目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-494在脊髓损伤中的作用及其意义。方法:应用脊髓表面挫伤的方法建立大鼠脊髓损伤模型。分为1个假损伤对照组和5个脊髓损伤组，每组5只大鼠(购自复旦大学实验动物中心)。用miRNA芯片分析脊髓损伤后不同时间miRNA的表达。用agomiR-494鞘内治疗后，评定大鼠运动功能。正态性采用Shapiro-Wilk正态检验，组间差异采用单因素方差分析和双侧 t检验。 结果:与假损伤对照组比较，有14个miRNA上调，有46个miRNA下调2倍，而miR-494是最显著下调的miRNA之一。与单纯SCI组比较，agomiR-494鞘内治疗后的SCI＋agomiR-494组，大鼠运动功能明显改善，剩余组织(甲酚紫染色评估)增多，TUNEL阳性细胞减少。agomiR-494对miR-494的上调可促进脊髓损伤后大鼠的功能恢复，减小病变大小并抑制凋亡细胞。脊髓组织中miR-494的表达与第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的表达呈负相关( r＝－0.834， P<0.05)。此外，miR-494通过直接靶向BV-2细胞中的3’端非编码区(3’UTR)来抑制蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)途径的负调节剂PTEN。 结论:在大鼠脊髓损伤模型中miR-494的过表达通过抑制PTEN的表达来激活Akt/mTOR信号通路，对脊髓损伤具有保护作用。

目的:探讨老年帕金森病(Parkinson disease，PD)患者血清微小RNA-124(miR-124)、微小RNA-494(miR-494)表达水平及其临床意义。方法:选取2018年3月～2020年4月在郑州大学附属郑州中心医院住院治疗的90例PD患者(PD组)；同期选择在医院体检中心检查且与PD患者年龄、性别相匹配的100名非PD老年人作对照组。所有研究对象空腹12 h后取清晨静脉血4 ml，采用帕金森等级量表(unified Parkinson disease rating scale，UPDRS)对所有PD组患者从精神状态、行为和情感、生活质量、运动检查进行评分，利用帕金森病Hoehn-Yahr分级量表对PD患者进行分级；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测血清miR-124和miR-494表达水平；作ROC曲线判断miR-124、miR-494对PD患者的诊断价值。结果:UPDRS评分≤60分的PD患者Hoehn-Yahr分级明显低于UPDRS>60分的患者[(2.47±0.43)分，(3.42±0.47)分]，差异有统计学意义( t＝9.055， P<0.001)，但血清miR-124、miR-494表达水平差异无统计学意义[miR-124：(0.72±0.14)，(0.70±0.12)；miR-494：(1.17±0.19)，(1.18±0.22)]( t＝0.633，0.230， P＝0.529，0.819)；与对照组相比，PD组血清miR-124表达下调[(0.71±0.20)，(1.05±0.24)]，miR-494表达上调[(1.18±0.26)，(0.96±0.22)]( t＝10.542，6.315，均 P<0.001)；ROC曲线结果显示，血清miR-124、miR-494诊断PD的曲线下面积(AUC)分别为0.847，0.760，截断值分别为0.901，1.126，灵敏度分别为86.67%、61.11%，特异度分别为75.03%、79.00%；二者联合诊断PD的AUC为0.898，灵敏度和特异度分别为85.56%、85.00%。 结论:PD患者血清miR-124呈低表达，miR-494呈高表达，提示二者的水平变化可能与PD的发生、发展有关。二者均对PD有一定的诊断价值，且联合诊断价值更高。

