间质转化(EMT)、白细胞介素6-Janus激酶-信号转导与转录活化因子3(IL6-JAK-STAT3)、干扰素、KRAS、NOTCH、转化生长因子-β(TGF-β)、Wnt/β-Catenin等特征基因集中富集。 结论:MCM5在胶质母细胞瘤中高表达，并通过包括E2F、MYC、EMT、Wnt/β-Catenin在内的多种机制调控其恶性进展。

患者，男，17岁，急性淋巴细胞白血病-普通B细胞型（标危组），以VDCLP方案诱导化疗达完全缓解，CAML、HD-MTX方案3疗程，VCLP方案1疗程，CAM方案1疗程，CAML方案1疗程巩固治疗，其后6-巯基嘌呤+甲氨蝶呤方案维持治疗，每半年给予VDLP方案化疗1疗程，于2015年11月维持治疗结束，共行腰穿及鞘内注射13次。规律复查持续完全缓解，微小残留病（MRD）阴性。2016年7月复查骨穿提示复发（幼稚淋巴细胞占15%），流式细胞术检测B系幼稚细胞占12.79%，染色体正常核型。于2016年8月行单药氯法拉滨治疗（52 mg/m 2，第1~5天）达完全缓解，流式细胞术检测MRD 0.31%，继续单药氯法拉滨巩固1疗程，MRD阴性。2016年10月行单倍体造血干细胞移植（母亲供者），移植前行预防性鞘内注射1次，脑脊液检查未见异常。预处理方案为改良白消安/环磷酰胺+兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白，应用环孢素A（CsA）、霉酚酸酯（MMF）及甲氨蝶呤预防移植物抗宿主病（GVHD），输注单个核细胞6.533×10 8/kg，CD34 +细胞4.217×10 6/kg，移植后13 d血小板植入，17 d粒系植入，无急性GVHD表现，未发生严重感染。移植后100 d开始CsA减量（每周减量10%），规律随访骨髓完全缓解、MRD阴性、完全供者嵌合。

目的:了解草酸钙结晶肾损伤过程中肾组织基因及蛋白的动态变化，探讨草酸钙结晶肾损伤的可能机制。方法:采用10只8周龄雄性C57BL/6J小鼠，适应性饲养1周，按随机数字表法将其分为对照组和草酸钙结晶肾损伤组（模型组），应用乙醛酸（50%，9 mmol/L）腹腔注射（100 mg·kg -1·d -1，持续5 d）建立草酸钙结晶肾损伤小鼠模型，对照组小鼠予等体积0.9%氯化钠溶液腹腔注射。使用HE染色、PAS染色、Masson染色及Von Kossa染色观察模型组小鼠是否造模成功。对小鼠肾组织进行转录组学和蛋白组学测序，根据差异基因和差异蛋白结果筛选与草酸钙结晶肾损伤有关的基因和蛋白并进行基因本体（gene ontology，GO）及京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）分析。采用主成分分析图、热图及火山图进行肾组织转录组学和蛋白组学分析。采用韦恩图分析差异基因和差异蛋白的重叠内容。 结果:模型组小鼠肾脏HE染色、PAS染色结果显示肾组织形态结构异常，Masson染色结果显示肾组织存在纤维化，Von Kossa染色结果显示皮髓交界处大量钙盐沉积，血肌酐、血尿素氮等肾损伤标志物显著升高，提示草酸钙结晶肾损伤小鼠模型构建成功。转录组学分析结果显示，相比对照组，模型组共存在2 815个显著差异基因，其中2 004个基因上调，811个基因下调；蛋白组学分析结果显示，模型组共存在1 197个差异蛋白，其中353个蛋白上调，844个蛋白下调。共有338个差异基因与差异蛋白相对应，其中324个差异基因与差异蛋白趋势一致。在表达上调及下调对应的差异基因和差异蛋白中均选取表达差异较大的5个差异分子，分别为血清淀粉样蛋白A1（SAA1）、微小染色体维持蛋白4（MCM4）、精氨酸酶2（ARG2）、S100钙结合蛋白A6（S100A6）、白细胞分化抗原14（CD14）、葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基（G6PC）、溶质转运家族22成员6（SLC22A6）、溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1A1（SLCO1A1）、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1（PEPCK1）和吲哚胺N-甲基转移酶（INMT）。GO分析表明2个组学相关的差异分子富集的共同通路主要涉及线粒体功能、多种能量代谢通路及免疫失调；而KEGG富集分析显示2个组学相关的差异分子主要的富集通路包括转运体异常、线粒体功能障碍、神经退行性病变、氨基酸代谢通路异常、氧化磷酸化等能量代谢通路异常等。结论:草酸钙结晶肾损伤小鼠肾脏基因和蛋白层面均发生明显变化。线粒体功能障碍、多种能量代谢通路异常及免疫失调可能作为重要机制参与草酸钙结晶肾损伤的发病。

