目的:研究肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)靶向调控微小RNA-142-3p(miR-142-3p)导致卵巢癌化疗耐药的机制。方法:收集2016年2月至2019年2月陕西省人民医院80对卵巢癌组织及对应非癌正常组织标本，通过实时荧光定量PCR法检测卵巢癌组织和非癌正常组织中MALAT1及miR-142-3p的相对表达量，并分析二者表达的相关性；通过CCK-8实验验证异常表达的MALAT1及miR-142-3p对卵巢癌Hey细胞增殖和化疗药物5-氟尿嘧啶及顺铂敏感性的影响；通过双荧光素酶报告基因实验(分4组：MALAT1 wt组、MALAT1 wt＋miR-142-3p mimic组、MALAT1 mut组和MALAT1 mut＋miR-142-3p mimic组)检测miR-142-3p与MALAT1的靶向关系；通过RNA免疫沉淀反应实验验证MALAT1与miR-142-3p的靶点。结果:在卵巢癌组织和对应非癌正常组织中，MALAT1的相对表达量分别为0.000 52(0.002 56)、0.000 47(0.000 89)，差异有统计学意义( Z＝2.365， P＝0.018)；miR-142-3p的相对表达量分别为0.001 19(0.002 69)、0.001 61(0.008 48)，差异有统计学意义( Z＝2.935， P＝0.003)；二者在卵巢癌组织中的表达呈负相关( r＝－0.474， P<0.001)。miR-142-3p在miR-142-3p mock组的相对表达量明显低于MALAT1＋miR-142-3p mimic组(0.004 18±0.001 24 vs. 0.006 51±0.000 28； t＝3.174， P＝0.017)。MALAT1 wt组与MALAT1 wt＋miR-142-3p mimic组的相对荧光富集度分别为2.27±0.86、31.10±6.05，差异具有统计学意义( t＝8.172， P<0.001)。Hey细胞转染MALAT1过表达质粒48、72、96 h后，MALAT1过表达组和对照组的吸光度( A)值(0.522±0.021 vs. 0.433±0.021；0.644±0.012 vs. 0.544±0.051；0.887±0.055 vs. 0.698±0.042)差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Hey细胞过表达MALAT1后，5-氟尿嘧啶0.10 ng/μl浓度时，MALAT1过表达组的细胞增殖速度明显较对照组快(0.615±0.036 vs. 0.506±0.042； t＝4.432， P＝0.002)，5-氟尿嘧啶1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均 P<0.05)；顺铂0.01 ng/μl浓度时，MALAT1过表达组的细胞增殖速度明显较对照组快(0.777±0.015 vs. 0.733±0.039； t＝2.355， P＝0.023)，顺铂0.10、1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均 P<0.05)。Hey细胞过表达miR-142-3p后，5-氟尿嘧啶0.10 ng/μl浓度时，miR-142-3p过表达组的细胞增殖速度明显较对照组细胞慢(0.512±0.051 vs. 0.744±0.119； t＝4.028， P＝0.004)，5-氟尿嘧啶1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均 P<0.05)；顺铂0.10 ng/μl浓度时，miR-142-3p过表达组的细胞增殖速度明显较对照组慢(0.520±0.043 vs. 0.674±0.096； t＝3.441， P＝0.009)，顺铂1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均 P<0.05)。采用0.10、1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度的5-氟尿嘧啶和顺铂分别处理卵巢癌Hey细胞后，MALAT1过表达组、MALAT1＋miR-142-3p组与对照组间的细胞增殖差异均具有统计学意义(均 P<0.05)，进一步两两比较发现，MALAT1＋miR-142-3p组均显著慢于MALAT1过表达组(均 P<0.05)。 结论:MALAT1通过靶向调控miR-142-3p使卵巢癌细胞对5-氟尿嘧啶及顺铂的敏感性降低，导致卵巢癌化疗耐药。

