目的:探讨微小RNA-139-5p（miR-139-5p）在食管鳞状细胞癌（ESCC）发生发展中的作用及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响和分子机制。方法:收集2017年2月至2018年3月在郑州大学第一附属医院胸外科手术获得的75例ESCC组织和癌旁正常食管组织标本。实验分2组：ESCC（ n=75）和正常食管组织（ n=75）。采用GEO数据集和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测ESCC组织和细胞中miR-139-5p的表达。将miR-139-5p抑制剂、miR-139-5p模拟物、阴性对照、对照siRNA、T盒转录因子1（TBX1） siRNA、pcDNA3.1和pcDNA3.1-TBX1转染ESCC Eca109和TE1细胞，用qRT-PCR检测转染后ESCC细胞中miR-139-5p和TBX1的表达水平，分别用细胞计数试剂盒8（CCK-8）和Transwell小室检测ESCC细胞的增殖和侵袭。双荧光素酶报告实验分析miR-139-5p与TBX1的相互作用，qRT-PCR、Western印迹法和免疫组织化学检测TBX1在ESCC组织中的表达，Western印迹法检测转染后E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达。 结果:ESCC组织中miR-139-5p水平明显低于正常组织（1.17±0.43比5.16±3.62， P<0.001）。Log-rank检验发现，高miR-139-5p表达水平的ESCC患者（ n=43）生存率显著高于低miR-139-5p水平的ESCC患者生存率（ n=32）（67.44%比25.00%， P=0.005）。ESCC细胞中miR-139-5p的表达水平均显著低于正常食管上皮细胞Het-1A（均 P<0.001）。miR-139-5p高表达的Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭能力明显低于阴性对照（NC）转染的Eca109和TE1细胞（均 P<0.05）。双荧光素酶报告实验表明，miR-139-5p能结合致TBX1的3′-非翻译区。miR-139-5p模拟物或抑制剂分别抑制或促进Eca109和TE1细胞TBX1蛋白表达（均 P<0.05）。TBX1下调显著抑制Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭，而TBX1的过表达显著促进Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭（均 P<0.05）。此外，pcDNA3.1-TBX1能部分逆转miR-139-5p介导的细胞侵袭能力的抑制（均 P<0.05），而TBX1 siRNA能部分逆转miR-139-5p抑制剂介导的侵袭能力的增强（均 P<0.05）。 结论:miR-139-5p通过靶向TBX1抑制ESCC细胞的增殖和侵袭。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）C9ORF139靶向微小RNA（miR）-24-3P/TAOK1调控急性髓系白血病（AML）细胞增殖的作用和机制。方法:AML细胞株（人急性早幼粒白血病细胞株HL-60以及人单核白血病细胞株THP-1）购自中国科学院，分为4组：A组为阴性对照（siNC）组，B组为干扰C9ORF139（siC9ORF139）组，C组为siC9ORF139+miR-24-3P抑制剂组，D组为miR-24-3P+TAOK1过表达（oe-TAOK1）组。采用实时荧光定量逆转录（qRT）-PCR检测4组AML细胞株HL-60、THP-1中的表达水平。细胞计数试剂盒-8（CCK8）法检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞的凋亡情况，Transwell实验检测4组细胞的迁移、侵袭能力，Western印迹法检测p-丝氨酸/苏氨酸激酶（p-raf）、p-丝裂原活化蛋白激酶（p-MEK）、p-细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）表达。构建荧光素酶报告基因质粒，验证C9ORF139、miR-24-3P、TAOK1的结合能力。裸鼠皮下肿瘤细胞接种分为HL-60（A组）和HL-60（B组）。结果:敲减细胞中C9ORF139基因并培养120 h后，在HL-60及THP-1细胞中，B组细胞增殖能力（0.62±0.02、0.82±0.02）、迁移能力（0.22±0.03、0.05±0.01）、侵袭能力（0.20±0.02、0.13±0.03）均低于A组（1.30±0.02、1.83±0.07；0.99±0.02、0.99±0.02；1.00±0.01、1.00±0.01）（均 P<0.05）。共转染miR-24-3抑制剂后，细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均高于B组（均 P<0.05）。共转染miR-24-3P与oe-TAOK1质粒后，细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均高于B组（均 P<0.05）。当干扰细胞中C9ORF139基因后，与A组凋亡水平（0.31±0.27、2.49±0.33）相比，B组（28.56±8.07、17.74±1.91）均较高（均 P<0.05）；当共转染miR-24-3P抑制剂后，C组细胞凋亡水平（2.34±0.09、3.06±0.06）均低于B组（均 P<0.05）；在共转染miR-24-3P与oe-TAOK1质粒组中，D组细胞凋亡水平（2.16±1.29、4.80±0.37）均低于B组（均 P<0.05）。