目的:探讨瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员3(TRPC3)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜和人视网膜血管内皮细胞(HREC)生物学行为的调控作用。方法:选取健康SPF级7日龄C57BL/6小鼠32只，采用随机数字表法分为对照组和OIR组，每组16只，其中对照组不做特殊处理，OIR组小鼠诱导OIR模型。出生后第17天(PN17)采用视网膜铺片免疫荧光染色验证模型构建是否成功。将体外培养HREC分为正常对照组、转染试剂组和si-TRPC3组，其中正常对照组不做特殊处理，转染试剂组和si-TRPC3组分别采用转染试剂和转染试剂＋si-TRPC3转染。采用实时荧光定量PCR法检测TRPC3 mRNA相对表达量；采用Western blot法检测TRPC3、转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)和超氧化物歧化酶(SOD)蛋白相对表达量。另将HREC分为正常对照组、血管内皮生长因子(VEGF)组、si-TRPC3组和Pyr3(TRPC3通道抑制剂)组，分别用完全培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基(si-TRPC3转染72 h)和含有20 ng/ml VEGF重组蛋白＋1 μmol/L Pyr3的培养基培养48 h，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HREC增生能力；分别采用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞横向和纵向迁移能力。结果:PN17时OIR组小鼠视网膜出现病理性新生血管团簇强荧光染色。OIR组小鼠视网膜TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量分别为2.057±0.244和1.517±0.290，明显高于对照组的0.983±0.033和0.874±0.052，差异均有统计学意义( t＝6.165、3.094，均 P<0.05)。si-TRPC3组TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量明显低于正常对照组和转染试剂组，Nrf2和SOD蛋白相对表达量明显高于正常对照组和转染试剂组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。CCK-8实验结果显示，VEGF组细胞吸光度( A)值明显高于正常对照组，si-TRPC3组和Pyr3组细胞 A值明显低于VEGF组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。细胞划痕实验结果显示，VEGF组细胞横向迁移率高于正常对照组，si-TRPC3组和Pyr3组细胞横向迁移率低于VEGF组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Transwell实验结果显示，VEGF组染色细胞数明显多于正常对照组，si-TRPC3组和Pyr3组染色细胞数明显少于VEGF组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:OIR模型小鼠视网膜中TRPC3表达水平升高，下调TRPC3可抑制HREC增生和迁移能力，其机制与Nrf2氧化应激通路激活有关。

目的:探讨重组人甲基CpG结合蛋白2(MeCP2)处理的视网膜色素上皮(RPE)细胞中mRNA和N6-甲基腺嘌呤(m6A)改变及其机制。方法:将传代ARPE-19细胞贴壁培养后分为正常对照组和MeCP2组，正常对照组细胞采用正常培养液培养，MeCP2组细胞于含终质量浓度20 ng/ml重组人MeCP2蛋白培养液中，连续培养72 h。提取细胞内总RNA进行转录组测序(RNA-seq)和甲基化免疫共沉淀测序(MeRIP-seq)分析。采用edgeR软件包根据 P<0.05筛选差异表达基因(DEGs)和差异甲基化基因(DMGs)。采用基因本体论(GO)富集分析对差异基因进行生物学功能描述，采用京都基因和基因组百科全书(KEGG)进行通路富集分析。筛选出DEGs与DMGs交集的基因，采用实时荧光定量PCR技术检测各组差异基因mRNA表达水平。 结果:共筛选出DEGs 100个，DMGs 7 441个，富集分析发现DEGs与细胞外基质(ECM)－受体相互作用、细胞分裂、细胞周期和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路等相关，DMGs与微管细胞骨架、血管生成、表皮生长因子受体(ErbB)信号通路、晚期糖基化终末产物(AGEs)－糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路、Notch信号通路和转化生长因子β(TGF-β)信号通路等相关。DEGs中24个基因表达增加，76个基因表达减少；DMGs中5个基因含有高甲基化峰，7 439个基因含有低甲基化峰，注释峰后，正常对照组有7 626个基因发生m6A甲基化，MeCP2组有8 006个基因发生m6A甲基化，2个组间有7 360个交集基因。正常对照组和MeCP2组的m6A甲基化富集于转录本的CDS、内含子和3'-非翻译区(3'UTR)区域，其甲基化比例分别为23.62%/22.27%、48.53%/48.35%和23.66%/25.28%。联合分析发现2个上皮－间充质转化(EMT)相关基因 CSPG5和 RBP1的mRNA和m6A水平均降低。荧光定量PCR结果显示，MeCP2组 GSPG5、 RBP1、 ZNF484 mRNA相对表达量均明显低于正常对照组，差异均有统计学意义( t＝7.885、7.613、7.345，均 P<0.01)。 结论:RPE细胞中MeCP2对EMT的调控机制与m6A甲基化修饰相关。 CSPG5和 RBP1基因可能是m6A甲基化的靶基因，参与MeCP2调控的EMT过程。