目的:研究血清中微小核糖核酸(miRNA)的特异性表达与儿童扩张型心肌病(DCM)发生的相关性。方法:收集2013年11月至2016年3月就诊于北京安贞医院小儿心脏中心且被确诊为DCM的儿童血清(DCM组，16例)及同期于北京安贞医院体检的年龄性别匹配的健康儿童血清(健康对照组，12例)，并进行miRNA测序。后期扩大样本量(DCM组扩大为30例，对照组扩大为16例)，对测序结果中有统计学意义的11种miRNAs行实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证。结果:血清miRNA测序结果，DCM组患儿较健康对照组儿童有172个miRNAs上调(fold change>2， P<0.001)，未发现下调的miRNAs。选择显著上调的top11miRNAs进行qRT-PCR试验验证，发现DCM组患儿血清中8个miRNAs(let-7f、let-7g、miR142-5p、miR143-3p、miR26a、miR27a-3p、miR27b-3p、miR126-3p)显著上调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在诊断DCM的受试者工作特征(ROC)曲线中，血清miR142-5p、miR143-3p、miR27b-3p、miR126-3p的曲线下面积分别为0.983、0.992、0.915、0.950，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:本研究发现4个血清miRNAs(miR-142-5p、miR-126-3p、miR-143-3p和miR-27b-3p)可用来区分DCM患儿和健康儿童。循环miRNAs可作为有效的儿童DCM筛查工具。

目的:探究环状RNA(circRNA)-PRKCH通过微小RNA(miRNA，miR)-142-3p/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)轴调控炎症刺激软骨细胞生物学特征的作用及分子机制。方法:比较30例骨关节炎患者与30例正常人外周血血清中circ-PRKCH的表达差异，并在ATDC5细胞中探究circ-PRKCH对细胞增殖、凋亡以及炎性因子分泌等生物学特性的影响。预测并验证circ-PRKCH的下游miRNA、靶基因以及分子间的调控关系。两组间比较应用Student’s t检验。 结果:circ-PRKCH在骨关节炎患者外周血血清中的表达水平(7.130±1.489)显著高于正常人(2.354±0.982， t＝14.670， P<0.01)，并且在脂多糖(LPS)刺激的ATDC5细胞中，circ-PRKCH的表达水平升高(7.890±0.354比1.000±0.757， t＝－14.289， P<0.01)。干扰circ-PRKCH同时抑制miR-142-3p或过表达TRAF6可恢复炎症对ATDC5细胞增殖活性的抑制作用(1.541±0.050比0.571±0.051， t＝27.161， P<0.01；1.541±0.050比0.555±0.043， t＝30.015， P<0.01)、对细胞凋亡的诱导作用(3.963±0.305比15.557±1.146， t＝－16.927， P<0.01；3.963±0.305比15.257±0.370， t＝－40.763， P<0.01)、对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的促进作用(297.464±17.862比591.626±40.527， t＝－11.504， P<0.01；297.464±17.862比594.953±20.252， t＝－19.081， P<0.01)以及对白细胞介素-8(IL-8)分泌的促进作用(234.309±11.755比661.416±33.197， t＝－21.006， P<0.01；234.309±11.755比658.751±21.369， t＝－30.143， P<0.01)。 结论:circ-PRKCH可通过miR-142-3p/TRAF6轴调控炎症刺激软骨细胞的生物学特征。

目的:构建基于微小RNA(miRNA，miR)表达量的肺腺癌预后列线图风险模型，研究其对肺腺癌患者生存的预测价值。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载获取肺腺癌miRNA表达数据，包括miRNAseq和临床数据。应用R 3.6.2软件中的edgeR包筛选肺腺癌组织和正常肺组织的差异基因，以│logFC│>2， P<0.05为筛选条件。应用单因素回归分析、LASSO回归分析、多因素Cox回归分析筛选与预后明显相关的miRNAs，建立风险评分(risk score)方程，构建列线图模型。应用内部验证法和图像校准法、受试者工作特征曲线(ROC)评价模型的特异性和敏感性。通过风险评分及生存曲线对患者进行生存分析。分析miRNAs在各种族表达差异。 结果:识别127个差异miRNA，下调16个，上调111个。单因素回归分析得到14个与预后相关的miRNAs，LASSO回归分析得到13个与预后相关的miRNAs( P<0.05)。多因素回归分析结果显示hsa-miR-1293、hsa-miR-450a-1、hsa-miR-5571、hsa-miR-3189、hsa-miR-490、hsa-miR-142、hsa-miR-31、hsa-miR-548v是显著的预测因素( P<0.05)。应用这8个miRNA构建列线图模型，Concordance值(0.701)及图像校准显示该列线图预测能力较好。1、3、5年曲线下面积(AUC)为0.721、0.748、0.733。生存分析结果显示高风险组较低风险组生存率低( P<0.05)，随着风险评分数值的升高，死亡人数增多。KM生存曲线显示hsa-miR-1293、hsa-miR-5571、hsa-miR-490、hsa-miR-142、hsa-miR-31、hsa-miR-548v与肺腺癌生存预后相关( P<0.05)。另外这8个miRNAs表达种族差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:成功构建基于miRNAs表达预测肺腺癌预后的列线图模型，其预测准确性较高。

