目的:探讨胃癌组织中微小RNA-301(miR-301)表达水平与肿瘤细胞对奥沙利铂(L-OHP)化疗敏感性的关系。方法:收集75例新鲜胃癌组织及癌旁黏膜组织，荧光实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测组织中miR-301及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)、NFKB抑制物与Ras互作因子类似物2基因(NKIRAS2) mRNA表达；将组织制备单细胞悬液，噻唑蓝(MTT)法检测胃癌细胞对L-OHP的体外敏感性；分析miR-301与bcl-2、Survivin、NKIRAS2 mRNA在胃癌组织中的相关关系。生物信息学技术分析miR-301的靶基因。采用 t检验、Spearman相关分析等方法进行统计学处理。 结果:胃癌组织中miR-301的表达明显高于癌旁黏膜组织( t＝-12.189， P<0.01)。胃癌组织中bcl-2、Survivin的mRNA表达明显高于癌旁黏膜组织( t＝18.916、21.220， P<0.01)，而NKIRAS2的mRNA则低于癌旁黏膜组织( t＝-19.311， P<0.01)。MTT结果显示胃癌细胞在L-OHP作用后相对活性为(53.773±21.067)%；以miR-301表达的平均值为阈值将胃癌组织分为miR-301高表达组和低表达组，发现高表达组的胃癌原代细胞对L-OHP的活性高于低表达组( t＝-2.903， P<0.01)；Spearman相关分析显示，胃癌组织中miR-301与bcl-2，miR-301与Survivin mRNA表达呈正相关( r＝0.382、0.477， P<0.01)；miR-301与NKIRAS2 mRNA表达呈负相关( r＝-0.614， P<0.01)。生物信息学分析显示miR-301对NKIRAS2有直接调控作用。 结论:miR-301可能通过调控bcl-2、Survivin、NKIRAS2基因表达而影响了胃癌对L-OHP的敏感性。

目的:探讨Smad4作为微小RNA(miRNA，miR)-301a调控的靶基因的证据，以及介导高糖促进前列腺癌细胞增殖的作用。方法:采用TargetScan和PicTar数据库寻找miR-301a的分子靶点。采用转染miR-301a模拟物、实时定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法(Western blot)法[25 μg，10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)]检测miR-301a和Smad4的表达，双荧光素酶报道基因实验检测miR-301a对Smad4的调控，细胞计数试剂盒(CCK-8)法(10 μl/孔CCK-8溶液，2 h)测定细胞增殖，以流式细胞术进行细胞周期分析。两组数据的均数检验采用 t检验。 结果:生物信息学分析及荧光素酶报道实验均表明Smad4是miR-301a的靶点，上调miR-301a后，Smad4 mRNA及蛋白表达均明显降低。同时上调miR-301a及Smad4表达96 h后，前列腺癌细胞增殖能力升高160%( P<0.05)，差异有统计学意义。miR-301a可抑制Smad4的表达，从而促进细胞从G 1期向S期过渡。在PC-3细胞，转染miR-301a前的细胞周期比例为G 0/G 1 62.60%，S28.00%，G 2/M 9.40%；转染后为G 0/G 1 49.97%，S 41.04%，G 2/M 8.99%(转染前后G 0和S期的比例差异有统计学意义， P<0.05)；在DU-145细胞，转染miR-301a前G 0/G 1 65.16%，S 24.54%，G 2/M 10.30%；转染后G 0/G 1 53.34%，S 36.67%，G 2/M1 0.00%(转染前后G 0和S期比例差异有统计学意义， P<0.05)。沉默Smad4的表达导致，细胞周期的G 1期缩短，S期延长，与过表达miR-301a的结果相似；过表达Smad4可阻断miR-301a诱导的G 1/S期转化。 结论:miR-301通过下调靶蛋白Smad4的表达来调控前列腺癌细胞增殖。Smad4在高糖相关的前列腺癌生长中发挥重要作用。