目的:探讨三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer, TNBC）患者血清外泌体中微小RNA（microRNA-335-5p, miR-335-5p）和重组人血管内皮生长因子受体1（human vascular endothelial growth factor receptor 1, VEGFR-1, FLT1）表达水平及其诊断价值。方法:高通量基因表达数据库（Gene Expression Omnibus database, GEO）分析并筛选乳腺癌组织中差异表达的miRNA，于2016年1月至2017年11月收集宁波大学附属人民医院的56例TNBC患者的外周血标本，分离外泌体并鉴定。生物信息学分析筛选出FLT1作为miR-335-5p的靶基因。qRT-PCR分别检测miR-335-5p、FLT1在血清外泌体中的表达水平。分析miR-335-5p与TNBC患者临床病理参数的关系，受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic, ROC）评估miR-335-5p的诊断价值，Kaplan-Meier生存曲线对miR-335-5p和FLT1做生存预后分析。结果:TNBC患者血清外泌体中miR-335-5p表达低于对照组，FLT1在血清外泌体中的表达高于对照组（均 P<0.05）。miR-335-5p表达情况与TNBC患者组织分级（ χ2=22.02， P<0.000 1）、分化程度（ χ2=20.67, P<0.000 1）、淋巴结转移有关（ χ2=4.667, P=0.030 8）；miR-335-5p诊断ROC下面积为0.809 8（95% CI: 0.726 3~0.893 2, P<0.000 1）。Kaplan-Meier生存分析显示，miR-335-5p低表达组患者的总生存期较高表达组明显缩短（ P=0.004 5）。其靶基因FLT1的高表达与低生存率相关（ P=0.048 0）。 结论:血清外泌体源性miR-335-5p可作为预测TNBF预后的重要指标，有望在TNBC的诊断和治疗中发挥作用。