目的:探讨微小染色体维持蛋白5(MCM5)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达和预后的关系，观察其对HCC细胞的增殖、迁移的调节作用。方法:根据肿瘤基因组图谱(TCGA)和GEO数据库，分析HCC组织和癌旁组织中MCM5的差异表达，并绘制生存曲线。将MCM5低表达的HCC细胞株作为实验组(HepG2、HuH7)，以转染空载体的HCC细胞株为对照组(shRNAHepG2、shRNAHuH7)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)技术检测MCM5在人HCC细胞株和正常肝细胞株的表达量。短发卡RNA(shRNA)干扰MCM5表达后，细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、细胞划痕修复实验检测HCC细胞的增殖和迁移能力；流式细胞术检测HCC细胞的凋亡率。多组资料间比较采用单因素方差分析和 t检验，计数资料的比较采用 χ2检验。 结果:MCM5在HCC组织较癌旁组织表达升高5.32倍( t＝4.464， P<0.05)，MCM5高表达患者5年生存率(38%)较低表达患者(51%)明显下降，差异有统计学意义( t＝5.337， P<0.05)。MCM5在HCC细胞株(HepG2、HuH7)的表达量(3.95±0.37、3.09±0.27)较人正常肝细胞(HL7702)的表达量(0.94±0.13)明显增高，差异有统计学意义( t＝14.532、16.339， P<0.01)。24、48、72、96 h细胞增殖能力检测显示，实验组HepG2细胞(0.51±0.04、0.94±0.06、1.25±0.15、0.94±0.06)较对照组的HepG2细胞(0.68±0.06、1.21±0.09、1.95±0.12、1.21±0.09)显著下降，差异有统计学意义( t＝7.328、6.997、8.779、11.338、12.067， P<0.05)；实验组HuH7细胞增殖能力(0.48±0.05、0.76±0.13、1.44±0.25、1.44±0.25)较对照组的HuH7细胞(0.58±0.07、0.98±0.13、1.86±0.14、1.98±0.13)显著下降，差异有统计学意义( t＝4.787、5.062、5.997、8.932， P<0.05)。实验组的HepG2细胞、HuH7细胞划痕愈合百分比[(19.14±0.98)%、(19.57±1.01)%]较对照组划痕愈合百分比[(45.29±1.35)%、(40.22±1.66)%]明显减少，差异有统计学意义( t＝25.369、22.891， P<0.01)。实验组HepG2细胞、HuH7细胞凋亡率[(14.68±3.21)%、(11.57±2.52)%]较对照组细胞凋亡率[(4.29±1.42)%、(4.73±0.38)%]明显增高，差异有统计学意义( t＝23.327、24.832， P<0.05)。 结论:MCM5在HCC组织及细胞株中高表达，MCM5高表达的HCC患者预后较差，MCM5表达降低可抑制HCC细胞的增殖、迁移能力，促进细胞凋亡。

目的:探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白-反义链1(MCM3AP-AS1)调节微小核糖核酸(miR)-424-5p/磷酸丝氨酸氨基转移酶1(PSAT1)轴对乳腺癌恶性进展的影响.方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT549、BT20中LncRNA MCM3AP-AS1、miR-424-5p和PS AT1信使核糖核酸(mRNA)的表达水平.构建LncRNA MCM3AP-AS1低表达模型、miR-424-5p敲低与过表达模型,并使用RT-qPCR方法验证转染模型构建的成功.分别采用四氮甲基唑蓝(MTT)法、Transwell实验检测乳腺癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力.免疫印迹法检测各组MDA-MB-231细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和PS AT1蛋白的表达.经生物信息学分析后,采用双荧光素酶报告基因实验与RNA免疫共沉淀(RIP)实验分别验证LncRNA MCM3AP-AS1与miR-424-5p、miR-424-5p与PSAT1之间的靶向关系.结果:在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT549、BT20 中 MCM3AP-AS1、PSAT1 mRNA 的表达水平显著高于 MCF-10A(P＜0.05),miR-424-5p 表达水平显著低于MCF-10A(P＜0.05).敲低MCM3AP-AS1或过表达miR-424-5p均可以降低MDA-MB-231细胞的吸光度(OD490)值、细胞迁移数目和细胞侵袭数目、CyclinD1、N-cadherin和PS AT1蛋白表达水平(P＜0.05),提高细胞E-cadherin蛋白表达水平(P＜0.05).敲低miR-424-5p的表达逆转了下调MCM3AP-AS1对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭以及相关蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实MCM3AP-AS1靶向负调控miR-424-5p表达,miR-424-5p靶向负调控PSAT1的表达.结论:LncR-NA MCM3AP-AS1在乳腺癌中呈高表达,其低表达可通过靶向调节miR-424-5p/PSAT1轴抑制乳腺癌的恶性进展.

