目的:检测初治多发性大动脉炎（TAK）患者血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，分析其在TAK发病机制中的可能作用。方法:选2020年6月至11月北京协和医院风湿免疫科确诊的初治TAK患者10例，另选与之年龄性别匹配的健康对照者5例，分别通过RNA测序和蛋白质谱技术检测血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，筛选出差异表达的微小RNA和蛋白，并对其进行层次聚类分析、功能、信号通路和结构域富集分析，最终筛选出与血管炎有关的微小RNA和蛋白，探究其在TAK发病机制中的可能作用。统计学采用Fisher精确概率检验或 χ2检验。 结果:TAK患者血浆外泌体携带的差异表达的微小RNA 29个，其中miR-101-3p、miR-122-5p、miR-143-3p、miR-185-3p、miR-192-5p、miR-194-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20b-5p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-335-5p、miR-34a-5p、miR-3613-5p、miR-548ad-5p、miR-590-3p、miR-7-5p表达上调，miR-1249-3p、miR-141-3p、miR-199a-5p、miR-199b-5p、miR-200a-3p、miR-200c-3p、miR-204-5p、miR-29c-5p、miR-335-3p、miR-381-3p、miR-4433b-5p、miR-584-5p表达下调。差异表达的蛋白357个，其中236个表达上调，121个表达下调，最终筛选前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白。结论:血浆外泌体携带的miR-34a-5p、miR-200c-3p、miR-143-3p、miR-22-3p、miR-21-5p、前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白可能通过调节血管生理过程、炎症反应、自身免疫等过程参与TAK的发病机制，具有作为TAK生物标志物和治疗靶点的潜在作用。

目的:探讨lncRNA SNHG8对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其分子作用机制。方法:选取本院2017年1月至2019年1月收治的30例膀胱癌患者的癌组织及相应的癌旁组织；将膀胱癌T24细胞分为si-NC组、si-SNHG8组、miR-NC组、pcDNA组、pcDNA-SNHG8组、miR-335-5p组、si-SNHG8+anti-miR-NC组及si-SNHG8+anti-miR-335-5p组。对各组细胞采用qRT-PCR、MTT、Transwell、Western blot和双荧光素酶报告实验等检测并进行比较分析。结果:与癌旁组织比较，膀胱癌组织中SNHG8的表达水平升高，miR-335-5p表达水平下降(均 P<0.001)。抑制lncRNA SNHG8或过表达miR-335-5p后，T24细胞的活力、迁移和侵袭能力显著下降，CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低，p21蛋白表达水平升高(均 P<0.001)。lncRNA SNHG8靶向调控miR-335-5p的表达水平。与si-SNHG8+anti-miR-NC组比较，si-SNHG8+anti-miR-335-5p组的细胞活性、迁移能力、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高，p21蛋白表达水平降低(均 P<0.001)，即下调miR-335-5p表达可逆转抑制lncRNA SNHG8表达对T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 结论:下调lncRNA SNHG8可通过促进miR-335-5p表达抑制T24细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer, TNBC）患者血清外泌体中微小RNA（microRNA-335-5p, miR-335-5p）和重组人血管内皮生长因子受体1（human vascular endothelial growth factor receptor 1, VEGFR-1, FLT1）表达水平及其诊断价值。方法:高通量基因表达数据库（Gene Expression Omnibus database, GEO）分析并筛选乳腺癌组织中差异表达的miRNA，于2016年1月至2017年11月收集宁波大学附属人民医院的56例TNBC患者的外周血标本，分离外泌体并鉴定。生物信息学分析筛选出FLT1作为miR-335-5p的靶基因。qRT-PCR分别检测miR-335-5p、FLT1在血清外泌体中的表达水平。分析miR-335-5p与TNBC患者临床病理参数的关系，受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic, ROC）评估miR-335-5p的诊断价值，Kaplan-Meier生存曲线对miR-335-5p和FLT1做生存预后分析。结果:TNBC患者血清外泌体中miR-335-5p表达低于对照组，FLT1在血清外泌体中的表达高于对照组（均 P<0.05）。miR-335-5p表达情况与TNBC患者组织分级（ χ2=22.02， P<0.000 1）、分化程度（ χ2=20.67, P<0.000 1）、淋巴结转移有关（ χ2=4.667, P=0.030 8）；miR-335-5p诊断ROC下面积为0.809 8（95% CI: 0.726 3~0.893 2, P<0.000 1）。Kaplan-Meier生存分析显示，miR-335-5p低表达组患者的总生存期较高表达组明显缩短（ P=0.004 5）。其靶基因FLT1的高表达与低生存率相关（ P=0.048 0）。 结论:血清外泌体源性miR-335-5p可作为预测TNBF预后的重要指标，有望在TNBC的诊断和治疗中发挥作用。