目的 检测妊娠期糖尿病(GDM)患者血清微小RNA(miR)-142-3p、miR-497-5p表达水平,分析其对GDM的诊断价值.方法 选取2019年6月-2022年6月在河南中医药大学第五临床医学院妇产科行产前检查的142例GDM孕妇作为GDM组,另外随机选择一般资料与GDM组匹配的142名正常糖耐量孕妇作为对照组.比较两组孕妇血清miR-142-3p、miR-497-5p水平,使用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-142-3p、miR-497-5p水平对孕妇发生GDM的评估价值.结果 与对照组比较,GDM组患者miR-142-3p水平、有糖尿病史占比、经产妇占比、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)升高,血清miR-497-5p水平显著降低,差异均有统计学意义(t=8.303、6.818、9.551、8.781、9.054、6.464、9.475、11.671、7.883,P均＜0.05).miR-142-3p、miR-497-5p联合检测预测孕妇发生GDM的ROC曲线下面积(AUC)为0.838,敏感性为73.24％,特异性为82.39％,优于各自单独诊断(Z=4.379、3.170,P均＜0.01).结论 GDM患者血清miR-142-3p表达显著上调、miR-497-5p表达显著下调,二者联合对孕妇是否发生GDM有较好的预测价值.

目的 探究强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)模型小鼠和临床患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中微小 RNA-142-5p(miR-142-5p),细胞因子信号转导抑制因子 1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)mRNA表达及其对免疫功能的影响.方法 通过实时荧光定量(quantitative real time PCR,qRT-PCR)检测2022年1月～2023年3月商丘市第一人民医院收治的30例确诊的AS患者(患者组)和30例健康体检者(健康组)的PBMC中miR-142-5p和SOCS1 mRNA水平.采用牛蛋白聚糖联合完全弗氏佐剂诱导AS小鼠模型,然后将小鼠分为对照组、模型组、阴性组和拮抗剂组.对照组和模型组小鼠尾静脉注射生理盐水,阴性组和拮抗剂组小鼠分别尾静脉注射NC-antagomir和miR-142-5p-antagomir.治疗2周后,分别评估各组小鼠的关节炎症状评分.通过苏木精伊红(hematoxylin eosin,HE)染色评价踝关节形态.采用ELISA法检测小鼠血清中Th1细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、Th2细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、Th17细胞因子白细胞介素-17(IL-17)和Treg细胞因子叉头盒蛋白P3(FOXP3)的表达水平.通过 qRT-PCR 和 Western blot 检测 PBMC 和踝关节组织中 miR-142-5p,SOCS1,IFN-γ,IL-4,IL-17和FOXP3的mRNA和蛋白表达水平.结果 与健康组比较,患者组PBMC中miR-142-5p水平升高(3.03±0.99 vs 1.00±0.21),SOCS1 mRNA 水平降低(0.41±0.09 vs 1.00±0.18),差异具有统计学意义(t=10.997,15.956,均P＜0.001).与对照组比较,模型组小鼠踝关节组织中miR-142-5p水平(4.00±0.52 vs 1.00±0.04)升高,IFN-γ和IL-17的mRNA和蛋白水平均升高,SOCS1,IL-4和FOXP3的mRNA和蛋白水平均降低,差异具有统计学意义(t=23.356,31.420,48.056,47.224,38.035,29.007,54.183,28.123,55.155,26.758,45.346,均 P＜0.05);关节炎症状评分升高(7.83±0.94 vs 0.00±0.00,t=22.212,P＜0.05),踝关节结构破坏明显;血清中 IFN-γ,IL-17 水平以及 IFN-γ/IL-4 比值(0.81±0.08 vs 2.08±0.33)和 IL-17/FOXP3 比值(0.41±0.03 vs 1.27±0.10)均升高,差异具有统计学意义(t=15.382,35.779,15.412,35.130,均P＜0.05).与阴性组比较,拮抗剂组小鼠踝关节组织中miR-142-5p水平(1.47±0.10 vs 3.89±0.33)降低,IFN-γ 和 IL-17 的 mRNA 和蛋白水平均降低,SOCS1,IL-4 和 FOXP3 的 mRNA 和蛋白水平均升高,差异具有统计学意义(f=18.846,22.969,43.454,32.617,23.259,20.881,41.832,11.994,32.977,15.190,35.834,均 P＜0.05);关节炎症状评分降低(7.42±1.24 vs 2.75±0.75,t=13.233,P＜0.05),踝关节形态明显改善;血清中 IFN-γ,IL-17 水平以及IFN-γ/IL-4 比值(1.22±0.11 vs 1.91±0.19)和IL-17/FOXP3 比值(0.69±0.05 vs 1.23±0.12)均降低,差异具有统计学意义(t=8.688,22.972,8.377,22.007,均 P＜0.05).结论 miR-142-5p 在AS中高表达,使用拮抗剂下调miR-142-5p可能通过上调SOCS1进而降低Th1/Th2和Th17/Treg比值,从而改善AS小鼠的免疫平衡并抑制AS的进展.