在HL-60、THP-1细胞中，当C9ORF139未突变时，miR-24-3P组荧光素酶活性均低于miR-NC组（均 P<0.05）。当C9ORF139序列中与miR-24-3P结合位点突变后，miR-24-3P组荧光素酶活性与miR-NC组差异无统计学意义（ P>0.05）。当TAOK1未突变时，miR-24-3P组荧光素酶活性低于miR-NC组（ P<0.05）；当TAOK1序列中与miR-24-3P结合位点突变后，miR-24-3P组荧光素酶活性与miR-NC组差异无统计学意义（ P>0.05）。当干扰HL-60细胞中C9ORF139基因并培养72 h后，B组Raf、MEK及ERK分子磷酸化表达水平均低于A组（均 P<0.05）。第14天，A组肿瘤体积高于B组［（284.49±57.61）比（125.70±18.64）mm 3， P=0.017］。HL-60 A组肿瘤重量高于B组［（847.80±159.36）比（408.40±113.16）mg， P=0.001］。 结论:lncRNA C9ORF139通过调控miR-24-3P上调TAOK1促进AML细胞的增殖、侵袭、迁移，C9ORF139表达具有促进AML裸鼠皮下肿瘤生长的作用。

目的:研究微小RNA(miR)-139-3p对H 2O 2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2细胞氧化应激的影响及其可能机制。 方法:分别将miR-139-3p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(Sox4)过表达载体(pc-Sox4)及其对照(pcDNA3.1)转染H9c2细胞，细胞共分为6组：对照组、H 2O 2组、mimic组(转染mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA3.1组(转染mimics和pcDNA3.1)和pc-Sox4组(转染mimics和pc-Sox4)，除对照组外的其他细胞均在转染后建立H 2O 2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测H9c2细胞活力；比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量；原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测H9c2细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测Sox4表达；荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-139-3p表达水平；生物信息学网站预测miR-139-3p与Sox4的互补结合位点，双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶向关系。各组间差异比较采用方差分析。 结果:H 2O 2组H9c2细胞miR-139-3p水平低于对照组(0.28±0.03比1.00±0.01， t＝11.484， P<0.05)，miR-139-3p过表达后mimics组细胞活力高于miR-NC组(0.71±0.07比0.44±0.04， t＝7.348， P<0.05)、LDH水平低于miR-NC组[(48.21±6.38) U/L比(69.76±7.32) U/L， t＝4.759， P<0.05]、细胞凋亡率低于miR-NC组[(21.31±4.02)%比(47.28±5.69)%， t＝8.851， P<0.05]。使用TargetScan生物预测网站预测和双荧光素酶报告基因实验证实Sox4是miR-139-3p的靶基因，同时miR-139-3p上调使mimic组Sox4蛋白低于miR-NC组(2.54±0.41比5.38±0.73， t＝4.212， P<0.05)。Sox4过表达逆转了miR-139-3p对H 2O 2诱导的细胞损伤的作用，pc-Sox4组Sox4蛋白表达高于pc-DNA3.1组(5.25±0.71比2.61±0.47， t＝4.212， P<0.05)、细胞活力低于pc-DNA3.1组(0.45±0.07比0.69±0.08， t＝7.788， P<0.05)、LDH水平高于pc-DNA3.1组[(68.62±7.55) U/L比(44.76±5.21) U/L， t＝9.368， P<0.05]，细胞凋亡率高于pc-DNA3.1组[(41.24±7.36)%比(24.76±4.28)%， t＝9.578， P<0.05]。 结论:H 2O 2处理的心肌细胞中miR-139-3p表达下调，miR-139-3p表达上调可通过抑制Sox4减轻H 2O 2诱导的心肌细胞氧化应激损伤。

