目的:观察血清外泌体微小RNA-377(miR-377)在食管癌(EC)中的表达水平，并探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OE33、Eca9706细胞株、5例EC癌组织中miR-377表达水平。选取2016年4月至2019年3月经山东第一医科大学附属济南人民医院确诊并住院治疗的EC患者40例作为观察组，另选取同期本院体检健康者40例作为对照组，RT-qPCR检测血清外泌体中miR-377表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平；采用 χ2检验分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF水平与临床病理特征的关系；Pearson法分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF表达相关性；受试者工作特征(ROC)曲线预测miR-377、VEGF表达水平对EC的诊断价值。 结果:与正常食管上皮细胞株HEEC细胞中miR-377表达水平(1.07±0.20)比较，OE33、Eca9706癌细胞中miR-377表达水平(0.74±0.21和0.68±0.19)显著降低( F＝6.604， P<0.05)；与癌旁组织中miR-377表达水平(1.10±0.23)比较，癌组织中miR-377表达水平(0.69±0.18)显著降低( t＝3.319， P<0.05)；观察组血清外泌体中miR-377表达水平(0.76±0.22)明显低于对照组血清外泌体中miR-377表达水平(1.04±0.25， t＝5.318， P<0.05)，血清VEGF表达水平[(22.79±4.79) pg/ml]明显高于对照组血清VEGF表达水平[(16.71±3.44) pg/ml， t＝6.521， P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377及血清VEGF表达水平与TNM分期、分化程度和淋巴结转移均有关(miR-377： χ2＝6.172、8.780、13.864， P<0.05；VEGF： χ2＝6.839、5.402、6.114， P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377与血清VEGF表达呈负相关( r＝-0.641， P<0.05)；血清外泌体中miR-377诊断EC的ROC曲线下面积为0.835(95% CI：0.684~0.933)，灵敏度为69.50%，特异性为88.20%；血清VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.909(95% CI：0.775~0.977)，灵敏度为89.65%，特异性为76.50%；miR-377联合VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.949(95% CI：0.829~0.994)，灵敏度为95.70%，特异性为88.21%。 结论:miR-377在EC患者血清外泌体中呈低表达，miR-377与VEG联合检测可有效提高EC诊断率。

目的 研究环状RNA 0072088(circ_0072088)在肝癌细胞及异种移植瘤模型中的生物学功能,并探讨其参与调控肝细胞癌(HCC)发生进展的关键机制.方法 培养人正常肝细胞(THLE-2)和HCC细胞系(Huh-7、Hep G2、Hep 3B),采用 RT-qPCR 方法检测 circ_0072088、miR-377 和含三方基序 23 基因(TRIM23)mRNA 表达水平;Western blot 检测 TRIM23 蛋白表达水平.取 Hep G2 细胞分为 sh-NC 组、sh-circ_0072088 组、mimic NC 组、miR-377 mimic 组,Huh-7 细胞分为 mimic NC 组、miR-377 mimic 组和 circ_0072088+miR-377 mimic 组.分别采用 CCK8 法、克隆形成试验测定各组细胞的增殖能力变化情况;Transwell实验检测迁移能力变化情况;根据circ_0072088与miR-377的结合位点设计并合成了 circ_0072088-WT和circ_0072088-MT双荧光素酶报告质粒,并分别与miR-377 mimic或mimic NC共转染Hep G2细胞后使用双荧光素酶报告试剂盒测量荧光素酶活性;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)测定Ago2或IgG RIP复合物中circ_0072088和miR-377的富集水平.在异种移植瘤裸鼠模型中探讨circ_0072088的体内功能.结果 circ_0072088在HCC中较瘤旁组织表达上调.与THLE-2细胞比较,HCC细胞系(Huh-7、Hep G2、Hep 3B)circ_0072088的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(t=13.77、30.11、33.27,P均＜0.001).与sh-NC组比较,Hep G2转染sh-circ_0072088后细胞中circ_0072088 mRNA表达降低,差异有统计学意义(t=23.31,P均＜0.001),细胞增殖活力(48、72 h)、克隆形成能力和迁移能力降低,差异均有统计学意义(t=11.78、8.42、12.64,P均＜0.01),TRIM23蛋白表达水平明显降低.RIP检测结果显示,相对于lgG,circ_0072088(t=60.59)和miR-377(t=35.68)在Ago2免疫沉淀中富集,差异均有统计学意义(P均＜0.001).双荧光素酶检测结果显示,与转染mimic-NC组比较,转染miR-377 mimic组含有circ_0072088-WT质粒细胞的荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(t=21.88,P＜0.001).RT-qPCR 及 Western blot 结果显示,与 mimic NC 组相比,miR-377 mimic 组中 TR1M23 mRNA(t=8.45,P＜0.001)和蛋白表达水平明显降低.在异种移植瘤裸鼠模型中,与sh-NC组相比,sh-circ_0072088组移植的肿瘤体积减小,肿瘤组织中circ_0072088和TRIM23 mRNA表达降低,而miR-377 mRNA表达升高,差异有统计学意义(t=8.63、5.56、5.52、11.97,P均＜0.001),TRIM23 的蛋白水平下降.结论 circ_0072088 通过结合 miR-377,间接上调TRIM23的表达,从而促进HCC细胞的增殖和迁移.