目的:探讨神经纤毛蛋白1(NRP-1)和血管内皮生长因子(VEGF)在多形性胶质母细胞瘤(GBM)复发和耐药性中的机制。方法:体外培养人源性GBM1A和GBM22细胞株，通过感染慢病毒shRNA的方式沉默VEGF或NRP-1。根据感染慢病毒shRNA的种类，将两种细胞株分别分为shCont组(感染无义序列shRNA)、shNRP-1组(感染NRP-1慢病毒shRNA)及shVEGF组(感染VEGF慢病毒shRNA)。采用实时荧光定量聚合酶联链式反应(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹法检测肿瘤细胞株在沉默NRP-1或VEGF基因后干细胞标志物[包括：性别决定区Y盒2(Sox2)、表皮生长因子受体(EGFR)、N-钙黏附素(N-cadherin)、CD133、细胞间质上皮转换因子(c-Met)]的基因和蛋白表达情况。采用细胞划痕实验、Transwell小室测定法、神经球形成实验及MTT法检测肿瘤细胞的迁移能力、侵袭能力、神经球形成能力及细胞代谢活性。采用细胞生长抑制实验检测肿瘤细胞株在沉默VEGF或NRP-1后对替莫唑胺(TMZ)、紫杉醇(PTX)和卡博替尼(XL-184)的敏感性。向GBM1A和GBM22细胞株中的shCont组和shNRP-1组分别加入10 μg重组VEGF，分为shCont组、shCont+VEGF组、shNRP-1组、shNRP-1+VEGF组，判断NRP-1与VEGF之间的相互作用。结果:GBM1A细胞株中，shVEGF组和shNRP-1组Sox2、EGFR、N-cadherin，CD133及c-Met的mRNA含量均较shCont组下降(均 P<0.05)。GBM1A细胞株中，shNRP-1组和shVEGF组EGFR、CD133、N-Cadherin的蛋白质相对表达量、24 h和48 h时的细胞划痕愈合率及发生细胞迁移的比例均较shCont组低(均 P<0.05)，但shNRP-1组和shVEGF组间的差异均无统计学意义(均 P>0.05)；GBM22细胞株得到相似的结果。在GBM1A细胞株和GBM22细胞株中，3组细胞活力的差异均无统计学意义(均 P>0.05)。根据绘制的剂量-生长曲线，GBM1A细胞株中，shNRP-1组和shVEGF组TMZ、PTX、XL-184的半抑制浓度(IC 50)均低于shCont组(均 P<0.05)；在GBM22细胞株得到相似的结果(均 P<0.05)。GBM1A细胞株中，shCont组和shCont+VEGF组形成神经球的数量均高于shNRP-1组和shNRP-1+VEGF组(均 P<0.05)，其中shCont+VEGF组高于shCont组( P<0.05)，而shNRP-1组和shNRP-1+VEGF组间的差异无统计学意义( P>0.05)；GBM22细胞株得到相似的结果。 结论:沉默VEGF或NRP-1基因在不影响GBM本身活力的情况下可有效抑制其干细胞性，降低其迁移能力及侵袭力，并恢复其对化疗药物的敏感性；VEGF介导的细胞迁移可能依赖NRP-1发挥作用。

目的:应用网络药理学分析蒲公英-桑叶在急性髓系白血病(AML)发生发展过程的作用,阐明其治疗AML的活性成分和作用机制.方法:通过中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)筛选蒲公英-桑叶的活性成分,采用SwissTargetPrediction数据库预测其作用靶点,在症状映射(SymMap)数据库、人类基因数据库(GeneCards)、DisGeNET数据库和在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库中检索AML相关基因和蛋白靶点.对AML相关基因和蒲公英-桑叶靶基因进行比较,确定富集基因,并进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.采用Cytoscape 3.8.0软件根据靶点信息构建药物-有效成分-靶点网络和蛋白-蛋白互作(PPI)网络,采用CytoNCA插件筛选出核心基因,通过AutoDock软件进行分子对接验证.结果:对数据库检索结果进行筛选后得到39种有效成分,收集蒲公英-桑叶与AML的共同靶点148个.GO功能富集分析主要涉及细胞因子介导的信号传导途径、激酶活性正向调节和氧化应激反应等.KEGG信号通路富集分析主要涉及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路和Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)信号通路等.拓扑分析得到信号转导和转录激活因子3(STAT3)、表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B1(AKT1)、重组人表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、原癌基因MYC、肿瘤蛋白P53(TP53)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(CASP3)、肉瘤基因SRC、热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)、连环蛋白B1(CTNNB1)、磷酸肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、白细胞介素6(IL-6)、TNF、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)和磷酸肌醇3-激酶调节亚基1(PIK3R1)等核心靶点.分子对接,结合亲和力最高的配对结果为蒲公英萜醇(taraxerol)与MYC(-8.74 kcal·mol-1),槲皮素(quercetin)、kaemfprol、木犀草素(luteolin)和 artemetin 与各个靶点均有很好的结合亲和力.结论:蒲公英-桑叶主要活性成分quercetin、taraxerol、kaemfprol、luteolin和 artemetin可能通过调控 AKT1、STAT3、HSP90AA1、IL-6 和 MAPK1 发挥抗 AML 的作用,对PI3K-AKT信号通路的调节是蒲公英-桑叶发挥抗AML作用的重要机制.