目的 探讨孕产妇胎膜早破并发生殖道感染与微小RNA-125(miR-125)、生长调节致癌基因-α(GRO-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的关系及其影响因素.方法 选取2019年1月-2022年12月江西省中西医结合医院收治的301例胎膜早破孕产妇为研究组,根据孕产妇胎膜早破并发生殖道感染发生情况分为感染组和非感染组,病例数分别为:61例、240例;另选取同期非胎膜早破健康孕妇322名为对照组,采用实时荧光定量PCR法、双抗体夹心酶联免疫吸附法分别检测外周血miR-125、GRO-α、MCP-1水平.采用Logistic分析法分析孕产妇胎膜早破并发生殖道感染的影响因素.结果 Logistic回归分析显示,孕周＜35周、破膜时间≥12 h、产后出血、合并妊娠期高血压、合并妊娠期糖尿病均是孕产妇胎膜早破并发生殖道感染的影响因素(OR=2.056;2.113;2.004;2.275;1.954,P＜0.05);研究组 miR-125、GRO-α、MCP-1 水平高于对照组(P＜0.05),感染组miR-125、GRO-α、MCP-1表达水平高于非感染组(P＜0.05).结论 miR-125、GRO-α、MCP-1在孕产妇胎膜早破并发生殖道感染患者中呈高表达;孕周＜35周、破膜时间≥12 h、产后出血、合并妊娠期高血压、合并妊娠期糖尿病均是孕产妇胎膜早破并发生殖道感染的影响因素.

目的 通过生物信息学分析,探索肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断中潜在的miRNA标志物.方法 收集GEO数据库中诊断为HCC患者的临床资料并进行筛选,通过R软件识别差异表达的miRNA、mRNA,运用MiRWalk数据库预测筛选出来的差异miRNA的下游靶mRNA.利用网络生物信息分析工具进行gene ontology(GO)功能注释分析和kyoto encyclopedia of genes and genomes(KEGG)通路富集分析,建立蛋白互作网络(protein-protein interaction network,PPI),并通过Cytoscape软件分析出关键基因,进而构建mRNA-miRNA的调控网络.结果 共筛选出了152个高表达和109个低表达的差异表达基因,其中上调的关键基因为BUB1B、AURKA、CCNA2、TOP2A、RACGAP1、MKI67、RRM2、KIF4A、NCAPG、FOXM1;下调的关键基因为IGF1、HGF、PDGFRA、CXCL12、DCN、TGFA、NRG1、FOXO1、AR、NAMPT.通过MiRWalk数据库的预测数据,推测出对这些关键基因进行调控的miRNA,最终发现具有诊断意义的miRNA,其中hsa-miR-301a、hsa-miR-221、hsa-miR-222、hsa-miR-15b、hsa-miR-320c、hsa-miR-587和hsa-miR-648的高表达提示HCC预后不良;而hsa-miR-575的低表达提示HCC预后不良.结论 通过生物信息学手段筛选出HCC患者的差异表达基因,构建mRNA-miRNA调控网络,明确了在HCC诊断中的关键miRNA,为HCC的临床无创筛查提供了新的视角和方向.

目的 探讨抑制miR-301a对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法 体外培养人脑胶质瘤U87细胞,将细胞分为空白对照组、阴性转染组(阴性序列转染U87细胞)、miR-301a抑制剂转染组(miR-301a抑制剂转染U87细胞).采用MTT法检测各组细胞的增殖;平板细胞克隆形成实验检测菌落形成;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;RTPCR法检测细胞中miR-301a、PTEN mRNA表达;Western blot检测细胞PTEN、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9蛋白表达.结果 与空白对照组、阴性转染组比较,miR-301a抑制剂转染组转染后不同时间点的细胞抑制率均升高,呈时间依赖性(均P＜0.05).miR-301a抑制剂转染组的菌落数量明显降低,迁移距离短,细胞迁移、侵袭数量明显降低,细胞凋亡率升高(均P ＜0.05);miR-301amRNA表达水平降低,PTEN mRNA表达水平升高;PTEN、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(均P＜0.05).结论 抑制miR-301a的表达,可抑制胶质瘤U87细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进胶质瘤U87细胞凋亡.