目的:通过生物信息学方法挖掘与卵巢上皮性癌（卵巢癌）耐药相关的可作为竞争性内源RNA（ceRNA）的长链非编码RNA（lncRNA），并进行临床验证。方法:（1）挖掘与卵巢癌相关的lncRNA并构建ceRNA调控网络：综合应用文本挖掘、数据预测和网络构建等生物信息学方法，建立与卵巢癌耐药相关的潜在ceRNA调控网络，即lncRNA-微小RNA（miRNA）-mRNA调控网络。（2）临床验证：收集2008年6月至2016年10月在广西医科大学附属肿瘤医院行肿瘤细胞减灭术的卵巢癌患者共95例，其中铂类药物耐药患者54例（耐药组），铂类药物敏感患者41例（敏感组），采用实时荧光定量PCR技术检测两组卵巢癌组织中lncRNA的表达，分析lncRNA表达对卵巢癌患者预后的影响，并分析lncRNA表达对卵巢癌耐药的诊断效能。结果:（1）文本挖掘初步筛选出25个与卵巢癌发生、发展相关的差异表达lncRNA；亚细胞定位分析发现，有8个lncRNA存在于细胞质中；通过进一步数据挖掘、共线文献分析，预测其中的两个lncRNA分子［即生长阻滞特异性转录因子5（GAS5）和HOXC基因座转录因子（HOTAIR）］可作为关键ceRNA分子；构建ceRNA调控网络，GAS5与miRNA（即miR139-5p、miR-24-3p）及mRNA［即乳腺癌易感基因1（BRCA1）、肿瘤蛋白p53（TP53）、表皮生长因子受体（EGFR）、B细胞淋巴瘤2基因（BCL-2）、细胞癌基因（FOS）、H-Ras蛋白（HRAS）］组成ceRNA调控网络，HOTAIR与miRNA（即miR-30a-5p）及mRNA［即磷酸肌醇3激酶调控亚基2（PIK3R2）、TP53、丝蛋白（VIM）］组成ceRNA调控网络。（2）实时荧光定量PCR技术检测显示，与敏感组（设为1.0）比较，耐药组卵巢癌组织中GAS5的表达水平为2.1±1.6，HOTAIR的表达水平为3.5±1.9，两组分别比较，差异均有统计学意义（ P=0.011， P<0.01）；Cox回归模型多因素分析显示，GAS5、HOTAIR表达为影响卵巢癌患者无病进展生存率和总生存率的独立危险因素（ P<0.05）。GAS5与HOTAIR联合检测诊断卵巢癌的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.871，显著高于GAS5单独检测和HOTAIR单独检测（AUC分别为0.678、0.863），分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。 结论:GAS5与HOTAIR高表达与卵巢癌耐药密切相关，可作为卵巢癌化疗反应的潜在预测指标；GAS5与HOTAIR联合检测对卵巢癌患者具有一定的诊断效能。这种利用ceRNA调控网络预测关键分子的方法，为卵巢癌的诊断和治疗提供了新的思路。

目的:探索SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征分析及功能预测。方法:探究了hsa_circ_0004777的基本特征，包括验证反向剪接位点，RNase R消化实验，细胞内RNA的胞质胞核分布，蛋白翻译潜能的预测。此外，使用生物信息学方法，预测hsa_circ_0004777结合的微小RNA（microRNA，miRNA）以及miRNA的靶基因，并且构建了circRNA-miRNA-mRNA的网络图。再对预测到的miRNA的靶基因进行基因本体论（gene ontology，GO）功能富集分析和信号通路富集分析。结果:hsa_circ_0004777的形成是由SOX13基因第4号外显子反向剪接至第2号外显子，hsa_circ_0004777能抵抗RNase R处理，主要分布在细胞质。生信预测hsa_circ_0004777通过作为hsa-miR-1225-3p、hsa-miR-637、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-384、hsa-miR-660-5p、hsa-miR-942-5p、hsa-miR-331-3p这8个miRNA的海绵来发挥作用；hsa_circ_0004777潜在结合的8个miRNA的靶基因在对聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、DNA模板、骨骼肌细胞分化等生物过程显著富集。结论:成功探索了SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征，并且从circRNA-miRNA-mRNA网络图中预测了它的功能，为进一步研究hsa_circ_0004777奠定了基础，也为更深入研究SOX13提供了思路。

目的 探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)/获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者抗逆转录病毒治疗效果与外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA(miR)-21、miR-223表达水平的关系.方法 选取2020年3月至2022年3月期间南通市第三人民医院门诊就诊行抗逆转录病毒治疗的142例HIV/AIDS患者为观察组,根据其治疗效果分为有效组(n=110)和无效组(n=32);选取同期体检健康者139例为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测PBMCs中miR-21、miR-223表达水平;采用多因素Logistic回归分析HIV/AIDS患者抗逆转录病毒治疗无效的影响因素.结果 观察组PBMCs中miR-21、miR-223表达水平高于对照组(P＜0.05).无效组治疗后3个月、治疗后6个月、治疗后12个月的PBMCs中miR-21、miR-223表达水平均高于有效组(P＜0.05).有效组随治疗时间延长,PBMCs中miR-21、miR-223表达水平逐渐降低(P＜0.05).无效组治疗前世界卫生组织(WHO)分期3期患者比例高于有效组(P＜0.05).miR-21、miR-223、治疗前WHO分期3期是影响HIV/AIDS患者抗逆转录病毒治疗无效的独立危险因素(P＜0.05).结论 miR-21、miR-223在一定程度上可反映HIV/AIDS患者抗逆转录病毒治疗效果,治疗无效患者PBMCs中miR-21、miR-223表达水平相对较高.

