目的:探讨微小RNA－17－5p(miR－17－5p)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(RT－qPCR)检测ESCC组织和细胞中miR－17－5p的表达。将miR－17－5p抑制剂和阴性对照转染食管鳞癌细胞EC9706和TE1，RT－qPCR检测转染后细胞中miR－17－5p的表达水平，细胞计数试剂盒8和EdU检测转染后细胞的增殖情况，Transwell小室检测细胞的侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验分析miR－17－5p与成视网膜细胞瘤样蛋白2(RBL2)直接的相互作用，Western blot检测转染后RBL2蛋白的表达，RT－qPCR检测RBL2在ESCC组织中的表达，并分析其与miR－17－5p表达的相关性。结果:ESCC组织中miR－17－5p的相对表达水平为4.222±0.39，高于正常食管上皮组织(1.081±0.046， P<0.001)。ESCC细胞EC9706、Eca109、TE1、KYSE450、KYSE70和KYSE520中miR－17－5p的相对表达水平分别为13.84±1.266、6.453±0.293、11.41±0.520、2.613±0.548、5.251±0.239和4.251±0.195，均高于正常食管上皮细胞Het－1A(1.007±0.079，均 P<0.05)。Ⅲ＋Ⅳ期ESCC组织中miR－17－5p的表达水平(5.094±0.562)高于Ⅰ＋Ⅱ期患者(2.934±0.364)，差异有统计学意义( P<0.01)；有淋巴结转移患者中miR－17－5p的表达水平(5.523±0.634)高于无淋巴结转移患者(3.533±0.461)，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p高表达患者的生存率低于miR－17－5p低表达患者，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p抑制剂能下调EC9706和TE1细胞中miR－17－5p的表达，其表达下调抑制细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素酶报告实验显示，无论是EC9706细胞还是TE1细胞，在RBL2 3′UTR－WT载体和miR－17－5p mimic共转染后，荧光素酶的活性显著降低( P<0.01)，RBL2是miR－17－5p的直接作用靶点。Western blot检测显示，miR－17－5p抑制剂组EC9706和TE1细胞中RBL2蛋白的表达量分别为0.936±0.055和0.923±0.048，明显高于对照组(分别为0.087±0.019和0.102±0.010)，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。ESCC组织中RBL2的表达水平为0.219±0.510，低于正常食管上皮组织(0.983±0.324， P<0.001)。ESCC组织中miR－17－5p的表达水平与RBL2的表达水平呈负相关( r＝－0.462, P<0.001)。RBL2表达下调能逆转miR－17－5p抑制剂引发的细胞增殖和侵袭能力降低。 结论:miR－17－5p参与ESCC的发生、发展过程，有望成为ESCC潜在的分子治疗靶点。

目的:探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源外泌体微小RNA(miR)-520e对前列腺癌细胞多西他赛耐药性的影响及其机制。方法:2019年5月至2019年12月，从福建医科大学附属第一医院泌尿外科前列腺癌手术患者癌旁组织获取原代CAFs，提取并鉴定CAFs外泌体后，将其与PC-3细胞共培养，细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测其在高浓度(30 nmol/L)、低浓度(5 nmol/L)多西他赛条件下细胞增殖能力，计算细胞抑制率。构建高表达及低表达miR-520e的CAFs，提取外泌体后与PC-3细胞共培养，检测其对细胞增殖能力的影响，并计算细胞抑制率。进一步，通过蛋白质印迹法(Western blot)检测Hippo信号通路标志蛋白水平，验证此通路是否参与外泌体miR-520e调控PC-3细胞多西他赛耐药过程。使用方差分析和独立样本 t检验比较组间差异。 结果:PC-3细胞抑制率与多西他赛浓度呈正比(Pearson r＝0.826， P<0.05)；加入CAFs来源外泌体后，高、低浓度多西他赛组细胞抑制率分别为(50.510±2.389)%和(28.233±5.441)%，均低于对照组( t＝12.010， P<0.05和 t＝5.614， P<0.05)。高、低表达miR-520e外泌体处理组中，PC-3细胞抑制率分别为(26.355±1.539)%和(72.965±1.777)%，与对照组[(59.856±2.570)%]比较，差异均有统计学意义( t＝19.370， P<0.05与 t＝7.270， P<0.05)。此外，高表达miR-520e外泌体处理组LATS1表达水平低于对照组(0.481±0.005比1.765±0.015， t＝139.200， P<0.05)，YAP表达高于对照组(0.932±0.001比0.688±0.005， t＝81.850， P<0.05)；而低表达miR-520e外泌体处理组则相反，LATS1表达高于对照组(2.370±0.050比1.765±0.015， t＝16.770， P<0.05)，YAP表达则低于对照组(0.371±0.002比0.688±0.005， t＝97.190， P<0.05)。 结论:CAFs来源外泌体miR-520e通过调控Hippo通路增强前列腺癌PC-3细胞对多西他赛的耐药。

