目的:探讨微小RNA-499（miR-499）调节α型和β型肌球蛋白重链（α-MHC、β-MHC）基因轴在脓毒症心功能障碍（SMD）中的作用机制及意义。方法:将60只健康成年雄性SD大鼠按随机数字法分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（PBS组）、脂多糖（LPS）致SMD模型组（LPS组）、miR-499激动剂预处理组（agomir+LPS组）和miR-499抑制剂预处理组（antagomir+LPS组），每组15只。采用腹腔注射LPS 10 mg/kg制备SMD大鼠模型；PBS组腹腔注射等量PBS。两个预处理组分别于制模前连续3 d经尾静脉注射agomir 30 mg/kg或antagomir 80 mg/kg，每日1次；PBS组和LPS组不给予预处理。注射LPS 5 h后检测超声心动图，并记录相关指标；在注射LPS 6 h后取左心房血和心肌组织，采用实时定量聚合酶链反应（qPCR）检测血浆和心肌组织中miR-499的表达量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测心肌组织中α-MHC、β-MHC的蛋白表达；采用电化学发光仪测定血浆心力衰竭标志物N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平。结果:与PBS组比较，LPS刺激后大鼠出现精神萎靡，血浆和心肌组织中miR-499表达下调，且心肌组织中α-MHC表达显著下调、β-MHC表达显著上调，超声心动图结果显示左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、心排血量（CO）、每搏量（SV）和心率（HR）分别下降了49.1%、59.2%、48.8%、39.4%、15.9%，且血浆NT-proBNP水平显著升高，表明LPS能诱导大鼠心功能障碍。与LPS组相比，给予agomir预处理过表达miR-499后，超声心动图显示大鼠心功能改善，表现为LVEF、LVFS显著升高〔LVEF：0.662±0.020比0.323±0.024，LVFS：（36.16±1.43）%比（20.20±1.32）%，均 P<0.01〕；同时大鼠心肌组织中β-MHC/α-MHC失调被逆转，β-MHC蛋白表达显著下调（β-MHC/GAPDH：0.74±0.04比2.97±0.34， P<0.01），α-MHC的蛋白表达显著上调（α-MHC/GAPDH：1.59±0.05比0.74±0.14， P<0.01），且血浆NT-proBNP水平明显下降（ng/L：114.49±6.85比334.13±4.36， P<0.01）。而给予antagomir预处理抑制miR-499表达后，超声心动图显示大鼠心功能被显著抑制，表现为LVEF、LVFS较LPS组显著下降〔LVEF：0.297±0.021比0.323±0.024，LVFS：（19.38±1.52）%比（21.20±1.32）%，均 P<0.01〕；同时大鼠心肌组织中α-MHC蛋白表达显著下调（α-MHC/GAPDH：0.63±0.03比0.74±0.14， P<0.01），β-MHC蛋白表达显著上调（β-MHC/GAPDH：3.03±0.47比2.97±0.34， P<0.01），且血浆NT-proBNP水平明显升高（ng/L：373.91±4.23比334.13±4.36， P<0.05）。 结论:miR-499能通过调节SMD大鼠心肌组织中α-MHC、β-MHC的表达水平，改善脓毒症引起的心功能障碍；靶向调节miR-499的表达可能成为治疗SMD的有效途径。

目的:探讨微RNA（miRNA）单核苷酸多态性与慢性自发性荨麻疹（CSU）的风险关联。方法:采用病例对照研究，收集2019年1-6月在济宁医学院附属医院皮肤科诊治的98例CSU患者及同期148例健康对照，均为山东籍汉族，采集静脉血后提取基因组DNA，针对miRNA多态性位点rs2431697（miR-146a）、rs57095329（miRNA-146a）、rs3746444（miRNA-499）、rs11614913（miRNA-196a2）和rs895819（miRNA-27a）行多重PCR扩增反应和单碱基延伸反应，进行单核苷酸多态性（SNP）位点分型。采用 χ2检验分析组间等位基因、基因型及遗传模型分布差异，非条件Logistic回归分析基因SNP与疾病发生风险的关系。 结果:所有样本SNP均成功分型。miRNA-196a2 SNP位点rs11614913等位基因为T/C，病例组等位基因T频数110（56.1%），对照组131（44.3%），两组T/C频率分布差异有统计学意义（ χ2 = 6.64， P = 0.010），该位点等位基因T可能是CSU发生的危险因素（ OR = 1.61，95% CI：1.12 ~ 2.32）。病例组rs11614913基因型CC、CT、TT频数分别为16（16.3%）、54（55.1%）、28（28.6%），对照组为48（32.4%）、69（46.6%）、31（20.9%），两组基因型分布差异有统计学意义（ χ2 = 8.16， P = 0.017）；两组显性遗传模型（TT+CT与CC）分布差异亦有统计学意义（ χ2=7.95， P = 0.005），显性遗传模型可能增加了CSU发病风险（ OR=2.46，95% CI：1.30 ~ 4.65）。 结论:我国山东汉族人群miRNA-196a2 SNP与CSU风险可能存在关联，rs11614913可能会增加CSU发病风险。