目的 探讨急性淋巴细胞白血病患者微小RNA-377(miR-377)和SET及MYND结构域包含蛋白3(SMYD3)表达水平及临床预后意义.方法 选择2016年3月至2020年6月该院收治的135例急性淋巴细胞白血病患者作为观察组,同时选择同期120例体检健康者作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测研究对象外周血miR-377、SMYD3表达水平.随后比较不同组别、不同临床特征及不同疗效的患者 miR-377、SMYD3表达水平差异,并采用 Kaplan-Meier法和多因素Cox回归模型分析 miR-377、SMYD3与急性淋巴细胞白血病患者预后的关系.结果 观察组miR-377表达水平低于对照组,SMYD3表达水平高于对照组(P<0.05).miR-377高表达组患者的危险度分型,白细胞计数(WBC)(入院时、入院1月后),乳酸脱氢酶(LDH)(入院时、入院1月后),骨髓原幼细胞比例均明显低于miR-377低表达组(P<0.05).SMYD3高表达组患者的危险度分型,WBC(入院时、入院1月后),LDH(入院时、入院1月后),骨髓原幼细胞比例均明显高于SMYD3低表达组(P<0.05).完全缓解(CR)组miR-377、SMYD3表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),miR-377表达水平从低到高依次为未缓解(NR)组、部分缓解(PR)组、CR组、对照组(P<0.05),SMYD3表达水平从高到低依次为NR组、PR组、CR组、对照组(P<0.05).miR-377高表达组总生存率(65.33%)明显高于 miR-377低表达组(41.67%)(P<0.05),SMYD3高表达组总生存率(41.94%)明显低于SMYD3低表达组(65.75%)(P<0.05).多因素Cox回归模型分析显示,危险度分型、WBC、LDH、骨髓原幼细胞比例、miR-377、SMYD3均为影响急性淋巴细胞白血病患者预后的危险因素(P<0.05).结论 急性淋巴细胞白血病患者miR-377呈低表达水平,SMYD3呈高表达水平,且二者表达水平与患者临床特征、疗效及预后均密切相关,因此可作为评估患者临床预后的有效指标.

目的 观察子痫前期(PE)孕妇胎盘组织中微小RNA-377-3p(miR-377-3p)和血小板凝血酶蛋白1(TH-BS1)的表达变化,分析二者与PE发病的关系.方法 选择PE孕妇65例纳入PE组,其中重度PE 30例、轻度PE 35例;选择同期正常分娩孕妇40例纳入对照组.采用实时荧光定量PCR法检测两组孕妇胎盘组织中的miR-377-3p和THBS1 mRNA,分析miR-377-3p、THBS1 mRNA表达与PE孕妇临床病理参数的关系,采用双荧光素酶实验验证miR-377-3p对THBS1 mRNA的调控作用.结果 PE组孕妇胎盘组织中miR-377-3p表达低于对照组,且轻度患者低于重度患者(P均<0.05);PE组THBS1 mRNA表达高于对照组,且轻度患者高于重度患者(P均<0.05).PE组胎盘组织中miR-377-3p表达与收缩压、舒张压和24 h尿蛋白呈负相关(r分别为-0.339、-0.530、-0.541,P均<0.05),与血小板计数呈正相关(r=0.439,P<0.05);THBS1 mRNA表达与收缩压、舒张压和24 h尿蛋白呈正相关(r分别为0.397、0.306、0.467,P均<0.05),与血小板计数呈负相关(r=-0.289,P<0.05).miR-377-3p与THBS1存在潜在的互补结合位点,miR-377-3p可负向调节THBS1 mRNA表达.结论 PE孕妇胎盘组织中miR-377-3p表达下调、TH-BS1 mRNA表达上调,二者异常表达可能与PE严重程度及妊娠结局有关;miR-377-3p可能通过靶向调控THBS1 mRNA表达影响PE的发生发展.

