目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-494在脊髓损伤中的作用及其意义。方法:应用脊髓表面挫伤的方法建立大鼠脊髓损伤模型。分为1个假损伤对照组和5个脊髓损伤组，每组5只大鼠(购自复旦大学实验动物中心)。用miRNA芯片分析脊髓损伤后不同时间miRNA的表达。用agomiR-494鞘内治疗后，评定大鼠运动功能。正态性采用Shapiro-Wilk正态检验，组间差异采用单因素方差分析和双侧 t检验。 结果:与假损伤对照组比较，有14个miRNA上调，有46个miRNA下调2倍，而miR-494是最显著下调的miRNA之一。与单纯SCI组比较，agomiR-494鞘内治疗后的SCI＋agomiR-494组，大鼠运动功能明显改善，剩余组织(甲酚紫染色评估)增多，TUNEL阳性细胞减少。agomiR-494对miR-494的上调可促进脊髓损伤后大鼠的功能恢复，减小病变大小并抑制凋亡细胞。脊髓组织中miR-494的表达与第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的表达呈负相关( r＝－0.834， P<0.05)。此外，miR-494通过直接靶向BV-2细胞中的3’端非编码区(3’UTR)来抑制蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)途径的负调节剂PTEN。 结论:在大鼠脊髓损伤模型中miR-494的过表达通过抑制PTEN的表达来激活Akt/mTOR信号通路，对脊髓损伤具有保护作用。

目的:探讨老年帕金森病(Parkinson disease，PD)患者血清微小RNA-124(miR-124)、微小RNA-494(miR-494)表达水平及其临床意义。方法:选取2018年3月～2020年4月在郑州大学附属郑州中心医院住院治疗的90例PD患者(PD组)；同期选择在医院体检中心检查且与PD患者年龄、性别相匹配的100名非PD老年人作对照组。所有研究对象空腹12 h后取清晨静脉血4 ml，采用帕金森等级量表(unified Parkinson disease rating scale，UPDRS)对所有PD组患者从精神状态、行为和情感、生活质量、运动检查进行评分，利用帕金森病Hoehn-Yahr分级量表对PD患者进行分级；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测血清miR-124和miR-494表达水平；作ROC曲线判断miR-124、miR-494对PD患者的诊断价值。结果:UPDRS评分≤60分的PD患者Hoehn-Yahr分级明显低于UPDRS>60分的患者[(2.47±0.43)分，(3.42±0.47)分]，差异有统计学意义( t＝9.055， P<0.001)，但血清miR-124、miR-494表达水平差异无统计学意义[miR-124：(0.72±0.14)，(0.70±0.12)；miR-494：(1.17±0.19)，(1.18±0.22)]( t＝0.633，0.230， P＝0.529，0.819)；与对照组相比，PD组血清miR-124表达下调[(0.71±0.20)，(1.05±0.24)]，miR-494表达上调[(1.18±0.26)，(0.96±0.22)]( t＝10.542，6.315，均 P<0.001)；ROC曲线结果显示，血清miR-124、miR-494诊断PD的曲线下面积(AUC)分别为0.847，0.760，截断值分别为0.901，1.126，灵敏度分别为86.67%、61.11%，特异度分别为75.03%、79.00%；二者联合诊断PD的AUC为0.898，灵敏度和特异度分别为85.56%、85.00%。 结论:PD患者血清miR-124呈低表达，miR-494呈高表达，提示二者的水平变化可能与PD的发生、发展有关。二者均对PD有一定的诊断价值，且联合诊断价值更高。