目的:探讨叉头蛋白M1反义长链非编码RNA(LncRNA FOXM1-AS)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的支气管上皮细胞(BEAS-2B)炎症因子表达和上皮-间质转化(EMT)的影响，并研究其潜在机制。方法:本研究为实验研究。培养BEAS-2B，采用随机数字表法分成对照组，CSE组(2.5% CSE处理)、siNC+CSE组(转染siNC，给予2.5% CSE处理)、siFOXM1-AS+CSE组(转染siFOXM1-AS，给予2.5% CSE处理)；通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法、酶联免疫吸附试验法和蛋白质印迹法检测各组FOXM1-AS、IL-6、TNF-α、E-cadherin、Vimentin基因表达水平和IL-6、TNF-α水平以及SOX6蛋白表达；利用生物信息学软件miRcode预测FOXM1-AS的潜在靶基因(miR-499a-5p)，荧光素酶报告基因实验鉴定二者的靶向关系。结果:与对照组比较，CSE组细胞中FOXM1-AS的表达水平显著增加(1.06±0.08比2.89±0.31， P<0.01)。利用siFOXM1-AS沉默FOXM1-AS后，明显抑制了CSE诱导的细胞炎症因子IL-6(2.63±0.34比1.39±0.23， P<0.01)、TNF-α(2.58±0.23比1.35±0.20， P<0.01)的表达，细胞EMT进程中，E-cadherin基因表达水平增加(0.35±0.10比0.92±0.08， P<0.01)，而Vimentin基因表达水平减少(2.37±0.28比1.41±0.20， P<0.01)。此外，FOXM1-AS通过靶向结合miR-499a-5p调控SOX6表达。miR-499a-5p抑制剂可逆转siFOXM1-AS对CSE诱导的细胞炎症因子表达及EMT的作用。 结论:下调FOXM1-AS靶向miR-499a-5p可抑制CSE诱导的BEAS-2B细胞炎症因子表达和EMT。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-499-5p靶向CYLD对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:选取2020年5月至2022年5月我院收治的宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-499-5p表达水平。采用对照miRNA和miR-499-5p抑制剂转染宫颈癌细胞Hela，命名为对照miRNA组和miR-499-5p KD组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine，EdU)染色法分析肿瘤细胞增殖能力；采用划痕和Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-499-5p靶基因。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析两组细胞增殖、侵袭和靶蛋白表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:宫颈癌组织中miR-499-5p表达水平(1.78±0.21)明显高于癌旁组织(1.07±0.14)，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值水平(2.23±0.15)明显高于miR-499-5p KD组(1.45±0.08)，差异有统计学意义( t＝11.150， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(80.97±3.36)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.99±9.87)%]，差异有统计学意义( t＝5.396， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(87.24±3.87)%]明显高于miR-499-5p KD组[(67.38±2.51)%]，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)表达水平(1.36±0.10)明显高于miR-499-5p KD组(0.92±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.218， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(73.37±4.01)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.21±2.29)%]，差异有统计学意义( t＝7.637， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(106.83±8.95)个]明显高于miR-499-5p KD组[(81.17±7.49)个]，差异有统计学意义( t＝5.384， P<0.05)。对照组细胞黏着斑激酶(FAK)蛋白表达水平(1.16±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.67±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.409， P<0.05)。CYLD是miR-499-5p靶基因。对照组细胞CYLD蛋白表达水平(0.98±0.08)明显低于miR-499-5p KD组(1.59±0.06)，差异有统计学意义( t＝15.500， P<0.05)。癌旁组织CYLD蛋白表达水平(1.36±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.74±0.10)，差异有统计学意义( t＝19.310， P<0.05)。 结论:miR-499-5p在宫颈癌组织中高表达，主要靶向调控CYLD表达参与宫颈癌细胞的增殖和侵袭过程。