目的 探讨人类微小RNA-200c(hsa-miRNA-200c)在卵巢上皮性癌组织中的表达情况,及其与卵巢上皮性癌转移能力的关系.方法 采用茎环实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time Quantitative PCR),检测2010年10月至2011年5月广东省人民医院的73例卵巢上皮性癌、30例良性卵巢上皮肿瘤及30例正常卵巢组织中hsa-miRNA-200c的表达.研究于2017年12月至2018年3月开展.分析hsa-miRNA-200c与临床病理特征的相关性,进一步分层分析73例卵巢上皮癌中13例发生肝转移组、60例非肝转移复发组has-miRNA-200c的表达情况.过表达或敲低hsa-miRNA-200c,检测卵巢癌细胞侵袭迁移能力的变化.结果 卵巢上皮性癌组中hsa-miRNA-200c的相对表达量382.18±15.22均高于良性卵巢上皮性肿瘤组35.61±1.42及正常卵巢组4.43±2.23,差异有统计学意义(P＜0.01),后两组间差异无统计学意义(P＞0.05).hsa-miRNA-200c在临床分期晚期(670.91±16.88 vs.129.52±33.3,P＜0.035)、淋巴结转移阳性(529.54±75.24vs.175.85±49.80,P＜ 0.004)和发生远处转移的卵巢上皮性癌中低表达,其中在发生肝转移的卵巢癌组织中显著低表达(377±15.31 vs.28.22±9.14,P＜0.009).在预后较好的子宫内膜样卵巢癌组中高表达(浆液性353.89±12.51 vs.黏液性267.93±11.43 vs.子宫内膜样腺癌802.41±31.53,P＜0.05),与其他病理类型及组织分化程度无关(P＞0.05).transwell小室侵袭实验显示,hsa-miRNA-200c与卵巢癌细胞侵袭迁移能力呈负相关(P＜0.01).结论 hsa-miRNA-200c在卵巢上皮性癌的发生发展中可能具有双重调节的作用,其低表达与晚期卵巢上皮性癌、淋巴结转移、肝转移和不良预后密切相关.

目的 研究长链非编码RNA肝癌高表达基因(LncRNA HULC)靶向miR-377-5p对肝癌细胞HepG2生长、侵袭和上皮间质转化及体内肿瘤形成的影响.方法 qRT-PCR检测HULC和miR-377-5p在正常细胞系L-02及3种肝癌细胞HB611、HepG2、H22中的相对表达量;数据库预测HULC和miR-377-5p的靶向关系,并利用双荧光素酶报告实验证实HULC和miR-377-5p的靶向关系;敲除HUCL和添加miR-377-5p抑制剂验证HULC对HepG2细胞生长、侵袭及上皮间质转化的影响;通过皮下注射HepG2细胞构建移植瘤模型,验证HULC对裸鼠肿瘤重量、存活率、miR-377-5p相对表达量、Ki67和N-cadherin蛋白阳性表达率的影响.结果 与正常细胞系比,肝癌细胞系中HULC表达量显著升高(P＜0.05),miR-377-5p表达量显著降低(P＜0.05),且在HepG2细胞中表达变化最显著(P＜0.01);与control组比,sh-HULC组HepG2细胞的增殖率、侵袭率、N-cadherin蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高(P＜0.05),miR-377-5p inhibitor组HepG2细胞的增殖率、侵袭率、N-cadherin蛋白显著升高,E-cadherin蛋白表达显著降低(P＜0.05),与miR-377-5p inhibitor组相比,sh-HULC+miR-377-5p inhibitor组HepG2细胞的增殖率、侵袭率、N-cadherin蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高(P＜0.05);与control组裸鼠相比,sh-HULC组裸鼠瘤体重量、存活率、Ki67和N-cadherin蛋白阳性表达均显著降低.结论 HULC可能通过靶向抑制miR-377-5p表达,促进肝癌细胞HepG2的增殖、侵袭及上皮间质转化,促进裸鼠瘤体生长,降低其生存率.