目的:探讨肌层浸润性膀胱癌(MIBC)组织赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)、微小染色体维持蛋白6(MCM6)与临床病理特征和预后的关系.方法:选择2017年5月至2019年10月长治医学院附属和平医院行手术治疗的MIBC患者96例,应用逆转录-实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测癌组织及癌旁正常组织KMT2D信使核糖核酸(mRNA)、MCM6 mRNA表达,分析KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达与MIBC患者临床病理特征的关系,应用Pearson相关分析法分析MIBC患者癌组织KMT2D mRNA及MCM6 mRNA表达的相关性.随访3年,比较死亡MIBC患者与存活MIBC患者癌组织KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达,并应用Kaplan-Meier生存曲线分析不同KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达分组MIBC患者预后情况.结果:MIBC癌组织中KMT2D mRNA表达水平显著低于癌旁组织,MCM6 mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.05).MIBC患者癌组织中KMT2DmRNA、MCM6mRNA表达与侵犯输尿管、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P＜0.05),且两者表达呈负相关(P＜0.05).至随访截止,MIBC患者死亡45例,死亡组患者癌组织中KMT2D mRNA表达水平显著低于存活组、MCM6 mRNA表达水平显著高于存活组(P＜0.05).生存曲线结果显示KMT2D mRNA高表达组3年生存率显著高于KMT2D mRNA低表达组;MCM6 mRNA低表达组3年生存率显著高于MCM6 mRNA高表达组(P＜0.05).结论:MIBC癌组织中KMT2D低表达、MCM6高表达,与MIBC侵犯输尿管、淋巴结转移、TNM分期及患者预后不良有关.

目的:探究酪氨酸蛋白激酶-7(PTK7)、人表皮生长因子受体2(HER-2)、微小染色体维持蛋白5(Mcm5)蛋白在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达水平及其临床预后价值.方法:选择180例ESCC患者作为研究对象,采集其肿瘤组织,并随机收集100例癌旁组织,通过免疫组化染色检测PTK7、HER-2、Mcm5蛋白的表达水平,以及其与临床病理特点以及与预后的关系.结果:ESCC组织中PTK7、HER-2、Mcm5的阳性率均显著高于癌旁组织(P<0.05).出现淋巴转移组织中PTK7的阳性率显著高于未出现淋巴转移(P<0.05).瘤体直径大于2 cm、TNM分期为 Ⅲ 期和 Ⅳ 期以及合并淋巴转移ESCC组织HER-2阳性率显著升高(P<0.05).TNM分期为 Ⅲ 期和 Ⅳ 期以及合并淋巴转移ESCC组织Mcm5阳性率更高(P<0.05).ESCC组织中PTK7表达水平与淋巴转移正相关(P<0.05),HER-2与TNM分期和淋巴转移正相关(P<0.05),Mcm5与瘤体大小 、TNM分期和淋巴转移正相关(P<0.05).PTK7、HER-2、Mcm5阳性的ESCC患者的无瘤生存期显著短于阴性组(P<0.05).结论:在ESCC组织中PTK7、HER-2、Mcm5的表达水平均显著上调,并且高水平的HER-2、Mcm5预示着更严重的病理分期以及淋巴转移,并且PTK7、HER-2、Mcm5与更差的预后有关.