目的 探讨膀胱癌患者尿液外泌体中微小核糖核酸(microRNA,miR)-494-3p,长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)MAGI2-反义 RNA 3(MAGI2-antisense RNA 3,MAGI2-AS3)表达水平及临床应用价值.方法 选取重庆两江新区第一人民医院2021年7月～2023年6月收治的105例膀胱癌患者为癌变组,另选取同期膀胱良性疾病患者101例作为良性组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平.Kappa检验分析尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3与病理活检诊断膀胱癌的一致性;受试者工作特征(receiver op erating characteristic,ROC)曲线分析尿液外泌体 miR-494-3p 和 LncRNA MAGI2-AS3 水平对膀胱癌的诊断价值.结果 癌变组尿液外泌体miR-494-3p水平(1.41±0.32)高于良性组(1.02±0.24),LncRNA MAGI2-AS3 水平(0.79±0.19)低于良性组(1.05±0.22),差异具有统计学意义(t=9.866,9.089,均 P＜0.05).miR-494-3p高表达组肿瘤直径＞3 cm,T3～T4期以及淋巴结转移的占比显著高于miR-494-3p低表达组,差异具有统计学意义(x2=5.806,6.999,8.289,均P＜0.05).LncRNA MAGI2-AS3低表达组T3～T4期及发生淋巴结转移的比例明显高于LncRNA MAGI2-AS3高表达组,差异具有统计学意义(x2=9.244,7.795,均P＜0.05).尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3联合与病理活检诊断膀胱癌的一致性较高(Kappa值=0.718,P＜0.05).ROC曲线显示,尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平单独诊断膀胱癌的AUC(95％CI)分别为0.812(0.752～0.863)和0.779(0.716～0.833),尿液外泌体 miR-494-3p 和 LncRNA MAGI2-AS3 水平联合诊断膀胱癌的 AUC(95％CI)[0.877,(0.824～0.918)]显著高于两者分别单独诊断(Z=2.053,2.647,P=0.040,0.008).结论 膀胱癌患者尿液外泌体中miR-494-3p水平升高,LncRNAMAGI2-AS3水平下降,二者联合对膀胱癌的诊断价值较高.

目的 探讨成骨细胞来源的外泌体(Exo)中微小RNA(miR)-494 对骨质疏松症(OP)大鼠骨代谢与骨重建平衡的影响及其机制.方法 从MC3T3-E1 成骨细胞系中分离鉴定Exo,并将miR-494 电转至Exo,Real-time PCR测定miR-494 表达水平.40 只SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-494 模拟剂(miR-494)组和miR-494 抑制剂组,每组 10 只.除对照组外,其余 3 组大鼠切除卵巢构建OP模型.模型制作成功后,miR-494 组与miR-494抑制剂组分别接受含相应miRNA的Exo尾静脉注射,剂量为 3×109 个微粒.4 周后,Micro-CT检测各组大鼠的骨参数,ELISA测定血清骨标志物,HE染色观察骨组织病理变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)染色检测破骨细胞数量,Western blotting测定骨重建相关蛋白及Toll样受体4(TLR4)相关通路蛋白表达水平.结果 成功从MC3T3-E1 细胞中分离得到典型杯状或圆形,直径约 100 nm的Exo,其含有CD63、CD9、肿瘤易感性基因 101(TSG101)、热休克蛋白 70(HSP70)蛋白,且能被MC3T3-E1 细胞摄取.经电转处理后,miR-494 模拟剂和miR-494 抑制剂的Exo中miR-494 的相对表达量明显升高和降低(P＜0.05).与模型组相比,miR-494 组大鼠骨参数降低,血清骨标志物骨钙蛋白(BGP)、TRACP、Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)升高,骨保护蛋白(OPG)、Ⅰ型前胶原N端肽(PⅠNP)降低,骨小梁结构紊乱,破骨细胞增加,骨组织内骨形态发生蛋白 2(BMP-2)、Runt相关转录因子 2(RUNX2)下调,核因子κB受体激活剂配体(RANKL)上调,TLR4、核因子κB(NF-κB)p65 及髓样分化主要响应蛋白 88(MyD88)上调(P＜0.05).而miR-494 抑制剂组情况则相反,骨参数和OPG、PⅠNP升高,BGP、TRACP、CTX-Ⅰ降低,骨结构恢复正常,破骨细胞减少,骨组织内BMP-2、RUNX2 上调,RANKL下调,TLR4、NF-κB p65 及MyD88 下调(均P＜0.05).结论 Exo传递miR-494 可加重OP大鼠骨代谢异常,并抑制骨重建平衡,推测其作用机制可能与调控TLR4 通路有关.