本研究旨在探讨微小RNA(microRNA，miR)-494在膀胱癌细胞增殖、侵袭过程中的作用及其机制。

目的:观察小青龙汤和清气化痰丸对白细胞介素-1β（IL-1β）诱导的人肺癌细胞H292黏液高分泌模型及核转录因子-κB/微小RNA-494（NF-κB/miR-494）信号通路相关分子的影响，探讨两者改善病理性气道黏液的作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同浓度小青龙汤、清气化痰丸对IL-1β诱导的H292细胞活性的影响并选择合适浓度进行后续实验。将细胞随机分为空白组、模型组（5 μg/L IL-1β）、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（PDTC）组（5 μg/L IL-1β+100 μmol/L PDTC）、小青龙汤组（5 μg/L IL-1β+1 000 mg/L小青龙汤）和清气化痰丸组（5 μg/L IL-1β+1 000 mg/L清气化痰丸）；采用5 μg/L IL-1β诱导H292细胞24 h建立气道上皮黏液高分泌细胞模型。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞分泌黏蛋白5AC（MUC5AC）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-8水平及细胞内MUC5AC和囊性纤维化跨膜转导调节因子（CFTR）蛋白含量；采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测MUC5AC mRNA、CFTR mRNA和miR-494的表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NF-κB信号通路关键蛋白p65和NF-κB抑制因子（IκB）的蛋白表达。结果:选择浓度为1 000 mg/L的小青龙汤和清气化痰丸进行后续实验。与空白组比较，模型组细胞分泌MUC5AC、TNF-α和IL-8水平显著升高，细胞内MUC5AC蛋白含量和mRNA表达也显著升高，细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达均显著降低，且细胞内p65蛋白表达显著上调，IκB蛋白表达显著下调，miR-494表达显著升高。与模型组相比，PDTC组、小青龙汤组和清气化痰丸组细胞分泌MUC5AC、TNF-α、IL-8水平显著降低，细胞内MUC5AC蛋白含量和mRNA表达也显著降低，且细胞内p65蛋白表达均显著下调，IκB蛋白表达均显著上调，miR-494表达均显著降低；PDTC组和清气化痰丸组细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达均显著升高。与PDTC组相比，小青龙汤组细胞分泌TNF-α水平显著升高（ng/L：22.77±3.14比11.09±3.37， P<0.05），细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达、IκB蛋白表达均显著降低〔CFTR蛋白（ng/L）：97.38±6.62比227.04±19.48，CFTR mRNA（2 -ΔΔCt）：0.99±0.08比1.21±0.08，IκB/β-actin：1.69±0.11比2.00±0.18，均 P<0.05〕；清气化痰丸组细胞分泌TNF-α水平显著升高（ng/L：19.08±3.71比11.09±3.37， P<0.05）。与小青龙汤组相比，清气化痰丸组细胞内CFTR蛋白含量和mRNA表达、IκB蛋白表达均显著升高〔CFTR蛋白（ng/L）：235.01±22.71比97.38±6.62，CFTR mRNA（2 -ΔΔCt）：1.32±0.15比0.99±0.08，IκB/β-actin：1.94±0.16比1.69±0.11，均 P<0.05〕。 结论:小青龙汤改善气道上皮黏液高分泌炎症的机制可能与抑制NF-κB/miR-494炎症信号介导的MUC5AC高分泌有关，而清气化痰丸则可能与抑制NF-κB/miR-494炎症信号介导的MUC5AC高分泌及CFTR功能障碍有关，因此，二者治疗病理性气道黏液的机制差异主要在对CFTR基因和蛋白的调控上。

目的 探讨膀胱癌患者尿液外泌体中微小核糖核酸(microRNA,miR)-494-3p,长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)MAGI2-反义 RNA 3(MAGI2-antisense RNA 3,MAGI2-AS3)表达水平及临床应用价值.方法 选取重庆两江新区第一人民医院2021年7月～2023年6月收治的105例膀胱癌患者为癌变组,另选取同期膀胱良性疾病患者101例作为良性组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平.Kappa检验分析尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3与病理活检诊断膀胱癌的一致性;受试者工作特征(receiver op erating characteristic,ROC)曲线分析尿液外泌体 miR-494-3p 和 LncRNA MAGI2-AS3 水平对膀胱癌的诊断价值.结果 癌变组尿液外泌体miR-494-3p水平(1.41±0.32)高于良性组(1.02±0.24),LncRNA MAGI2-AS3 水平(0.79±0.19)低于良性组(1.05±0.22),差异具有统计学意义(t=9.866,9.089,均 P＜0.05).miR-494-3p高表达组肿瘤直径＞3 cm,T3～T4期以及淋巴结转移的占比显著高于miR-494-3p低表达组,差异具有统计学意义(x2=5.806,6.999,8.289,均P＜0.05).LncRNA MAGI2-AS3低表达组T3～T4期及发生淋巴结转移的比例明显高于LncRNA MAGI2-AS3高表达组,差异具有统计学意义(x2=9.244,7.795,均P＜0.05).尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3联合与病理活检诊断膀胱癌的一致性较高(Kappa值=0.718,P＜0.05).ROC曲线显示,尿液外泌体miR-494-3p和LncRNA MAGI2-AS3水平单独诊断膀胱癌的AUC(95％CI)分别为0.812(0.752～0.863)和0.779(0.716～0.833),尿液外泌体 miR-494-3p 和 LncRNA MAGI2-AS3 水平联合诊断膀胱癌的 AUC(95％CI)[0.877,(0.824～0.918)]显著高于两者分别单独诊断(Z=2.053,2.647,P=0.040,0.008).结论 膀胱癌患者尿液外泌体中miR-494-3p水平升高,LncRNAMAGI2-AS3水平下降,二者联合对膀胱癌的诊断价值较高.