背景与目的:原发性胃弥漫大B细胞淋巴瘤(primary gastric diffuse large B-cell lymphoma,PG-DLBCL)是胃淋巴瘤最常见的组织学亚型,缺乏特异性临床表现,内镜检查易与胃癌、溃疡或其他炎症性病变混淆,病变组织学形态表现复杂,诊断困难.探索PG-DLBCL的临床病理学特征并分析患者的预后影响因素及生存率.方法:回顾性分析2008年1月—2018年7月南京医科大学附属常州市第二人民医院收治的104例PG-DLBCL患者的临床病理学资料.计数资料两组间比较采用χ2检验,应用Kaplan-Meier法计算生存率并绘制生存曲线,Log-rank检验和COX回归模型进行单因素及多因素预后影响分析.结果:104例PG-DLBCL患者,男性45例,女性59例,中位发病年龄68岁.104例患者均获得随访,随访时间6.0～103.0个月,中位随访时间71.0个月,患者中位生存时间56.8个月,1、3和5年总体生存率分别为90.1％、76.8％和47.6％.病理学分类:生发中心样B细胞(germinal center B cell-like,GCB)型40例,非生发中心样B细胞(non-germinal center B cell-like,non-GCB)型64例.荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测结果显示:c-Myc基因异常27例(占26％,其中17例为多拷贝,10例为重排),B细胞淋巴瘤-2(B-cell leukemia/lymphoma 2,BCL-2)基因异常26例(占25.2％,其中17例为多拷贝,9例为重排),BCL-6基因异常32例(占31％,其中23例为多拷贝,9例为重排).单因素分析结果显示,血清CA125水平、血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平、淋巴瘤国际预后指数(international prognostic index,IPI)评分、改良Ann Arbor分期、骨髓侵犯、治疗方法、病理学类型non-GCB型、BCL-2/BCL-6/多发性骨髓瘤原癌基因-1(multiple myeloma protooncogene-1,MUM-1)/细胞分裂周期蛋白7(cell division cyclin 7,CDC7)/微小染色体维持蛋白2(minichromosome maintenance protein 2,MCM2)蛋白表达水平均是影响PG-DLBCL患者预后的相关因素(P<0.05).多因素分析结果显示,改良Ann Arbor临床分期ⅢE～ⅣE期、IPI评分≥2、病理学类型非生发中心亚型、CDC7蛋白高表达、MCM2蛋白高表达、FISH检测BCL-2基因重排是影响PG-DLBCL患者预后的独立危险因素.结论:PG-DLBCL发病以老年人为主,临床表现无特殊性,内镜检出率较高,确诊依赖于病理学检查,R(利妥昔单抗)-CHOP(环磷酰胺+表多柔比星+长春新碱+泼尼松)化疗方案作为首选治疗方法.

目的 探索miRNA-155对急性髓系白血病患者预后影响及可能分子机制.方法 下载TCGA数据库中急性髓系白血病患者的miRNA和RNA表达谱及临床数据,按照miRNA-155表达水平高低排序,将前50％分为高表达组(n=81),剩余为低表达组(n=81),比较两组患者生存时间,将患者各RNA表达水平逐一与miRNA-155表达水平进行Pearson相关性检测,根据相关系数分别选取与miRNA-155正相关和负相关的前50个基因,使用STRING工具完成KEGG通路和GO富集分析,并构建蛋白相互作用网络.结果 miRNA-155低表达组中位生存时间高于miRNA-155高表达组,差异有统计学意义(609 d vs 485 d,P<0.05).在检测的19448个基因中,21号染色体开放阅读框71(C21orf71)与miRNA-155正相关系数最高(r=0.634,P<0.05);溶质载体家族13成员5(SLC13A5)与miRNA-155负相关系数最高(r=-0.50,P<0.05).GO富集分析和KEGG通路富集分析可见,相关基因主要涉及的生物学过程包括DNA复制启动与DNA链延伸;主要涉及的分子功能为解旋酶活性和作用于DNA的催化活性;主要涉及的细胞组分为微染色体维持复合体和三级颗粒;主要涉及的信号通路为DNA复制和细胞周期调控.微小染色体维持蛋白(MCM)基因家族是处于蛋白相互作用网络的核心.结论 miRNA-155过表达与远期生存率降低有关,这可能与其调控细胞DNA复制有关.

职业接触是指由于职业活动而暴露在危险因素中,从而有可能损害健康或危及生命的一种情况[1].2018年全国共报告各类职业病新发病例23 497例,职业性尘肺病及其他呼吸系统疾病19 524例(其中职业性尘肺病19 468例)[2].这些病例只是冰山一角,还有许多未表现出明显临床症状的人群正处于职业危害之中.大量有毒有害污染物的接触可引起遗传物质的损伤,诸如突变、缺失、插入、重复及染色体畸变等,最终导致有害效应的产生[3].有研究表明,生物体为了维持自身稳态,在不发生基因序列改变的情况下,可通过调节基因修饰来应对外环境的影响[4].基因修饰包括DNA甲基化、组蛋白修饰和微小RNA(microRNA,miRNA)修饰等,其中DNA甲基化作为表观遗传学的重要部分已成为研究热点之一[5].在部分职业活动中,由于经常接触苯、多环芳烃、微小颗粒等物质可引起某些基因的甲基化修饰改变,导致各种呼吸系统、神经系统及循环系统疾病及癌症等发病率升高[6-8].本文拟从职业接触导致的DNA甲基化异常及相关DNA甲基化检测技术发展趋势等方面,对DNA甲基化在职业接触健康评价中的应用进行综述.