目的 探讨环状RNA circ-TNRC6A在膀胱癌组织中的表达水平及其调控膀胱癌细胞增殖和迁移的作用机制.方法 采用癌症基因组图谱数据库分析circ-TNRC6A在膀胱癌组织中的表达水平及其与膀胱癌患者临床分期的关系.实时荧光定量PCR(qPCR)分析circ-TNRC6A在人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞系(MGH-U3、5637、RT-4、T24、J82)中的表达水平.在膀胱癌5637细胞中分别转染circ-TNRC6A质粒(circ-TNRC6A组)和对照质粒(NC组),细胞克隆形成实验和细胞划痕实验分别检测circ-TNRC6A对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响.生物信息学技术预测并采用荧光素酶报告基因实验证实circ-TNRC6A和微小RNA(miR)-494-3p的靶向关系.qPCR检测circ-TNRC6A对miR-494-3p表达的影响.蛋白质印迹法检测circ-TNRC6A对Wnt/β连环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白表达的影响.结果 与癌旁组织比较,circ-TNRC6A在膀胱癌组织中低表达(P＜0.01).circ-TNRC6A表达水平与膀胱癌患者临床分期有关(P＜0.05).与SV-HUC-1细胞比较,circ-TNRC6A在膀胱癌细胞系中低表达(均P＜0.05),5637细胞中circ-TNRC6A表达水平最低(P＜0.01).与NC组比较,过表达circ-TNRC6A可抑制5637细胞的增殖(P＜0.01),并降低细胞的迁移能力(P＜0.01).circ-TNRC6A能够靶向结合miR-494-3p(P＜0.01).与NC组比较,过表达circ-TNRC6A组降低miR-494-3p表达水平(P＜0.01),并抑制 Wnt/β-catenin信号通路的激活(P＜0.01).结论 circ-TNRC6A靶向下调miR-494-3p抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移,circ-TNRC6A可能成为膀胱癌新的治疗靶点.

目的 探究微小RNA-494-3p(miR-494-3p)在胃癌患者血清外泌体中的表达水平及临床意义.方法 采用TaqMan探针法RT-qPCR检测 44 例胃癌患者和 44 例健康人对照组血清外泌体中miR-494-3p的表达水平,采用ROC曲线分析并评估其对胃癌的鉴别诊断价值.同时,在 14 例胃癌组织和 16 例胃良性疾病对照患者胃组织中进行进一步验证.结果 与健康人对照组(1.00±0.36)相比,胃癌组血清外泌体中miR-494-3p的相对表达水平(0.21±0.03)显著降低,差异有统计学意义(Z=3.64,P＜0.01);胃癌组织中miR-494-3p的相对表达水平(0.22±0.07)亦显著低于胃良性疾病对照组(1.00±0.39),差异有统计学意义(Z=2.66,P＜0.01).血清外泌体miR-494-3p筛查胃癌和健康人的ROC曲线下面积(AUCROC)为 0.725(95%CI:0.622～0.829,P＜0.01),当cut-off值为 0.370 时,其敏感性为 50.0%,特异性为 86.4%,阳性预测值为 63.3%,阴性预测值为 78.6%,准确性为68.2%.结论 miR-494-3p在胃癌患者血清外泌体中呈低表达,有望成为胃癌筛查和辅助鉴别诊断的潜在生物学标志物.