目的 分析血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-139-5p,组蛋白去乙酰化酶 4(histone deacetylase 4,HDAC4)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)与新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)脑损伤严重程度的关系.方法 选取 2017 年 1 月～2022 年 3 月广元市中心医院分娩的HIE新生儿 72 例为研究对象(研究组);同期健康的足月新生儿 75 例为对照组.实时荧光定量PCR检测血清中miR-139-5p,HDAC4 表达水平.酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清GFAP水平.Logistic回归分析影响HIE患儿重度脑损伤发生的因素.结果 与对照组相比,研究组血清GFAP(1.30±0.37ng/L vs 0.50±0.15ng/L),HDAC4 相对表达水平(2.05±0.39 vs 1.02±0.21)升高,miR-139-5p相对表达水平(0.63±0.14 vs 1.01±0.22)和NBNA评分(33.20±1.43分 vs 39.85±2.23分)降低,差异具有统计学意义(t=17.304,20.046,12.436,21.424,均P＜0.05);与轻中度组相比,重度组血清GFAP(1.61±0.47ng/L vs 1.16±0.33ng/L),HDAC4(2.43±0.37 vs 1.87±0.40)相对表达水平升高,miR-139-5p相对表达水平(0.38±0.10 vs 0.74±0.16)和NBNA评分(30.52±1.54分 vs 34.46±1.38 分)降低,差异具有统计学意义(t=4.690,5.669,9.900,10.884,均P＜0.05).Logistic回归分析显示,miR-139-5p低表达,HDAC4高表达,低NBNA评分,低出生后 1 min内Apgar评分是影响HIE患儿重度脑损伤发生的危险因素(Wald χ2=5.772～6.969,OR=1.519～1.709,均P＜0.05).Pearson分析显示,血清miR-139-5p表达水平与GFAP,HDAC4 呈负相关(r=-0.416,-0.579,均P＜0.05),血清HDAC4表达水平与GFAP呈正相关(r= 0.437,P＜0.05).Spearman分析显示,血清miR-139-5p表达水平与NBNA评分、出生后1 min内Apgar评分、出生后5 min内Apgar评分呈正相关(r= 0.398,0.367,0.348,均P＜0.05);血清HDAC4 表达水平与NBNA评分、出生后 1 min内Apgar评分、出生后 5 min内Apgar评分呈负相关(r=-0.364,-0.345,-0.332,均P＜0.05).结论 HIE患儿血清中miR-139-5p表达降低,HDAC4 表达升高,miR-139-5p,HDAC4与HIE患儿脑损伤严重程度有关.

目的 探讨外周血微小RNA(miR)-29b、miR-139水平与外周血辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2的相关性及对银屑病的诊断价值.方法 选取2020年4月至2021年4月在该院入院治疗的89例银屑病患者为银屑病组,根据银屑病疾病分期将患者分为活动期37例和静止期52例,根据皮损严重程度分为轻度组24例、中度组36例和重度组29例.另选取同期来该院进行体检的体检健康者60例作为对照组.采用实时荧光定量PCR检测外周血miR-29b、miR-139及T细胞转录因子(T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA3)水平;流式细胞仪检测外周血Th1、Th2细胞比例;酶联免疫吸附试验检测血清Th1、Th2相关细胞因子水平;Pearson相关分析银屑病患者外周血 miR-29b、miR-139水平与Th1/Th2、T-bet、GATA3的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血miR-139、miR-29b水平对重度银屑病的诊断价值.结果 银屑病组miR-139、T-bet、IL-2、IFN-γ水平、Th1细胞比例、Th1/Th2均高于对照组(P<0.05),miR-29b、GATA3、IL-4、IL-10水平、Th2细胞比例均低于对照组(P<0.05);活动期患者miR-139、T-bet、IL-2、IFN-γ水平、Th1细胞比例、Th1/Th2高于静止期患者(P<0.05),miR-29b、GATA3、IL-4、IL-10水平、Th2细胞比例低于静止期患者(P<0.05);Th1细胞比例、Th1/Th2、miR-139、T-bet、IL-2、IFN-γ水平随着皮损严重程度增加呈升高趋势,Th2细胞比例、miR-29b、GATA3、IL-4、IL-10水平随着皮损严重程度增加呈降低趋势(P<0.05);银屑病患者外周血miR-139水平与Th1/Th2、T-bet呈正相关,与GATA3呈负相关(P<0.05);miR-29b水平与Th1/Th2、T-bet呈负相关,与GATA3呈正相关(P<0.05).miR-139、miR-29b联合诊断重度银屑病的曲线下面积为0.917,灵敏度为93.10%,特异度为81.64%,二者联合诊断效能优于miR-139、miR-29b单独诊断(Z=2.882、1.993,P= 0.004、0.043).结论 银屑病患者外周血miR-139水平升高,miR-29b水平降低,与Th1/Th2、Th1/Th2相关细胞水平及转录因子具有一定的相关性,二者联合对银屑病的诊断具有较高效能.