目的 探讨纤维蛋白原联合miR-499-5p对老年急性心肌梗死(AMI)患者预后不良的预测价值.方法 选取2020年5月—2023年3月航空总医院收治的94例老年AMI患者为研究对象.收集患者的临床资料、实验室检查指标、miR-499-5p及左心室射血分数(LVEF),根据随访1年的结果将患者分为预后良好(未出现不良心血管事件)和预后不良(出现不良心血管事件).纤维蛋白原、miR-499-5p与老年AMI患者心肌肌钙蛋白I(cTnI)、LVEF的相关性分析采用Pearson相关分析.采用多因素Logistic回归分析探讨老年AMI患者预后不良的影响因素;采用ROC曲线分析纤维蛋白原、miR-499-5p及二者联合预测老年AMI患者预后不良的价值.结果 94例患者中,预后良好71例(75.5%),预后不良23例(24.5%).预后良好与预后不良者Killip分级、AMI类型、纤维蛋白原、cTnI、miR-499-5p、LVEF比较,差异有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析结果显示,纤维蛋白原与老年AMI患者cTnI呈正相关,与LVEF呈负相关(P＜0.05);miR-499-5p与老年AMI患者cTnI呈正相关,与LVEF呈负相关(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,Killip分级[OR=5.627,95%CI(2.148～14.740)]、AMI类型[OR=9.841,95%CI(2.071～46.754)]、纤维蛋白原[OR=5.152,95%CI(2.308～11.501)]、cTnI[OR=1.354,95%CI(1.150～1.596)]、miR-499-5p[OR=1.208,95%CI(1.096～1.333)]、LVEF[OR=0.932,95%CI(0.876～0.992)]是老年AMI患者预后不良的独立影响因素(P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,纤维蛋白原、miR-499-5p及二者联合预测老年AMI患者预后不良的AUC分别为0.897[95%CI(0.815～0.979)]、0.915[95%CI(0.859～0.972)]、0.942[95%CI(0.889～0.994)].结论 纤维蛋白原、miR-499-5p是老年AMI患者预后不良的独立影响因素,二者联合对老年AMI患者预后不良有较好的预测价值.

目的 探讨血清微小RNA-499a-5p(miR-499a-5p)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者病情严重程度和预后的关系.方法 选取接受诊治的151例脓毒症患者为研究对象,根据ALI的发生情况分为脓毒症并发ALI组(68例)和一般脓毒症组(83例).根据氧合指数,将脓毒症并发ALI患者分为轻症组(23例)、中症组(26例)和重症组(19例).以脓毒症并发ALI患者诊治28 d内的生存情况,分为预后良好组(43例)和预后不良组(25例).另外,选取同期体检健康者151例为健康组.分析各组miR-499a-5p、FGF9及炎症因子间的差异和相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a-5p、FGF9对脓毒症患者并发ALI的预测效能.结果 轻症组、中症组、重症组患者的miR-499a-5p和FGF9水平表现为依次降低,而炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平依次升高,差异有统计学意义(P＜0.05).预后不良组的miR-499a-5p、FGF9低于预后良好组,IL-1、IL-6、TNF-α、CRP水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P＜0.05).脓毒症并发AI.I患者的miR-499a-5p、FGF9与IL-1、IL-6、TNF-α、CRP呈负相关(P＜0.05);miR-499a-5p可正向调节FGF9表达(P＜0.05).miR-93、miR-135a联合预测脓毒症并发ALI患者预后的诊断效能高于单独预测,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-499a-5p、FGF9、炎性因子水平与脓毒症所致ALI患者的病情程度和预后相关.miR-499a-5p和FGF9可能作为潜在的生物标志物用于脓毒症并发ALI的预后评估.

目的 观察冠状动脉再灌注治疗对急性心肌梗死(AMI)患者血浆外泌体微小RNA(miRNA,miR)差异表达的影响.方法 选取2022年10月至11月于深圳市龙岗区第三人民医院确诊的3例老年男性AMI患者,进行冠状动脉再灌注治疗,留取患者入院时、术后2 h和术后24 h静脉血,应用miRNA测序技术筛选3例患者血浆外泌体中共同差异表达miRNA后,对其靶基因进行生信分析,利用定量聚合酶链反应验证其中差异表达的miR-499a-5p.结果 与入院时比较,术后2 h血浆外泌体miRNA有418个上调和406个下调,术后24 h血浆外泌体miRNA有320个上调和225个下调(P＜0.05);与术后2 h比较,术后24 h血浆外泌体miRNA有344个上调和350个下调(P＜0.05).Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes富集分析显示,差异表达的miRNA富集在磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B、缺氧诱导因子1和血管平滑肌收缩等通路.Gene Ontology富集分析显示,差异表达的miRNA靶基因分子功能方面主要富集于蛋白结合和DNA结合;细胞组分方面主要富集于细胞膜和细胞质;生物学过程方面主要富集于信号转导和DNA模板转录.术后2 h miR-499a-5p水平显著低于入院时[(0.577±0.020)vs(1.000± 0.023),P＜0.05],术后 24 h miR-499a-5p 水平显著低于术后 2 h[(0.068±0.006)vs(0.577±0.020),P＜0.05].结论 血浆外泌体miRNA可作为早期诊断老年AMI患者和预测冠状动脉再灌注治疗效果的生物标志物.