目的 探讨微重力环境对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRTL-5)微小RNA(miRNA)表达的影响.方法 体外培养FRTL-5,随机分为模拟微重力(SMG)组和正常重力(NG)组,每组3个样本.SMG组采用旋转细胞培养系统(RCCS)模拟微重力环境,NG组于培养箱静置培养,24h后提取样本总RNA,进行荧光标记和芯片杂交.采用Feature Extraction软件处理杂交图像提取原始数据,应用Genespring软件进行分位数标准化和后续处理,筛选差异表达显著的miRNA,反转录实时定量PCR(RT-qPCR)验证芯片结果准确性.通过miRNA靶基因预测数据库TargetScan和microRNAorg对差异miRNA进行靶基因预测,以其交集作为潜在调节靶基因,对预测靶基因分别进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,判定差异miRNA主控的生物学过程和信号通路.结果 miRNA芯片检测发现,FRTL-5在模拟微重力环境下与正常重力环境下差异表达的miRNA有81个,其中53个显著上调,28个显著下调,差异表达最显著的3条,包括显著下调的rno-let-7b-3p、rno-miR-346(P＜0.05),以及显著上调的rno-miR-494-3p(P＜0.05),对其芯片结果进行RT-qPCR验证,结果相一致.GO分析显示,差异表达的miRNA与细胞老化、凋亡、对低氧的反应、转录等生物学过程相关;KEGG分析显示,差异表达的miRNA与低氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、环磷酸鸟苷-蛋白激酶G(cGMP-PKG)信号通路、叉头框转录因子O(FoxO)信号通路及多种甲状腺激素调节通路相关.结论 微重力环境下大鼠甲状腺滤泡上皮细胞相关miRNA表达发生显著变化,基于芯片技术的miRNA靶基因预测和功能富集分析可为甲状腺失重应激反应、损伤及修复措施的探讨提供理论参考.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-494介导成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)调控骨肉瘤细胞侵袭和迁移的机制.方法 瞬时转染法上调或下调骨肉瘤143B细胞的miR-494水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Western blot检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平.采用生物信息学软件Targetscan预测miR-494靶基因,并采用双荧光素酶报告实验验证其直接靶作用关系.建立骨肉瘤原位荷瘤裸鼠模型,给予miR-494 agomir处理,观察上调miR-494对荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用.结果 miR-494上调组24、48、72 h的细胞吸光度(A)值(0.092 ±0.014、0.135±0.024、0.323±0.051)分别低于对照组(0.142±0.034、0.247±0.028、0.511±0.042,t=3.261,P=0.025;￡=3.512,P=0.013;t=3.992,P=30.007).miR-494下调组24、48、72 h的细胞A值(0.155±0.012、0.356±0.024、0.746±0.095)分别高于对照组(0.086±0.007、0.218±0.028、0.557±0.039,t=3.026,P=0.039;t=3.925,P=0.008;=4.261,P=0.001).瞬时转染24 h后,miR-494上调组细胞跨膜数目(48.3±11.4)少于对照组(87.4±14.6,t=2.336,P=0.016),而miR-494下调组细胞跨膜数目(128.3±20.4)多于对照组(88.7±14.6,￡=2.567,P=0.012).miR-494上调组细胞迁移率[(52.6±8.7)％]低于对照组[(76.8±9.3)％,t =3.261,P=0.015],而miR-494下调组细胞迁移率[(87.6±7.6)％]高于对照组[(78.3±8.2)％,t=2.428,P=0.032].miR-494上调组细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达水平低于对照组,而miR-494下调组细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达水平高于对照组.FGFR2野生型与miR-494模拟物共转染组荧光素酶活性显著低于对照组,上调miR-494能抑制骨肉瘤143B细胞FGFR2的mRNA水平,而下调miR-494可促进骨肉瘤143B细胞FGFR2的mRNA水平.miR-494 agomir(494-agomir)给药组裸鼠肿瘤体积在给药后14、21、28 d[(237.9±23.8)、(449.3±26.8)、(726.9±58.7)mm3]分别低于对照组[(356.8±42.3)、(678.4±46.3)、(1 242.6±59.4) mm3,t=2.326,P=0.025;t3.126,P=0.004;t3.659,P=0.001].结论 miR-494可抑制骨肉瘤143B细胞增殖、侵袭和迁移能力,其机制与调控靶基因FGFR2密切相关.