目的:探讨胃癌患者微小RNA（miRNA）-21和miRNA-335-5p表达与胃蛋白酶原（PG）和胃泌素17（G-17）的相关性。方法:选择临海市第二人民医院2019年1月至2021年1月收治的胃癌患者61例为研究对象，选择同期该院健康体检者60例作为对照组。采用乳胶增强免疫比浊法测定PGⅠ、PGⅡ和G-17水平；采用qRT-PCR法测定miRNA-21和miRNA-335-5p表达。比较两组PGⅠ、PGⅡ和G-17水平，miRNA-21和miRNA-335-5p表达；miRNA-21和miRNA-335-5p诊断胃癌灵敏度和特异度；分析miRNA-21和miRNA-335-5p与PGⅠ、PGⅡ和G-17的相关性。结果:胃癌组血清PGⅠ[（54.36±9.89）μg/L］、G-17［（13.74±1.89）pg/mL］均低于对照组的（112.31±23.24）μg/L和（18.75±2.36）pg/mL；PGⅡ[（24.35±4.53）μg/L］高于对照组的（20.37±3.28）μg/L，两组差异均有统计学意义（ t=17.89、12.90、5.52，均 P < 0.05）。胃癌组miRNA-21 mRNA相对表达量［（3.42±0.61）］高于对照组的（0.53±0.12）；miRNA-335-5p mRNA相对表达量［（0.32±0.17）］低于对照组的（1.65±0.35），两组差异均有统计学意义（ t=30.01、26.65，均 P < 0.05）。受试者工作特征（ROC）曲线分析显示，miRNA-21诊断胃癌灵敏度为74.36%，特异度为68.18%；miRNA-335-5p诊断胃癌灵敏度为79.49%，特异度为60.90%。miRNA-21与PGⅠ和G-17呈线性负相关（ r=-0.82、-0.74），而与PGⅡ呈线性正相关（ r=0.76）；miRNA-335-5p与PGⅠ和G-17呈线性正相关（ r=0.79、0.72），而与PGⅡ呈线性负相关（ r=-0.70）。 结论:胃癌患者miRNA-21高表达，而miRNA-335-5p低表达，且与PG和G-17具有明显相关性，可作为诊断胃癌有效指标，研究成果具备显著创新性和科学性。

目的 探究大鼠心肌梗死后心力衰竭左心室机械卸载心肌微小RNA(miRNA)-mRNA的调控网络.方法 将SD大鼠按照随机数表法分为对照组、心力衰竭组和左心室机械卸载组(卸载组),每组8只.采用前降支结扎和主动脉弓缩窄方法构建大鼠心肌梗死后心力衰竭模型,造模后第3天进行左心室机械卸载,观察至造模后第7天.超声心动图评估大鼠心脏结构和功能,血清学酶联免疫吸附试验评估心肌炎症反应,采用高内涵成像分析系统评估心肌成纤维细胞增殖率.选取基因表达总库(GEO)数据库中缺血性心肌病患者应用左心室辅助装置进行机械卸载前后的心肌表达谱数据进行生物信息学分析,筛选出核心miRNA及其可能的下游效应mRNA.利用qRT-PCR验证心肌中核心miRNA的表达情况.结果 与心力衰竭组大鼠相比,卸载组大鼠左心室射血分数提升20.0％(F=35.37,P=0.027),血清心肌损伤标志物心肌肌钙蛋白I水平下降52.5％(F=118.9,P＜0.001)、B型利钠肽水平下降18.2％(F=112.6,P=0.001);血清中炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子a的水平分别下降58.5％(F=62.16,P＜0.001)、27.8％(F=26.44,P=0.010)和 31.2％(F=40.42,P＜0.001);心肌细胞横截面积降低 31.6％(F=204.7,P＜0.001)、心肌胶原纤维面积下降29.1％(F=34.19,P=0.026);心肌成纤维细胞增殖率显著降低(F=7.387,P=0.003).通过生物信息学分析共筛选出 4 个核心 miRNA(hsa-miR-205-3p、hsa-miR-205-5p、hsa-miR-335-3p 和 hsa-miR-335-5p).miR-335-3p(F=20.72,P=0.020)和 miR-335-5p(F=26.36,P=0.005)在卸载后的心肌中表达显著上调,miR-335的潜在下游靶基因(APOOL、ERBB4和WWTR1)表达水平显著下调(F=14.22、10.13和8.69,P=0.011、0.015和0.033).结论 左心室机械卸载可以有效逆转大鼠心肌梗死后的心肌重构,并降低急性期心肌成纤维细胞增殖率,miR-335在这一过程中可能发挥关键作用.