目的 检测弥漫大B细胞淋巴瘤组织中微小RNA-377(miR-377)和形成素结合蛋白1(FNBP1)信使核糖核酸(mRNA)表达及其在发病过程中的作用及临床意义.方法 选取2015年2月—2018年3月聊城市人民医院血液科确诊的弥漫大B细胞淋巴瘤患者130例为观察组,同期选取在医院就诊的淋巴结反应性增生患者55例为对照组.采用实时荧光定量PCR法检测弥漫大B细胞淋巴瘤组织和淋巴结反应性增生组织中miR-377、FNBP1 mRNA表达水平;分析二者之间的相关性及与患者临床病理参数之间的关系;使用Kaplan-Meier曲线分析弥漫大B细胞淋巴瘤患者3年总生存率;Cox回归模型分析影响弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后的因素.结果 观察组miR-377表达水平显著低于对照组,FNBP1 mRNA表达水平显著高于对照组(t/P=7.366/0.000、14.162/0.000).miR-377低表达亚组临床Ⅲ～Ⅳ期、病理非生发中心型、有全身症状患者比例明显高于miR-377高表达亚组(χ2/P=6.660/0.010、5.004/0.025、6.635/0.010),FNBP1 mRNA低表达亚组临床Ⅲ～Ⅳ期、病理非生发中心型、有全身症状患者比例明显低于FNBP1 mRNA高表达亚组(χ2/P=9.076/0.003、18.593/0.000、10.916/0.001).miR-377与FNBP1 mRNA表达水平呈负相关(r/P=-0.355/0.000).治疗后3年总生存率比较,miR-377高表达亚组高于miR-377低表达亚组,FNBP1 mRNA高表达亚组低于FNBP1 mRNA低表达亚组(χ2/P=4.964/0.026、4.550/0.033).miR-377低表达、FNBP1 mRNA高表达、临床分期Ⅲ～Ⅳ期是影响弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后的独立危险因素[OR(95％CI)=2.001(1.412～2.836)、1.855(1.278～2.692)、1.594(1.136～2.237)].结论 弥漫大B细胞淋巴瘤组织中miR-377表达明显降低,FNBP1 mRNA表达明显升高,且其表达与患者预后密切相关,miR-377和FNBP1 mRNA可作为弥漫大B细胞淋巴瘤病情评估及不良预后预测的潜在生物学指标.

目的 分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与临床病理的关系、肠道菌群的变化及其与复发转移的关系.方法 选取2019年3月至2021年3月入该院接受根治术治疗的结肠癌患者共126例作为结肠癌组,另选取同期在该院接受体检的体检健康者共83例作为健康对照组.观察两组血清miR-139-3p和miR-377-3p的表达水平及肠道菌群状态情况,对比不同临床特征的结肠癌患者血清指标表达水平,对比不同复发转移情况的结肠癌患者肠道菌群的变化情况,分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与其临床病理及肠道菌群表达的相关性.结果 结肠癌组血清miR-139-3p和miR-377-3p较健康对照组均呈更高表达,差异有统计学意义(均P＜0.05);结肠癌组术前、术后的双歧杆菌数量均低于健康对照组,大肠杆菌数量均高于健康对照组,差异有统计学意义(均P＜0.05);结肠癌组中发生复发转移、低分化、临床分期处于Ⅲ期的患者血清miR-139-3p和miR-377-3p呈更高表达,差异有统计学意义(均P＜0.05);Spearman相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p表达水平与结肠癌患者临床分期、复发转移均呈正相关,与临床分化程度呈负相关(均P＜0.05);复发转移组患者双歧杆菌数量较未复发转移组明显更低,大肠杆菌数量较未复发转移组相比明显升高,差异有统计学意义(均P＜0.05);Pearson相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p与结肠癌患者大肠杆菌数量呈正相关,上述两项指标与双歧杆菌数量呈负相关(均P＜0.05).结论 结肠癌根治术后双歧杆菌属高表达和大肠杆菌属低表达意味着结肠癌患者复发转移风险更低,血清miR-139-3p和miR-377-3p与结肠癌患者临床分期、肿瘤分化程度、复发转移及肠道菌群变化均密切相关,后续临床针对结肠癌患者可通过监测上述两项血清指标及肠道菌群来辅助评估患者临床病情严重程度,对优化完善诊疗方案、降低患者复发转移风险具有积极作用.