目的 探讨血清微小RNA-494(miR-494)表达水平对心脏术后急性肾损伤(AKI)患儿的预后预测价值.方法 选择2016年1月至2019年3月三亚市人民医院收治的116例先天性心脏病(先心病)体外循环手术后并发AKI的患儿.所有患儿均于术后采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清miR-494表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)及肾损伤分子-1(KIM-1)水平.根据28 d预后将患儿分为存活组和死亡组,比较两组患儿一般资料及血清miR-494、NGAL、KIM-1水平.采用多因素Logistic回归分析心脏术后AKI患儿死亡的危险因素;受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-494、NGAL及KIM-1水平预测心脏术后AKI患儿预后的价值;Pearson相关性分析血清miR-494表达水平与NGAL、KIM-1的相关性.结果 116例先心病体外循环手术后并发AKI患儿28 d死亡27例,存活89例.与存活组比较,死亡组患儿紫绀比例显著升高,血液灌流比例显著下降,体外循环时间、术后机械通气时间明显延长,术后血糖水平明显升高,其他一般资料差异无统计学意义.死亡组血清miR-494、NGAL及KIM-1水平均明显高于存活组〔miR-494(2-ΔΔCt):3.75±1.28比1.48±0.71,NGAL(mg/L):583.60±52.72比320.52±31.84,KIM-1(μg/L):30.53±6.38比17.40±3.72,均P<0.01〕.多因素Logistic回归分析显示,紫绀〔优势比(OR)=1.716,95％可信区间(95％CI)为1.184～2.982,P=0.039〕、术后血糖(OR=1.925,95％CI为1.262～3.387,P=0.005)、血清miR-494(OR=2.527,95％CI为1.706～5.148,P<0.001)、NGAL(OR=2.473,95％CI为1.620～4.935,P<0.001)及KIM-1(OR=1.805,95％CI为1.213～3.106,P<0.001)升高是心脏术后AKI患儿死亡的独立危险因素.ROC曲线分析显示,血清miR-494、NGAL及KIM-1均可预测心脏术后AKI患儿死亡,ROC曲线下面积(AUC)分别为0.868、0.857、0.819;三者联合预测心脏术后AKI患儿死亡的AUC最大,为0.964(95％CI为0.908～0.997),其敏感度为97.0％,特异度为91.8％.相关性分析显示,死亡组血清miR-494表达水平与NGAL、KIM-1均呈显著正相关(r1=0.902、r2=0.873,均P<0.01).结论 血清miR-494表达水平在心脏术后AKI患儿中明显升高,是心脏术后AKI患儿死亡的独立危险因素;血清miR-494联合NGAL、KIM-1水平对患儿预后具有较高的预测价值.

目的 分析血清miR-27与老年2 型糖尿病下肢血管病变及25(OH) D3 水平的关系.方法 选取2017年10月—2019年5月河北省沧州市人民医院内分泌科确诊老年2型糖尿病患者86例为T2DM组,并以有无下肢血管病变分为下肢血管病变 (LLPAD)亚组44例和非下肢血管病变( Non-LLPAD) 亚组42例;选择同期医院门诊健康体检者76例为对照组,测定比较各组血清miR-27 mRNA表达及TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c、FPG、25(OH)D3 、hs-CRP、Fib水平.结果 T2DM组miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG水平高于对照组,25( OH) D3 、HDL-C水平低于对照组( t =13. 371、13. 036、25. 364、19. 698、29. 326、38. 489、95. 524、66. 547,66. 241、8. 698, P均=0. 000);LLPAD 亚组 miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、 HbA1c、 hs-CRP、 FPG 水平高于 Non-LLPAD 亚组,25 (OH)D3 、HDL-C水平低于Non-LLPAD亚组(t=5. 275、13. 541、26. 541、8. 965、20. 146、14. 548、14. 369、23. 654、7. 711、9. 491,P均=0. 000);miR-27 mRNA与25(OH)D3 、HDL-C呈负相关(r= -0. 486、-0. 483,P=0. 039、0. 039),与TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG呈正相关(r=0. 651、0. 572、0. 494、0. 747、0. 438、0. 523、0. 591,P均＜0. 05);高水平的miR-27 mRNA、TC及低水平的25(OH)D3 均为老年2型糖尿病合并下肢血管病变发生的危险因素(OR=2. 437、4. 268、13. 625,P＜0. 05);miR-27 mRNA、25(OH)D3 两者的AUC相近,均小于TC;miR-27 mRNA、25( OH) D3 诊断老年2型糖尿病下肢血管病变的敏感度、特异度相近(P＞0. 05),均小于TC(P＜0. 05).结论 老年2型糖尿病下肢血管病变患者血清miR-27 mRNA水平升高,与25(OH)D3 呈负相关;miR-27、25(OH)D3 诊断2型糖尿病下肢血管病变具有较高的敏感度、特异度,可作为判定2型糖尿病下肢血管病变的生物学标志物.