目的 探讨成骨细胞来源的外泌体(Exo)中微小RNA(miR)-494 对骨质疏松症(OP)大鼠骨代谢与骨重建平衡的影响及其机制.方法 从MC3T3-E1 成骨细胞系中分离鉴定Exo,并将miR-494 电转至Exo,Real-time PCR测定miR-494 表达水平.40 只SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-494 模拟剂(miR-494)组和miR-494 抑制剂组,每组 10 只.除对照组外,其余 3 组大鼠切除卵巢构建OP模型.模型制作成功后,miR-494 组与miR-494抑制剂组分别接受含相应miRNA的Exo尾静脉注射,剂量为 3×109 个微粒.4 周后,Micro-CT检测各组大鼠的骨参数,ELISA测定血清骨标志物,HE染色观察骨组织病理变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)染色检测破骨细胞数量,Western blotting测定骨重建相关蛋白及Toll样受体4(TLR4)相关通路蛋白表达水平.结果 成功从MC3T3-E1 细胞中分离得到典型杯状或圆形,直径约 100 nm的Exo,其含有CD63、CD9、肿瘤易感性基因 101(TSG101)、热休克蛋白 70(HSP70)蛋白,且能被MC3T3-E1 细胞摄取.经电转处理后,miR-494 模拟剂和miR-494 抑制剂的Exo中miR-494 的相对表达量明显升高和降低(P＜0.05).与模型组相比,miR-494 组大鼠骨参数降低,血清骨标志物骨钙蛋白(BGP)、TRACP、Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)升高,骨保护蛋白(OPG)、Ⅰ型前胶原N端肽(PⅠNP)降低,骨小梁结构紊乱,破骨细胞增加,骨组织内骨形态发生蛋白 2(BMP-2)、Runt相关转录因子 2(RUNX2)下调,核因子κB受体激活剂配体(RANKL)上调,TLR4、核因子κB(NF-κB)p65 及髓样分化主要响应蛋白 88(MyD88)上调(P＜0.05).而miR-494 抑制剂组情况则相反,骨参数和OPG、PⅠNP升高,BGP、TRACP、CTX-Ⅰ降低,骨结构恢复正常,破骨细胞减少,骨组织内BMP-2、RUNX2 上调,RANKL下调,TLR4、NF-κB p65 及MyD88 下调(均P＜0.05).结论 Exo传递miR-494 可加重OP大鼠骨代谢异常,并抑制骨重建平衡,推测其作用机制可能与调控TLR4 通路有关.

目的 探讨血清外泌体微小RNA-494(miR-494)水平与妊娠期胎儿生长受限(FGR)的关系.方法 收集妊娠期妇女182例,RT-PCR法检测血清外泌体miR-494.对研究对象追踪至分娩结束,以是否发生FGR将研究对象分为FGR者及非FGR者.比较发生与未发生FGR孕妇的临床资料,采用多因素Logistic回归分析妊娠期发生FGR的影响因素及其交互作用.结果 182例孕妇中22例发生FGR、160例未发生FGR,FGR发生率为12.09%.发生FGR孕妇BMI、第27周血清外泌体miR-494水平、孕期增重过度比例、贫血比例、脐血流异常比例、羊水过少比例、脐带扭转比例、胎盘灌注不良比例、瘢痕子宫比例、不良孕产史比例及合并甲亢、甲减、免疫血栓相关疾病、肝内胆汁淤积症比例均高于未发生FGR孕妇,血细胞比容、血红素水平低于未发生FGR孕妇(P均<0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,第27周高血清外泌体miR-494、脐带扭转、不良孕产史、孕期增重过度、胎盘灌注不良是妊娠期发生FGR的独立危险因素(P均<0.05);第27周高血清外泌体miR-494与脐带扭转、不良孕产史、孕期增重过度及胎盘灌注不良均对妊娠期发生FGR具有相加交互作用(P均<0.05).结论 血清外泌体miR-494在发生FGR的孕妇中水平升高,是FGR发生的独立危险因素;在FGR发生中,高血清外泌体miR-494与脐带扭转、不良孕产史、孕期增重过度、胎盘灌注不良等危险因素存在相加交互作用.

