目的:探讨消化性溃疡合并幽门螺杆菌（ Hp）感染患者血清微小RNA（miR）-155和miR-135b-5p表达水平及其临床意义。 方法:采用前瞻性研究的方法，连续选取济宁医学院附属医院2021年7月至2023年2月消化性溃疡患者263例。其中，经 14C呼气试验确定为 Hp感染146例（ Hp感染组），未合并 Hp感染117例（非 Hp感染组）；免疫印迹法确定Ⅰ型 Hp感染110例，Ⅱ型 Hp感染36例。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清miR-155和miR-135b-5p表达水平，放射免疫法检测血清胃泌素水平，酶联免疫吸附法检测血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ和PG Ⅱ水平；记录患者基本临床资料。采用多因素Logistic回归分析影响消化性溃疡患者发生 Hp感染的独立危险因素；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-155和miR-135b-5p对消化性溃疡患者发生 Hp感染的诊断价值。 结果:Hp感染组胃泌素、PG Ⅰ、PG Ⅱ、溃疡出血率和复发比例明显高于非 Hp感染组[（108.47 ± 15.35）ng/L比（79.63 ± 10.58）ng/L、（295.41 ± 37.26）pg/L比（236.75 ± 29.17）pg/L、（44.08 ± 8.52）pg/L比（39.29 ± 6.74）pg/L、25.34%（37/146）比15.38%（18/117）和21.92%（32/146）比11.97%（14/117）]，差异有统计学意义（ P<0.01或<0.05）。 Hp感染组血清miR-155和miR-135b-5p明显高于非 Hp感染组（1.94 ± 0.63比0.95 ± 0.29和1.86 ± 0.57比1.03 ± 0.31），差异有统计学意义（ P<0.01）。Ⅰ型 Hp感染患者血清miR-155和miR-135b-5p明显高于Ⅱ型 Hp感染患者（2.05 ± 0.66比1.60 ± 0.54和1.97 ± 0.61比1.52 ± 0.45），差异有统计学意义（ P<0.01）。多因素Logistic回归分析结果显示，血清miR-155、miR-135b-5p、胃泌素、PG Ⅰ是影响消化性溃疡患者发生 Hp感染的独立危险因素（ OR = 1.443、1.436、1.452和1.438，95% CI 1.165～1.787、1.146～1.799、1.187～1.777和1.150～1.798， P<0.01）。ROC曲线分析结果显示，血清miR-155和miR-135b-5p联合诊断消化性溃疡患者发生 Hp感染的曲线下面积明显大于血清miR-155和miR-135b-5p单独诊断（0.907比0.839和0.836， Z = 2.57和2.81， P = 0.010和0.005）。 结论:消化性溃疡合并 Hp感染患者血清miR-155和miR-135b-5p水平较高，两者联合检测对消化性溃疡患者发生 Hp感染具有较高的诊断价值。

目的:探讨环状RNA小脑变性相关蛋白1反义转录物(circCDR1as)对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:体外培养HPASMC，缺氧诱导后干扰circCDR1as表达、抑制或过表达微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)以及过表达Janus激酶2(JAK2)。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中circCDR1as、miR-135a-5p表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中JAK2、信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达。组间差异比较采用 t检验。 结果:缺氧组circCDR1as表达水平和磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3比值高于常氧组(1.98±0.07比1.01±0.05、0.62±0.06比0.18±0.04、0.56±0.05比0.15±0.03)，miR-135a-5p表达水平低于常氧组(0.52±0.05比1.00±0.04)，差异有统计学意义( t＝27.620、14.946、17.223、18.362， P<0.05)。si-circCDR1as组circCDR1as表达水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值和细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数低于si-NC组(0.41±0.05比1.02±0.06、0.41±0.05比0.61±0.05、0.38±0.03比0.54±0.04、0.42±0.04比0.73±0.06、75.64±17.95比145.38±26.42、68.96±16.82比121.05±24.80)，miR-135a-5p表达水平高于si-NC组(1.73±0.06比1.03±0.05)，差异有统计学意义( t＝19.131、6.928、7.838、10.530、5.348、4.258、21.954， P<0.05)。 结论:circCDR1as通过靶向抑制miR-135a-5p表达激活JAK2/STAT3信号通路，促进缺氧诱导的HPASMC增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨肝癌组织中微小RNA-1470(miR-1470)、POZ结构域和 AT 结合基序锌指蛋白1(PATZ1)表达水平与患者5 年内预后的关系.方法:选取2015 年9 月至2018 年8 月在邯郸市中心医院接受根治术治疗的肝癌患者 135 例,术中留取肝癌组织及相应癌旁正常组织(距肿瘤边缘 2cm 以上的正常肝脏组织).采用免疫组织化学法检测PATZ1 蛋白表达;采用实时荧光定量 PCR 法检测 miR-1470、PATZ1 mRNA表达;术后进行5 年的随访,统计 5 年总生存率.比较肝癌组织和癌旁正常组织中miR-1470、PATZ1 mRNA和蛋白表达情况;分析肝癌组织中miR-1470、PATZ1 mRNA表达与临床病理参数的关系,二者表达的相关性及与预后的关系,影响预后的危险因素;双荧光素酶报告基因实验验证miR-1470 与PATZ1 的靶向关系.结果:肝癌组织PATZ1 蛋白阳性表达率明显低于癌旁正常组织(P<0.05).与癌旁正常组织比较,肝癌组织中miR-1470 表达水平明显升高,PATZ1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05).肝癌组织中 miR-1470、PATZ1 mRNA 低表达、高表达患者在血清甲胎蛋白(AFP)水平、中国肝癌分期方案(CNLC)分期及有无脉管癌栓方面,差异均有统计学意义(P<0.05).肝癌组织中miR-1470 与PATZ1 mRNA表达呈负相关(P<0.05).miR-1470 低表达患者、PATZ1 mRNA 高表达患者5 年总生存率分别明显高于miR-1470 高表达患者、PATZ1 mRNA 低表达患者(P<0.05).CNLC 分期Ⅲ期、脉管癌栓、miR-1470 高表达及PATZ1 mRNA低表达是影响肝癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05).miR-1470 可负向调控PATZ1 表达.结论:肝癌组织中miR-1470 表达上调,PATZ1 表达下调,两者呈负相关,均可作为评估肝癌患者预后的生物标记物,且miR-1470 可负向调控PATZ1 表达.