目的 探究微小RNA(miR)-146a、miR-181a和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在幽门螺杆菌(Hp)相关胃黏膜炎症中的表达及临床意义.方法 选取2020年5月-2023年1月江南大学附属医院收治的208例慢性胃炎患者为研究组,根据是否发生Hp感染分为Hp阳性组142例和Hp阴性组66例,并选取同期210名健康体检者为对照组,采集外周血检测miR-146a、miR-181a和MIF mRNA相对表达量,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-146a、miR-181a和MIF对Hp相关胃黏膜炎症的诊断价值.结果 研究组miR-146a、miR-181a和MIF mRNA相对表达量均高于对照组(P＜0.05),Hp阳性组高于Hp阴性组(P＜0.05);Hp阳性组上述指标mRNA相对表达量与胃痛、反酸、烧心、Hp感染史、饮食习惯、发病部位有关(P＜0.05);ROC曲线结果显示,miR-146a、miR-181a和MIF联合检测诊断Hp相关胃黏膜炎症的临床价值较高,曲线下面积(AUC)、敏感度和特异度分别为0.908、88.70％和75.80％.结论 miR-146a、miR-181a和MIF在慢性胃炎及Hp相关胃黏膜炎症中呈现高表达,其在Hp相关胃黏膜炎症中高表达与多种因素有关,三者联合检测对Hp相关胃黏膜炎症的诊断价值较高.

目的 探究血清GATA结合蛋白4(GATA4)、微小RNA-195-5p(miR-195-5p)与急性冠脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后支架内再狭窄关系.方法 选取2018年1月至2021年1月于菏泽市立医院行PCI术的非ST段抬高型ACS患者182例,术后对患者随访12个月,根据是否发生支架内再狭窄分为支架内再狭窄(40例)和无支架内再狭窄(142例).采用实时荧光定量PCR法检测研究对象PCI术后血清中miR-195-5p、GATA4 mRNA水平.Pearson法分析患者血清GATA4与miR-195-5p的相关性.利用ROC曲线评价血清GATA4、miR-195-5p水平对ACS患者PCI术支架内再狭窄的诊断价值,Logistic回归分析影响ACS患者术后支架内再狭窄的危险因素.结果 与无支架内再狭窄组相比,支架内再狭窄组血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平、GATA4 mRNA较高(P＜0.05),血清miR-195-5p水平较低(P＜0.05).Pearson分析显示,支架内再狭窄的ACS患者血清GATA4与miR-195-5p呈负相关(P＜0.05).Logistic分析显示,LDL-C(OR=1.655,95%CI:1.105～2.478,P=0.014)、miR-195-5p(OR=1.702,95%CI:1.191～2.432,P=0.003)是ACS患者术后支架内再狭窄的危险因素(P＜0.05),GATA4(OR=0.528,95%CI:0.362～0.769,P=0.528)是ACS患者术后支架内再狭窄的保护因素(P＜0.05).ROC曲线显示,血清miR-195-5p、GATA4对ACS患者PCI术后支架内再狭窄预测的曲线下面积(AUC)分别为0.902、0.846,miR-195-5p联合GATA4对ACS患者PCI术后支架内再狭窄预测的AUC为0.959.结论 ACS患者PCI术后支架内再狭窄患者miR-195-5p水平下调,GATA4 mRNA水平上调,对患者PCI术后支架内再狭窄具有预测价值.