目的 探讨环状RNA circ-TNRC6A在膀胱癌组织中的表达水平及其调控膀胱癌细胞增殖和迁移的作用机制.方法 采用癌症基因组图谱数据库分析circ-TNRC6A在膀胱癌组织中的表达水平及其与膀胱癌患者临床分期的关系.实时荧光定量PCR(qPCR)分析circ-TNRC6A在人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞系(MGH-U3、5637、RT-4、T24、J82)中的表达水平.在膀胱癌5637细胞中分别转染circ-TNRC6A质粒(circ-TNRC6A组)和对照质粒(NC组),细胞克隆形成实验和细胞划痕实验分别检测circ-TNRC6A对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响.生物信息学技术预测并采用荧光素酶报告基因实验证实circ-TNRC6A和微小RNA(miR)-494-3p的靶向关系.qPCR检测circ-TNRC6A对miR-494-3p表达的影响.蛋白质印迹法检测circ-TNRC6A对Wnt/β连环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白表达的影响.结果 与癌旁组织比较,circ-TNRC6A在膀胱癌组织中低表达(P＜0.01).circ-TNRC6A表达水平与膀胱癌患者临床分期有关(P＜0.05).与SV-HUC-1细胞比较,circ-TNRC6A在膀胱癌细胞系中低表达(均P＜0.05),5637细胞中circ-TNRC6A表达水平最低(P＜0.01).与NC组比较,过表达circ-TNRC6A可抑制5637细胞的增殖(P＜0.01),并降低细胞的迁移能力(P＜0.01).circ-TNRC6A能够靶向结合miR-494-3p(P＜0.01).与NC组比较,过表达circ-TNRC6A组降低miR-494-3p表达水平(P＜0.01),并抑制 Wnt/β-catenin信号通路的激活(P＜0.01).结论 circ-TNRC6A靶向下调miR-494-3p抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移,circ-TNRC6A可能成为膀胱癌新的治疗靶点.

目的 探究微小RNA-494-3p(miR-494-3p)在胃癌患者血清外泌体中的表达水平及临床意义.方法 采用TaqMan探针法RT-qPCR检测 44 例胃癌患者和 44 例健康人对照组血清外泌体中miR-494-3p的表达水平,采用ROC曲线分析并评估其对胃癌的鉴别诊断价值.同时,在 14 例胃癌组织和 16 例胃良性疾病对照患者胃组织中进行进一步验证.结果 与健康人对照组(1.00±0.36)相比,胃癌组血清外泌体中miR-494-3p的相对表达水平(0.21±0.03)显著降低,差异有统计学意义(Z=3.64,P＜0.01);胃癌组织中miR-494-3p的相对表达水平(0.22±0.07)亦显著低于胃良性疾病对照组(1.00±0.39),差异有统计学意义(Z=2.66,P＜0.01).血清外泌体miR-494-3p筛查胃癌和健康人的ROC曲线下面积(AUCROC)为 0.725(95%CI:0.622～0.829,P＜0.01),当cut-off值为 0.370 时,其敏感性为 50.0%,特异性为 86.4%,阳性预测值为 63.3%,阴性预测值为 78.6%,准确性为68.2%.结论 miR-494-3p在胃癌患者血清外泌体中呈低表达,有望成为胃癌筛查和辅助鉴别诊断的潜在生物学标志物.

目的 探讨miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌临床分期、转移和预后的关系.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测5种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7和乳腺上皮细胞系HBL-100中miR-494的表达水平;收集54对乳腺癌组织和癌旁组织,用qRT-PCR法检测其miR-494的表达水平,并分析其与乳腺癌临床分期、转移和预后的关系.结果 qRT-PCR检测结果显示,与正常乳腺上皮细胞HBL-100相比,MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7乳腺癌细胞系中miR-494的表达水平均明显降低(t分别为212.9、37.73、27.53、10.61、19.46,P均＜0.05).此外,miR-494在乳腺癌组织中的表达水平亦明显低于癌旁组织(t=5.80,P＜0.01),且与临床分期(x2=17.41,P＜0.05)、组织病理分级(x2=5.33,P＜0.05)、C-erbB-2表达情况(x2=9.83,P＜0.05)、Ki-67阳性细胞百分比(x2=6.13,P＜0.05)有关.结论 miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中低表达,且与乳腺癌临床分期、转移和预后关系密切,可成为乳腺癌辅助诊断和预后判断的分子标志.