目的 探讨血清微小RNA-499a-5p(miR-499a-5p)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者病情严重程度和预后的关系.方法 选取接受诊治的151例脓毒症患者为研究对象,根据ALI的发生情况分为脓毒症并发ALI组(68例)和一般脓毒症组(83例).根据氧合指数,将脓毒症并发ALI患者分为轻症组(23例)、中症组(26例)和重症组(19例).以脓毒症并发ALI患者诊治28 d内的生存情况,分为预后良好组(43例)和预后不良组(25例).另外,选取同期体检健康者151例为健康组.分析各组miR-499a-5p、FGF9及炎症因子间的差异和相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a-5p、FGF9对脓毒症患者并发ALI的预测效能.结果 轻症组、中症组、重症组患者的miR-499a-5p和FGF9水平表现为依次降低,而炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平依次升高,差异有统计学意义(P＜0.05).预后不良组的miR-499a-5p、FGF9低于预后良好组,IL-1、IL-6、TNF-α、CRP水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P＜0.05).脓毒症并发AI.I患者的miR-499a-5p、FGF9与IL-1、IL-6、TNF-α、CRP呈负相关(P＜0.05);miR-499a-5p可正向调节FGF9表达(P＜0.05).miR-93、miR-135a联合预测脓毒症并发ALI患者预后的诊断效能高于单独预测,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-499a-5p、FGF9、炎性因子水平与脓毒症所致ALI患者的病情程度和预后相关.miR-499a-5p和FGF9可能作为潜在的生物标志物用于脓毒症并发ALI的预后评估.

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性.方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组.比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平.采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性.乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析.血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析.结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P＜0.05).耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P＜0.05).Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均 P＜0.05).多因素 Logistic 回归分析显示,血清 miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p 是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P＜0.05).结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)AC092718.4对人类表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌耐药性的影响及其可能机制.方法 (1)获取曲妥珠单抗非耐药及耐药HER2阳性乳腺癌患者的乳腺癌组织(设为非耐药组、耐药组),检测其lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100钙结合蛋白P(S100P)mRNA和蛋白的表达水平.(2)以对曲妥珠单抗不敏感的HER2阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-361细胞作为原发耐药细胞模型,以乳腺癌细胞株BT-474细胞为亲本,构建对曲妥珠单抗继发耐药的细胞模型(BT-474/TRA细胞).检测3种细胞中lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100P mRNA和蛋白的表达水平.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3种细胞的活力.(3)取MDA-MB-361细胞分为sh-AC092718.4组、sh-NC组、对照组进行实验,其中sh-AC092718.4组细胞和sh-NC组分别转染sh-AC092718.4和sh-NC,对照组细胞未经任何处理.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3组细胞的活力.(4)采用starBase和TargetScan分别预测lncRNA AC092718.4和miR-135a-5p的潜在靶标.通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p之间、miR-135a-5p与S100P之间的靶向结合情况.结果 (1)与非耐药组相比,耐药组lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低(P<0.05).(2)与BT-474细胞相比,BT-474/TRA细胞及MDA-MB-361细胞的lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低,曲妥珠单抗干预48 h后的细胞活力更大(P<0.05).(3)与对照组和sh-NC组比较,sh-AC092718.4组MDA-MB-361细胞活力降低(P<0.05).(4)starBase预测结果显示,lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p有靶向结合位点;TargetScan预测结果显示,miR-135a-5p与S100P有靶向结合位点.荧光素酶报告基因实验结果提示,lncRNA AC092718.4可与miR-135a-5p直接结合,S100P是miR-135a-5p的靶基因.结论 LncRNA AC092718.4促进乳腺癌细胞对曲妥珠单抗产生耐药性,下调lncRNA AC092718.4 表达可减轻MDA-MB-361细胞对曲妥珠单抗的耐药性,其机制可能涉及lncRNA AC092718.4作为竞争性内源RNA竞争性结合miR-135a-5p,从而上调S100P的表达.