目的 分析血清微小RNA-377(miR-377)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平在急性肾功能衰竭(ARF)患者治疗前后的变化情况,评价血清miR-377、α-SMA对ARF转化慢性肾脏病(CKD)的预测价值.方法 选取ARF患者157例为研究对象,另选取同期健康体检者157例为对照.比较ARF患者治疗前后与健康对照者血清miR-377、α-SMA水平,统计3个月后CKD发病率.收集并比较是否发生CKD的ARF患者一般资料,采用logistic回归方程对ARF转化CKD进行多因素分析,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-377、α-SMA对ARF转化CKD的预测价值.结果 ARF患者治疗前及治疗2周血清miR-377、α-SMA水平均高于健康对照者,且ARF患者治疗前血清miR-377、α-SMA水平高于治疗2周(P<0.05).随访3个月,157例ARF患者共出现CKD 54例,CKD发生率为34.39％(54/157);年龄、合并高血压、肾损伤分期、肾小球滤过率、治疗前及治疗2周血清miR-377、α-SMA水平与ARF患者转化CKD有关(P<0.05).血清miR-377(95％CI为1.793～5.036,OR=3.005,P=0.001)、α-SMA(95％CI为2.786～7.118,OR=4.453,P<0.001)水平是ARF患者转化CKD的影响因素(P<0.05);血清miR-377、α-SMA水平联合预测ARF转化CKD的AUC为0.930,对应敏感度为77.78％、特异度为94.17％.结论 治疗前ARF患者血清miR-377、α-SMA水平异常升高,治疗后有所降低;血清miR-377、α-SMA水平联合检测预测ARF转化CKD风险具有较高价值,可作为ARF转化为CKD的预警因子.

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)对宫颈癌(CC)细胞增殖、凋亡和迁移的调控机制.方法 体外培养人CC细胞系SiHa、Hela、CaSki和人正常宫颈上皮细胞HUCEC,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中SNHG1、微小RNA-377-3p(miR-377-3p)和丝氨酸/苏氨酸激酶2(AKT2)mRNA的表达水平.将SNHG1小分子干扰RNA(si-SNHG1)转染Hela细胞构建SNHG1敲低细胞,并在SNHG1敲低细胞系中下调miR-377-3p表达进行验证.实验分为对照组(NC组)、si-NC组、si-SNHG1组、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor阴性对照组(inhibitor-NC)、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor组.转染48 h后,RT-qPCR检测转染效果;Western Blot检测细胞AKT2蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力.双荧光素酶报告基因检测和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)分析Hela细胞中SNHG1、miR-377-3p和AKT2的调控作用.裸鼠异种移植瘤实验、免疫组织化学染色探究敲低SNHG1对CC细胞体内生长的影响.结果 与HUCEC细胞相比,不同CC细胞系中SNHG1和AKT2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-377-3p表达水平显著降低(P<0.05);敲低SNHG1表达可显著上调miR-377-3p的表达水平,下调AKT2的mRNA和蛋白水平,降低Hela细胞的增殖活性、迁移与侵袭能力,并诱导细胞凋亡(P<0.05).双荧光素酶报告基因检测和RIP实验证实SNHG1可靶向负调控miR-377-3p的表达,AKT2是miR-377-3p的靶标.裸鼠异种移植瘤实验结果显示,敲低SNHG1可显著抑制体内移植瘤生长(P<0.05);下调miR-377-3p可显著减弱敲低SNHG1对Hela细胞增殖、迁移和侵袭能力并可抑制体内移植瘤生长(P<0.05).结论 SNHG1可能通过海绵miR-377-3p调节AKT2表达,参与CC进展.