目的 探讨序贯使用血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮祖细胞(EPC)在改善肝脏缺血再灌注损伤(IRI)中的作用.方法 取8只健康Wistar大鼠进行骨髓EPC的分离、培养和鉴定.取28只健康Wistar大鼠建立肝脏IRI大鼠模型,按随机数字表法分为VEGF+EPC组、VEGF组、EPC组及手术对照组,每组各7只;经肠系膜静脉属支注射药物:VEGF+EPC组序贯注射重组大鼠VEGF因子及EPC细胞悬液,VEGF组注射重组大鼠VEGF因子和PBS液,EPC组注射PBS液和EPC细胞悬液,手术对照组仅注射PBS液.比较4组大鼠1周存活率、肝功能、血液VEGF水平、肝组织髓过氧化物酶(MPO)水平及病理变化情况.结果 贴壁细胞CD133、CD34及血管内皮生长因子受体2阳性率分别为90.51％、93.23％及93.41％,说明成功分离出骨髓EPC细胞.各组大鼠1周存活率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);1周后VEGF+EPC组大鼠ALT、乳酸脱氢酶(LDH)、TBil水平显著低于VEGF组和EPC组(均P＜0.01);VEGF水平显著高于VEGF组和EPC组(均P＜0.01);肝组织病理检查见VEGF+EPC组肝细胞轻度水肿,肝索结构正常,未见明显炎性细胞聚集、肝细胞坏死等病理改变;肝组织中MPO水平显著低于VEGF组和EPC组(均P＜0.01).结论 对肝脏IRI大鼠序贯使用VEGF及EPC,虽不能提高大鼠存活率,但能改善大鼠肝功能,减轻肝脏组织炎症,对肝脏IRI的治疗有利.

目的 研究蒙药哈它各其-7 促进糖尿病大鼠溃疡创面愈合的治疗价值并初步探索其调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的分子机制.方法 成年雄性SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组、蒙药组和细胞因子组,每组各 8 只.除对照组外、其余 3 组采用腹腔注射链脲佐菌素的方法建立糖尿病模型,4 组均在背部制备溃疡创面,1周后蒙药组给予哈它各其-7 涂抹创面、细胞因子组给予重组牛碱性成纤维细胞生长因子喷洒创面,连续 2 周.检测空腹血糖(FBG)、创面面积、创面病理改变、创面中晚期糖基化终末产物(AGEs)、AGE受体(RAGE)、HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平及白介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)、丙二醛(MDA)、总抗氧化力(T-AOC)水平.结果 糖尿病组、蒙药组、细胞因子组的FBG均高于对照组(P<0.05),且三组间FBG无显著性差异(P>0.05);与对照组比较,糖尿病组的溃疡创面面积、镜下未修复组织范围增大,创面组织中AGEs、RAGE的表达水平及IL-1β、IFN-γ、MDA水平增加,T-AOC水平及HIF-1α、VEGF表达水平降低(P<0.05);与糖尿病组比较,蒙药组、细胞因子组溃疡创面面积、镜下未修复组织范围缩小,创面组织中AGEs、RAGE的表达水平及IL-1β、IFN-γ、MDA水平降低,T-AOC水平及HIF-1α、VEGF表达水平增加(P<0.05)且蒙药组的各项指标优于细胞因子组.结论 蒙药哈它各其-7 促进糖尿病大鼠溃疡创面愈合,抑制AGEs及RAGE表达并激活HIF-1α是可能的分子机制.