目的 基于生物信息学分析溃疡性结肠炎(UC)中具有诊断和治疗潜力的差异表达基因以及潜在的微小RNA(miRNA).方法 采用加权基因共表达网络分析法对GEO数据库中的芯片原始数据进行筛选.获取UC相关差异表达基因进行富集分析.根据关键基因,预测与差异表达基因相关的潜在miRNA,并构建基因-miRNA调控网络.结果 共筛选出277个差异表达基因,其中有200个基因上调,77个基因下调.基因集富集分析(GSEA)显示,主要富集通路是神经活性配体受体相互作用、利什曼原虫感染、朊病毒病害以及心电图受体相互作用等通路.基因本体论(GO)分析结果显示,主要参与趋化因子活性、肝素结合、趋化因子受体结合等条目.京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析结果显示,主要富集通路为细胞因子受体相互作用通路、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、趋化因子信号通路、核转录因子kappa B(NF-κB)信号通路富集通路等.筛选出10个枢纽基因,分别是C-X-C趋化因子配体8(CXCL8)、Toll样受体2(TLR2)、细胞间黏附分子1(ICAM1)、选择素L(SELL)、趋化因子受体4(CXCR4)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA4)、细胞分化抗原69(CD69)、双糖链蛋白多糖(BGN)、C-X-C趋化因子配体13(CXCL13)、金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1).鉴定出12个潜在的关键miRNAs,分别为 hsa-mir-335-5p、hsa-mir-146a-5p、hsa-mir-92a-3p、hsa-mir-155-5p、hsa-mir-26b-5p、hsa-mir-4426、hsa-mir-4462b、hsa-mir-4647、hsa-mir-32-5p、hsa-mir-92b-3p、hsa-mir-98-5p和hsa-mir-93-5p.结论 本研究共筛选出277个差异表达基因可能参与UC的发生发展,鉴定出10个枢纽基因和12个miRNAs或可作为UC的生物标志物.

目的 探讨环状 RNA HMGCS1(circHMGCS1)/微小 RNA-335-5p(miR-335-5p)/整合素 β2(ITGB2)分子轴对乳腺癌(BC)MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其可能作用机制.方法 收集2020-05-2020-11于本院接受手术治疗的47例BC组织及癌旁组织(＞病灶5 cm),qRT-PCR、Western blot分别检测circHMGCS1、miR-335-5p、ITGB2 蛋白表达量;sh-NC、sh-circHMGCS1、miR-NC、miR-335-5p mimics 分别转染至 MDA-MB-231 细胞;分别检测细胞活力、划痕愈合率、侵袭细胞数;双荧光素酶报告实验检测circHMGCS1与miR-335-5p、miR-335-5p与ITGB2靶向关系.结果 与癌旁组织比较,BC组织中circHMGCS1、ITGB2蛋白表达量升高(P＜0.05),miR-335-5p表达量降低(P＜0.05);与转染sh-NC或miR-NC比较,转染sh-circHMGCS1或miR-335-5p mimics后细胞活力、划痕愈合率降低(P＜0.05),侵袭细胞数减少(P＜0.05);circHMGCS1靶向调控miR-335-5p表达,miR-335-5p靶向调控ITGB2表达.结论 干扰circHMGCS1表达可上调miR-335-5p表达及下调ITGB2表达,进而抑制BC细胞增殖、迁移、侵袭.