目的:探讨血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值.方法:选取198例冠心病患者为研究对象,根据是否并发左心室肥厚分为并发组(n=82)和未并发组(n=116).比较两组患者一般资料、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p、血脂及细胞因子水平,Logistic回归分析影响冠心病患者并发左心室肥厚的因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值.结果:两组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平无统计学差异(P>0.05).并发组患者年龄、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p及总胆固醇(TC)水平、中性粒细胞/淋巴细胞(NLR)及血小板/淋巴细胞比值(PLR)高于未并发组(P<0.05).Logistic回归分析结果显示,患者年龄大、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p及TC水平较高、NLR及PLR值较高是导致响患者冠心病患者并发左心室肥厚的相关因素(P<0.05).ROC曲线分析显示,年龄、miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p、TC、NLR及PLR对预测冠心病患者并发左心室肥厚均较高价值,且各指标联合预测的价值更高(P<0.05).结论:患者年龄大、微小核酸(miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p)及TC水平较高、NLR及PLR值较高是导致冠心病患者并发左心室肥厚风险因素,微小核酸、TC、NLR及PLR联合检测对预测冠心病患者并发左心室肥厚有较高价值.

目的 通过观察异体输血对创伤性失血患者外泌体miRNA的差异表达,筛选出差异表达的外泌体miRNA,为后续靶基因和通路的研究奠定基础.方法 分别采集外伤患者在输异体血前和输血后外周血标本各3例,通过对血浆标本分离收获后的外泌体miRNA高通量测序,分析比较输血前后两组外泌体miRNA差异表达情况,同时以荧光定量PCR法进一步验证差异基因表达情况.结果 通过高通量测序分析,共测序到1 570个miRNA存在差异表达,实验组比较对照组,上调的有1 189个,下调的有381个,以倍数变化Fold change≥2.0,P-value ≤0.05作为差异miRNA筛选的阈值,筛选出显著变化的差异表达miRNA有 14个,其中显著上调的miRNA有5个,分别为miR-499a-5p、miR-200a-3p、miR-372-3p、miR-novel-chr12_5583、miR-novel-chr22_24253;显著下调的miRNA有9个,分别为miR-6852-5p、miR-452-5p、miR-1287-5p、miR-204-3p、miR-375-3p、miR-502-3p、miR-345-5p、miR-novel-chr7_38986、miR-451a.结论 输注同种异体血液对创伤性失血患者的外泌体miRNA存在差异表达.其发生机制可能通过不同信号通路对患者机体免疫系统调节产生影响.然而,对患者机体免疫调节程度、与肿瘤的相关性有待于扩大样本量进一步研究.

目的 检测微小RNA-499-5p(miR-499-5p)在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,并探讨其调节机制.方法 实时定量聚合酶链反应(PCR)法用来检测骨肉瘤组织、瘤旁组织及骨肉瘤细胞株中miR-499-5p的表达量.细胞计数试剂盒(CCK-8)法及Western blot 分别用来研究miR-499-5p对骨肉瘤细胞增殖能力的影响及探讨miR-499-Sp调节骨肉瘤细胞增殖的相关机制.结果 在骨肉瘤组织中,miR-499-5p表达量显著升高(肉瘤旁组织中表达量为0.34±0.09,而骨肉瘤组织中的表达量为1.47 ±0.18,P=0.008);此外,miR-499-5p在骨肉瘤细胞株HoS、MG-63及Hu09中的水平(分别为1.65±0.03、1.13 ±0.11、1.87±0.14)显著高于其在人骨髓间充质干细胞hMSCs中的水平(0.56±0.19,P =0.005);CCK-8实验结果表明,与空白及阴性对照组比较,在转染miR-499-5p mimics后48、72、96 h,MG-63细胞的增殖能力明显增强(P=0.030);流式细胞术检测细胞凋亡的结果表明,过表达miR-499-5p组内MG-63细胞的凋亡率为(0.87±0.19)％,显著低于空白组及阴性对照组内细胞的凋亡率[分别为(5.49±0.53)％、(6.72±0.85)％,P=0.030];此外,我们通过靶基因预测软件、结合RT-qPCT及Western blot结果初步认为miR-499-5p可通过转录后调节程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达而发挥上述促癌效应.结论 miR-499-5p在骨肉瘤组织中高表达且其在体外可促进骨肉瘤细胞的增殖.