目的 探究微小RNA(miR)-139-5p靶向受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1/RIPK3/混合系列蛋白激酶结构域蛋白(MLKL)信号通路对慢性脑低灌注(CCH)大鼠认知障碍的影响.方法 将60只SPF级SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、miR-NC组、miR-139-5p mimic组、miR-139-5p mimic+RIPK1抑制剂Nec-1组(miR-139-5p mimic+Nec-1组),每组12只.除Sham组外,其余组均采用永久性结扎双侧颈总动脉构建CCH模型.采用新物体识别实验、Morris水迷宫实验评价大鼠的认知功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠海马组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素6(IL-6)水平.实时荧光定量PCR(qPCR)法检测大鼠海马组织miR-139-5p及RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA表达.Western blot法检测大鼠海马组织RIPK1、RIPK3、MLKL、突触素(SYP)、突触后密度蛋白95(PSD95)、α-突触核蛋白(α-SYN)蛋白的表达.双萤光素酶报告基因实验验证miR-139-5p和RIPK1的靶向关系.结果 与Sham组相比,Model组大鼠分辨系数降低,目标象限停留时间缩短,海马组织miR-139-5p、GSH-Px、SOD水平降低,SYP、PSD95蛋白表达降低(P＜0.05),逃避潜伏期延长,海马组织MDA、TNF-α、IL-6水平升高,RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA和蛋白、α-SYN蛋白表达升高(P＜0.05).与Model组、miR-NC组相比,miR-139-5p mimic组相关指标的表达趋势与上述相反(P＜0.05).Nec-1进一步促进了上调miR-139-5p表达对CCH大鼠认知功能的恢复(P＜0.05).miR-139-5p和RIPK1存在结合位点.结论 上调miR-139-5p可能通过靶向抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路减轻CCH大鼠的认知障碍.

目的:探讨精神分裂症患者及正常人群血浆外泌体微小RNA(miRNA)的差异表达,初步了解差异表达miRNA在精神分裂症病程发展中的作用.方法:采用高通量测序技术检测48 例精神分裂症患者和48 名健康对照者的血浆外泌体miRNA的表达水平,构建miRNA差异表达谱.预测表达差异显著的miRNA的靶基因,再对靶基因进行GO功能注释和KEGG通路分析,确定差异表达miRNA的主要生物学功能及其可能参与的信号通路.结果:与对照组相比,精神分裂症患者血浆外泌体共筛选出353 个miRNA显著异常表达,其中157 个表达上调,196 个表达下调.通过GO富集和KEGG分析,上述差异表达的miRNAs主要涉及神经元细胞体、谷氨酸能突触、神经元间突触、突触前和突触膜等细胞组成,并主要参与轴突新生、化学突触传递调节、跨突触信号调节等生物过程,可能通过MAPK信号通路、PI3K Akt信号通路、TNF信号通路、Wnt信号通路、FoxO信号通路、多巴胺能突触及Hippo等信号通路参与精神分裂症的发生和发展过程.结论:经药治疗精神分裂症患者血浆外泌体中miRNAs存在显著的差异性表达,miRNA-206、miR-142-5p、miR-139-5p、miR-133b等miRNA可能通过MAPK信号通路、PI3K Akt信号通路等在精神分裂症的发生发展过程中发挥重要作用.