目的 探讨上调微小RNA(miR)-335-5p对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响,研究并验证miR-335-5p过表达后胃癌细胞中差异表达的靶基因.方法 使用miR-335-5p慢病毒载体感染胃癌细胞,通过嘌呤霉素筛选构建稳转细胞株,采用 MTT法和Transwell实验观察上调miR-335-5p对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响,使用表达谱芯片筛选过表达miR-335-5p组和阴性对照组细胞之间差异表达的基因.使用miRSystem网站的生物信息学数据库进行miR-335-5p的靶基因预测,以至少3个软件支持的基因与芯片筛选基因取得交集,采用DAVID 6.8软件对miR-335-5p的靶基因开展京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析,并选择部分差异表达最明显的基因进行实验验证.结果 上调miR-335-5p表达可抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力,表达谱芯片筛选结合生物信息学预测分析共获得212个miR-335-5p靶基因,富集在20个肿瘤相关的信号通路中.选择其中的靶基因环腺苷酸反应元件结合蛋白1(CREB1)、苏氨酸激酶3(AKT3)、外被体包被蛋白β2亚基(COPB2)、芳香烃受体核易位蛋白2(ARNT2)、转化生长因子(TGF)-β2、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因(KRAS)、血小板源性生长因子-β(PDGF-β)进行验证,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法结果表明,过表达miR-335-5p后可抑制上述靶基因的表达(P<0.05).结论 上调miR-335-5p的表达能抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力,其机制与抑制其靶基因CREB1、AKT3、COPB2、ARNT2、TGF-β2、KRAS、PDGF-β的表达有关.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01503对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:将人肺癌H1299细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01503组(转染si-LINC01503)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC01503组(转染pcDNA-LINC01503)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-335-5p组(转染miR-335-5p mimics)、si-LINC01503+anti-miR-NC组(共转染si-LINC01503和anti-miR-NC)、si-LINC01503+anti-miR-335-5p组(共转染si-LINC01503和anti-miR-335-5p)、miR-NC+WT-LINC01503组(共转染miR-NC和WT-LINC01503)、miR-NC+MUT-LINC01503组(共转染miR-NC和MUT-LINC01503)、miR-335-5p+WT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和WT-LINC01503)和miR-335-5p+MUT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和MUT-LINC01503).采用RT-qPCR检测miR-335-5p和LINC01503的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的变化;双萤光素酶报告基因实验验证LINC01503与miR-335-5p的靶向关系.结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中LINC01503表达水平显著升高,miR-335-5p表达水平显著降低(P<0.05);与Ⅰ/Ⅱ期阶段相比,Ⅲ/Ⅳ期肺癌组织中LINC01503表达水平显著升高,miR-335-5p表达水平显著降低(P<0.05);LINC01503高表达的患者短期生存率显著低于LINC01503低表达的患者(P<0.05).与正常支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,肺癌细胞系H1299、A549和SPC-A-1中miR-335-5p的表达水平显著降低,LINC01503的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-335-5p、抑制LINC01503表达均可抑制H1299细胞的活力、迁移和侵袭,抑制细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达(P<0.05).LINC01503靶向调控miR-335-5p的表达,干扰miR-335-5p表达能逆转抑制LINC01503表达对H1299细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用.结论:抑制lncRNA LINC01503表达可抑制肺癌细胞的活力、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控miR-335-5p有关.

目的 探讨微小RNA (micro RNA,miR)-335-5p调控BMP-2对人BMSCs (human BMSCs,hBMSCs)成骨分化的影响.方法 体外培养hBMSCs,随机分为对照组(A组)、miR-335-5p mimics(模拟物)组(B组)、miR-335-5p mimics阴性对照组(C组)、miR-335-5p inhibitor(抑制剂)组(D组)、miR-335-5p inhibitor阴性对照组(E组),分组处理后并诱导其成骨分化,行ALP及茜素红染色检测各组细胞成骨分化情况;采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-335-5p、BMP-2及成骨相关基因Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN) mRNA的表达;采用Western blot检测各组细胞Runx2、OPN、OCN、BMP-2蛋白表达情况.结果 与A组比较,B组ALP阳性细胞相对比例,矿化结节相对比例,BMP-2、miR-335-5p、OCN、OPN、Runx2 mRNA相对表达量,Runx2、OPN、OCN、BMP-2蛋白相对表达量均明显升高,D组各指标均明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);C、E组各指标与A组比较无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-335-5p可上调BMP-2表达,进而促进hBMSCs成骨分化.