目的 评价Nd∶YAG脉冲式激光联合重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)治疗复发性唇疱疹的效果.方法 选取2020年 1月至 2021年 2月石家庄市第二医院就诊的 94 例复发性唇疱疹患者,采用随机数字表法将其分为对照组与观察组,每组47例.对照组予以单纯Nd∶YAG脉冲式激光治疗,观察组实施Nd∶YAG脉冲式激光联合rh-bFGF治疗.比较两组临床疗效、创面愈合状况[温哥华瘢痕量表(VSS)评分、疱疹消失时间、创面愈合时间及结痂脱落时间];比较两组治疗前后血浆转化生长因子-β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、Toll样受体(TLR)2 及TLR9水平.结果 观察组临床疗效优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组VSS评分低于对照组,疱疹消失时间、创面愈合时间及结痂脱落时间短于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,两组血浆TGF-β1、bFGF、VEGF水平高于治疗前,且观察组高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,两组血浆MIP-1、MCP-1、TLR2、TLR9水平低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Nd∶YAG脉冲式激光联合rh-bFGF治疗复发性唇疱疹的效果确切,可促进创面愈合,其机制与促进TGF-β1、bFGF、VEGF的生成,抑制MIP-1、MCP-1、TLR2、TLR9的生成,消除局部炎症有关.

目的 观察重组牛碱性成纤维细胞生长因子(r-bFGF)联合妥布霉素治疗外伤性角膜上皮缺损及对患者生长因子、可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)水平的影响.方法 纳入我院2016年5月至2021年2月门诊就诊的外伤性角膜上皮缺损患者160例,根据信封抽签法分为对照组80例和观察组80例,对照组患者予以妥布霉素治疗,观察组在对照组的基础上联合r-bFGF治疗,对比两组疗效、眼表症状指标、泪液细胞因子、角膜上皮愈合时间、生长因子水平、炎症因子水平,观察两组用药不良反应发生情况.结果 观察组的临床总有效率高于对照组(P<0.05).治疗2周后,观察组泪液分泌时间(TST)、泪膜破裂时间(BUT)高于对照组,眼表疾病指数(OSDI)、角膜荧光染色(FL)低于对照组(P<0.05).治疗2周后,观察组患者血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)、表皮生长因子(EGFR)、血清成纤维细胞生长因子23(FGF-23)均高于对照组(P<0.05).治疗2周后,观察组患者sICAM-1、HMGB1、TXNIP均低于对照组(P<0.05).观察组的角膜上皮的愈合时间明显短于对照组(P<0.05).两组患者均未见明显的不良反应发生情况.结论 r-bFGF联合妥布霉素治疗外伤性角膜上皮缺损,可促进症状改善,缩短角膜上皮的愈合时间,同时还可有效降低泪液炎症因子水平,提高患者的生长因子水平,具有较好的临床应用价值.

目的 研究白介素-17(IL-17)/白介素-17 受体(IL-17R)调控DLL4-Notch信号通路影响甲状腺乳头状癌血管生成的机制.方法 建立甲状腺乳头状癌细胞(TPC-1)-内皮细胞共培养体系,检测50 ng/ml IL-17 刺激剂对共培养系统中人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、成管能力的影响.Western blot 法检测共培养体系中HUVECs DLL4-Notch信号通路和血管新生蛋白表达水平.结果 50 ng/ml重组人IL-17A干预可显著促进共培养体系中 HUVECs 的增殖、迁移和成管能力(P<0.01).pLKO.1-EGFP-Puro-IL-17R转染的TPC-1 细胞共培养HUVECs经 50 ng/ml重组人IL-17A干预 6h后,细胞中DLL4、Notch、HES、HEY和血管内皮细胞生长因子受体 1(VEGFR1)、血管内皮细胞生长因子受体 2(VEGFR2)的表达水平得到不同程度的上调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).DLL4-Notch 通路抑制剂DAPT干预可显著抑制 IL-17 刺激剂对共培养体系细胞中HES、HEY、VEGFR-1、VEGFR-2 蛋白表达增加作用(P<0.01).结论 IL-17/IL-17R 可能通过 DLL4-Notch 信号通路促进甲状腺乳头状癌血管生成.