目的 探究沉默微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,重点分析miR-135a-5p在宫颈癌HeLa细胞中的作用机制.方法 将宫颈癌HeLa细胞经培育后分为对照组、过表达组、沉默组,对照组不做处理,过表达组转染miR-135a-5p mimics上调载体,沉默组转染miR-135a-5p inhibitor下调载体.使用实时荧光定量法检测每组宫颈癌HeLa细胞中miR-135a-5p表达量;四甲基偶氮唑盐法检测每组宫颈癌HeLa细胞增殖水平;Transwell小室法检测每组宫颈癌HeLa细胞侵袭水平.结果 与对照组比较,过表达组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、miR-135a-5p、宫颈癌HeLa细胞迁移数、侵袭数明显升高,宫颈癌HeLa细胞凋亡能力明显降低(P＜0.05);与对照组比较,沉默组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、迁移数、侵袭数、miR-135a-5p明显降低,凋亡能力明显升高(P＜0.05);与过表达组比较,沉默组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、迁移数、侵袭数、miR-135a-5p明显降低,凋亡能力明显升高(P＜0.05).结论 miR-135a-5p作为一种促癌RNA,临床可通过沉默miR-135a-5p表达量来改变宫颈癌的治疗效率,为治疗宫颈癌提供借鉴指导,其可在宫颈癌诊断效能中起到重要意义.

目的 鉴定粪类圆线虫感染性Ⅲ期幼虫(iL3)和寄生性雌虫(pF)的微小RNA(miRNA),分析差异表达miRNA及其靶基因的功能.方法 从粪类圆线虫感染犬粪便中收集iL3.取4 000～5 000条iL3于颈后皮下注射感染健康犬,感染后21 d,从肠道中采集pF.提取iL3和pF的总RNA并测序.测序数据与粪类圆线虫基因组和鼠类圆线虫miRNA比对筛选保守的miRNA,用miRDeep2通过颈环结构分析、成熟序列比对筛选miRNA.分析iL3和pF的miRNA表达谱,筛选差异表达miRNA,预测差异表达miRNA的靶基因,对log2(差异倍数)＞1和每百万转录本上的读数(TPM)＞1 000的未注释miRNA的靶基因功能进行分析.用ClusterProfiler对差异表达miRNA靶基因进行GO富集分析.选取11个未注释或保守的差异表达miRNA进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证,以粪类圆线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GenBank登录号:BI773092.1)为参照基因,计算差异表达miRNA的相对转录水平.结果 共鉴定出265个miRNA,包括130个保守的miRNA和135个未注释的miRNA.其中,134个miRNA在iL3和pF之间差异表达(包含77个保守的miRNA和57个未注释的miRNA),251个为iL3和pF所共有,10个为iL3特有,4个为pF特有.差异表达miRNA靶基因预测结果显示,57个未注释的miRNA中,有12个差异倍数＞2且TPM＞1 000,有248个靶基因与秀丽隐杆线虫同源,其中35.08％(87/248)的靶基因与发育相关,其余与应激、运动和蜕皮等相关.大部分在pF高表达未注释的miRNA靶向SSTP_0000114700.差异表达miRNA靶基因的GO分析结果显示,共5 595个靶基因被富集,其中富集靶基因数居前5位的分别为膜组成成分(1821个)、核酸结合(561个)、细胞核(450个)、蛋白质水解作用(365个)和信号传导(284个).qRT-PCR验证结果显示,sst-miR-86-5p、sst-84-5p、sst-novel-104、sst-miR-92-3p、sst-miR-34a-3p、sst-miR-81a-5p、sst-miR-1-3p、sst-novel-108、sst-miR-124-5p、sst-miR-50-3p、sst-novel-51 的 log2(差异倍数)分别为-2.13、6.39、4.46、-3.69、-3.69、2.34、-2.48、-2.41、-2.30、2.25、-3.32,转录组分析获得的 log2(差异倍数)分别为-3.05、4.98、4.07、-4.9、-3.66、0.98、-3.79、-2.61、-0.99、0.63、-1.55.qRT-PCR与转录组分析获得的上调、下调趋势结果一致.结论 获得粪类圆线虫感染性Ⅲ期幼虫和寄生性雌虫的miRNA表达谱和差异表达miRNA,差异表达miRNA与粪类圆线虫的生长发育和繁殖功能相关.