目的:检测白塞氏病(BD)患者和正常人群血浆中微小核糖核酸(microRNA,miRNA)的差异表达谱,探讨miRNA在BD发病中的作用,寻找与BD相关的血浆生物标记物.方法:收集15例活动期BD患者和15例正常人的抗凝静脉血,离心获得血浆,提取总RNA,经miRNA标记、miRNA阵列杂交、miRNA阵列扫描和分析获得BD患者异常表达的miRNA谱.通过miRTarBase(靶基因数据库)检索差异性表达的miRNA已经过验证的靶基因,并选取与免疫学相关的差异性表达的miRNA进行Real time-PCR验证.结果:活动期BD患者血浆中hsa-miR-34c-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-483-3p较正常人表达上调,hsa-miR-301a-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-454-3p、hsa-miR-17-5p、hsa-miR-199a-5p较正常人表达下调.结论:miRNA的差异性在BD的发生发展过程发挥重要作用,异常表达的miRNA可能通过Notch1和SMAD4信号通路促进BD发病.

目的 探讨miRNA-301a-3p对结直肠癌细胞HCT-8化疗敏感性的影响及可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测结直肠癌亲本细胞株HCT-8和对5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞株HCT-8/FU化疗敏感性,RT-PCR法检测miRNA-301a-3p和PTEN基因在HCT-8和HCT-8/FU细胞中的表达.在HCT-8/FU细胞中转染miRNA-301a-3pinhibitor,CCK-8检测化疗敏感性.通过生物信息学软件分析miRNA-301a-3p的下游靶基因,双莹光素酶报告基因法进行验证.观察抑制PTEN的表达对化疗敏感性的影响,并检测抑制miRNA-301a-3p表达后对PTEN、AKT及pAKT蛋白表达的影响.结果 HCT-8/FU细胞株的化疗敏感性明显低于HCT-8细胞株.miRNA-301a-3p在HCT-8/FU细胞中的表达明显高于HCT-8细胞,但PTEN在HCT-8/FU细胞中的表达则明显低于HCT-8细胞.miRNA-301a-3pinhibitor抑制HCT-8/FU细胞中miRNA-301a-3p的表达后,HCT-8/FU细胞化疗敏感性明显增高.PTEN是miRNA-301a-3p的靶基因.抑制PTEN表达可降低HCT-8/FU细胞化疗敏感性,抑制miRNA-301a-3p表达可提高PTEN蛋白表达,并下调pAKT蛋白表达.结论 下调HCT-8/FU细胞株中miRNA-301a-3p的表达可提高细胞的化疗敏感性,其机制可能与miRNA-301a-3p/PTEN/AKT信号通路有关.

目的:研究大鼠星形胶质细胞中微小RNA-301a-3p(miR-301a-3p)对缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的靶向调控作用及其作用位点.方法:合成miR-301a-3p agomir和miR-301a-3p antagomir,转染至星形胶质细胞,Western blot检测各组细胞中Cx43蛋白的表达情况;构建重组载体wt-pEZX-MT05-Cx43和mut-pEZX-MT05-Cx43,采用双萤光素酶报告基因实验验证miR-301a-3p的靶基因;构建表达载体pcDNA3.1-Cx43,通过回复实验分析miR-301a-3p对细胞凋亡的影响.结果:将miR-301a-3p agomir转染到星形胶质细胞后,Western blot检测显示,与对照组相比,Cx43蛋白表达显著降低(P<0.05).双萤光素酶报告基因实验结果表明,miR-301a-3p能够与Cx43的3'-UTR结合,对其表达产生负调控;将不含Cx433'-UTR的重组载体pcDNA3.1-Cx43转染星形胶质细胞后,能够回复miR-301a-3p对Cx43蛋白表达的负调控作用,引起细胞凋亡.结论:Cx43是miR-301a-3p的一个靶基因,miR-301a-3p通过作用于Cx43 mRNA的3'-UTR而抑制其在大鼠星形胶质细胞中的表达.