脑卒中时缺血缺氧致脑组织功能损伤,且缺血后脑组织再恢复血液供应时,大量自由基、钙超载等引起脑缺血/再灌注损伤,进一步加重病情.自噬是一种维持细胞内环境稳态的自我保护机制,但过度自噬引起脑组织损伤.MiRNA为小的内源性非编码RNA分子,通过与其靶基因mRNA的3'-UTR中的互补序列结合,导致翻译抑制或mRNA降解,从基因水平上调控多种生理活动.MiRNA不仅直接作用于自噬相关蛋白,还可通过多种信号通路,参与缺血/再灌注诱导的自噬调控.但关于miRNA调控脑缺血/再灌注诱导的自噬信号通路尚缺乏系统性归纳与分析.本文综述了miRNA-124、miRNA-298、miRNA-202-5p、miRNA-142以及miRNA-26b等miRNA通过不同信号通路调控脑缺血/再灌注中的细胞自噬,为脑卒中的自噬研究提供了系统的理论思路.

目的 探索miR-142-3p在减轻尘螨诱导的儿童过敏性气道炎症中的作用,为解析儿童过敏性气道炎症发病机制提供新思路.方法 于2022年9-11月在江南大学附属中心医院收集15例尘螨过敏哮喘患儿和15例健康儿童血清,采用荧光定量聚合酶联反应(PCR)法检测血清中miR-142-3p表达水平.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,采用荧光定量PCR法和Western blotting法检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因和蛋白表达水平.应用双荧光素酶报告基因系统评估miR-142-3p对HMGB1的靶向调控,采用Western blotting方法技术检测miR-142-3p干预后人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)中下游调控蛋白表达.选择6～8周龄雌性C57BL/6小鼠,随机分为磷酸缓冲盐溶液(PBS)阴性对照组、尘螨致敏气道炎症组和尘螨致敏气道炎症+miR-142-3p干预组;采用苏木精-伊红(HE)染色评估小鼠气道炎症反应,应用瑞氏-吉姆萨染色和ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞和炎症因子表达水平.结果 尘螨过敏哮喘患儿血清miR-142-3p表达水平较健康儿童血清降低(1.33±0.21,4.74±0.62,t=5.22,P＜0.05).粉尘螨粗提液(DFE)刺激 BEAS-2B 细胞后,miR-142-3p 表达水平降低了(0.82± 0.25);转染miR-142-3p后,其表达水平提升了(0.55±0.14)(t值分别为3.31,3.94,P值均＜0.05).miR-142-3p预处理可使DFE刺激后BEAS-2B细胞中炎症因子IL-6和TNF-α表达水平均降低(2.25±0.46,6.58±1.95)(t值分别为4.86,3.38,P值均＜0.05);BEAS-2B细胞中miR-142-3p通过负调控HMGB1表达,降低下游调控蛋白Toll-样受体4蛋白(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)表达.小鼠致敏模型显示miR-142-3p能够减轻尘螨致敏小鼠肺组织炎症细胞浸润;并且使尘螨致敏小鼠BALF中炎症因子白细胞介素-4(1L-4)、白细胞介素-5(IL-5)、HMGB1水平均降低[(107.60±10.43)pg/mL,(95.78±13.14)pg/mL,(2.52±0.87)pg/mL,t 值分别为 10.32,7.29,2.90,P值均＜0.05].结论 miR-142-3p 通过负调控 HMGB1/TLR4/NF-κB通路减轻尘螨引起的儿童过敏性气道炎症.