目的 研究血清微小 RNA-135a-5p(microRNA-135a-5p,miR-135a-5p)、瞬时受体电位通道 1(transient receptor po-tential channel 1,TRPC1)在职业性哮喘预后中的预测价值.方法 将2019年1月一2021年3月山东颐养健康集团莱芜中心医院收治的96例职业性哮喘患者作为观察组,根据疾病严重程度分为轻度、中度和重度组;根据治疗后1年内随访是否复发分为复发组和未复发组;同期健康检查者92例作为对照组.采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测血清miR-135a-5p水平,采用酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清TRPC1及气道炎症指标白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-12、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,采用肺功能仪检测第 1 秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)、用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、最大呼气流量(peak expiratory flow,PEF),计算FEV1/FVC;职业性哮喘患者血清miR-135a-5p、TRPC1与肺功能指标及气道炎症指标的相关性采用Pearson相关分析;影响职业性哮喘患者复发的因素采用多因素logistic回归分析;血清miR-135a-5p、TRPC1单独及联合预测职业性哮喘患者复发的价值采用受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析.结果 观察组血清miR-135a-5p水平显著低于对照组(P＜0.05),TRPC1水平显著高于对照组(P＜0.05).随疾病严重程度增加,血清miR-135a-5p水平降低,TRPC1水平升高(均P＜0.05).复发组血清miR-135a-5p水平及FEV1/FVC,PEF、IL-12显著低于未复发组(均P＜0.05),TRPC1水平及IL-4、TNF-α显著高于未复发组(均P＜0.05).职业性哮喘患者血清miR-135a-5p与FEV1/FVC、PEF、IL-12 呈正相关(r--0.492,0.486,0.487,均P＜0.05),与 IL-4、TNF-α 呈负相关(r=-0.479、-0.491,均 P＜0.05);TRPC1 与 FEV1/FVC、PEF、IL-12 呈负相关(r=-0.504、-0.494、-0.504,均 P＜0.05),与 IL-4、TNF-α 呈正相关(r=0.481、0.495,均P＜0.05).miR-135a-5p是职业性哮喘患者1年内复发的保护因素,TRPC1是职业性哮喘患者1年内复发的独立危险因素(P＜0.05).血清miR-135a-5p、TRPC1水平单独及二者联合预测职业性哮喘患者复发的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.849、0.777和0.881.结论 血清miR-135a-5p、TRPC1联合检测可对职业性哮喘预后进行有效预测.

目的 探讨不同病理类型宫颈组织及宫颈癌细胞系中miR-135a-5p、GATA3和STAT3的表达及其与宫颈癌之间的关系.方法 实时定量RT-PCR法检测各宫颈组织及细胞中miR-135a-5p的表达水平;免疫组织化学SP和Western blot法检测宫颈组织和细胞中GATA3和STAT3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因验证miR-135a-5p与GATA3 3'UTR间的作用, 分析miR-135a-5p和GATA3 mRNA的表达结果与宫颈癌临床病理参数的关系.结果 miR-135a-5p在宫颈癌组织及细胞系中的表达均上调 (均P<0.05) .GATA3 mRNA的表达水平随着宫颈病变程度增加而降低 (P<0.05);STAT3 mRNA表达水平随着宫颈病变程度增加而升高 (P<0.05) .miR-135a-5p可靶向作用于G ATA 33'UTR.宫颈癌组织中miR-135a-5p与GATA3 (r=-0.6656) 、GATA3和STAT3 mRNA表达水平呈负相关 (r=-0.4534) .在宫颈癌中miR-135a-5p表达水平与临床分期、淋巴结转移有关 (P<0.05);GATA3 mRNA的表达与临床分期、肌层浸润深度及淋巴结转移均有关 (P<0.05) .结论 宫颈癌中miR-135a-5p和STAT3表达上调, GATA3表达下调, 三者可能通过相互作用参与宫颈癌的发生、发展.