目的:通过对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中的乳腺癌数据进行综合分析,寻找在乳腺癌中差异表达的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)、微小RNA(microRNA,miRNA)和信使RNA(messenger RNA,mRNA),构建乳腺癌竞争内源性RNA(competing endogenous RNA,ceR-NA)网络,识别和预测ceRNA网络在乳腺癌中的作用.方法:下载TCGA数据库中乳腺癌组织样本基因表达谱数据,寻找差异表达的lncRNA、miRNA和mRNA,通过miRcode、miRTarBase、TargetScan和miRDB四个数据库对差异表达的RNA之间的关系进行分析,构建以上调和下调的miRNA为中心的ceRNA网络.采用Kap-lan-Meier法分析乳腺癌ceRNA网络中的lncRNA、miRNA和mRNA表达量与患者生存预后的关系,采用基因富集分析法对乳腺癌ceRNA网络中mRNA基因功能和调控通路进行分析.结果:在乳腺癌中异常表达的350个lncRNA、185个miRNA和2928个mRNA中,分别有23个lncRNA、27个miRNA、70个mRNA参与构建乳腺癌的ceRNA网络.Kaplan-Meier生存分析显示,lncRNA MAGI2-AS3(P=0.01)、GRIK1-AS1(P=0.03)以及miRNA hsa-miR-301b(P=0.01)、hsa-miR-503(P=0.04)和mRNA CCNE1(P=0.01)、KP-NA2(P=0.02)、FLI1(P=0.02)、TGFBR2(P=0.02)这8个基因与乳腺癌患者的生存预后显著相关.70个mRNA主要被富集到20条通路上,其中有15条通路与肿瘤有关,最显著的通路为"Pathways in cancer".结论:ceRNA网络在乳腺癌中发挥着重要的作用,多种差异表达基因与乳腺癌预后相关,可能成为潜在的肿瘤诊断标志物和治疗靶点.

目的 对影响乳腺癌(BRCA)预后的微小RNA(miRNA)进行探索挖掘,并探讨hsa-mir-301b作用机制.方法 使用miRNA抑制剂干扰BRCA细胞中hsa-mir-301b的表达,qRT-PCR检测hsa-mir-301b的表达水平;CCK-8实验检测细胞增殖能力;miRDB数据库预测hsa-mir-301b靶基因,同时通过GEPIA网站进一步筛选出BRCA中低表达,提示预后不良的候选靶基因2个,应用ENCORI及RNAhybrid在线预测靶基因NR3C2与hsa-mir-301 b的靶向关系;Western blot检测NR3C2蛋白表达水平.结果 与癌旁组织相比,hsa-mir-301b在BRCA组织中显著高表达,且高表达患者预后不良;hsa-mir-301b在乳腺癌细胞系MCF-7细胞系中表达量低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达(P＜0.0001),抑制hsa-mir-301b表达后,细胞活力下降.NR3C2为hsa-mir-301b的靶基因.NR3C2在BRCA患者组织中低表达,且低表达提示预后不良,并与hsa-mir-301b存在负相关关系;其3'非编码区域与hsa-mir-301b存在结合位点;Western blot实验证明hsa-mir-301b抑制剂能够促进NR3C2蛋白水平表达.结论 hsa-mir-301b在BRCA患者组织中及MCF-7细胞中高表达,发挥癌基因作用,其抑制剂能够减弱BRCA细胞MCF-7的活力,干扰NR3C2的表达.