目的:探讨长链非编码RNA同源异形盒转录反义RNA(lncRNA HOTAIR)通过靶向微小RNA-520g-3p(miR-520g-3p)对胰腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胰腺癌细胞中miR-520g-3p、HOTAIR表达水平；转染HOTAIR小干扰RNA至SW1990胰腺癌细胞中，并分为NC组、siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力，划痕愈合实验检测细胞迁移能力；双荧光素酶报告基因实验验证miR-520g-3p与HOTAIR靶向调控关系，两组之间的定量资料比较采用 t检验。 结果:qRT-PCR结果表明SW1990中HOTAIR mRNA水平明显高于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE，3.08±0.33比1.57±0.17， t＝29.830, P<0.01)；miR-520g-3p在SW1990中的表达水平明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE，0.93±0.11比2.63±0.24， t＝22.410, P<0.01)；HOTAIR小干扰RNA转染至SW1990中，72 h后NC组细胞吸光度( A)值明显高于siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组(3.52±0.99比1.92±0.23、2.36±0.58， t＝6.340、5.150， P<0.01)；降低HOTAIR表达48 h后，NC组细胞划痕愈合面积百分比为显著高于siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组[(85.37±9.82)%比(50.56±5.82)%、(35.28±6.86)%， t＝7.760, 14.750， P<0.01]，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因表明miR-520g-3p可明显降低野生型HOTAIR载体荧光素酶活性。下调miR-520g-3p表达水平后，SW1990细胞增殖及迁移能力高于对照组( t＝13.190、12.480， P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:HOTAIR可通过靶向负调控miR-520g-3p影响胰腺癌细胞增殖、迁移能力。

目的 探讨miR-146a在肺鳞癌发生、发展中的作用.方法 采用qRT-PCR法检测70例份肺鳞癌组织及其配对的癌旁正常组织、20例份正常肺组织miR-146a表达,并分析miR-146a表达与肺鳞癌患者临床病理参数的关系.筛选人肺鳞癌细胞SK-MES-1、NCI-H520、NCI-H2170、NCI-H226及正常肺组织上皮细胞(BEAS-2B)中miR-146a表达最低的NCI-H520细胞进行后续实验.采用脂质体介导法转染miR-146a mimics或阴性对照mimics-NC,Transwell小室法检测转染miR-146a mimics和阴性对照mimics-NC的NCI-H520细胞迁移和侵袭能力.结果 肺鳞癌组织miR-146a表达明显低于癌旁正常组织和正常肺组织(P均＜0.01).肺鳞癌组织miR-146a表达与肿瘤组织分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P均＜ 0.01).转染miR-146a mimics的NCI-H520细胞迁移和侵袭细胞数目较转染mimics-NC的NCI-H520细胞明显降低(P＜0.05或＜0.01).结论 肺鳞癌组织miR-146a表达降低,其表达变化与肿瘤的恶性生物学行为有关;miR-146a能够明显抑制肺鳞癌细胞的迁移和侵袭.

目的 筛选乳腺癌放射治疗(放疗)抵抗相关微小RNA(miRNAs),为乳腺癌患者放疗抵抗的基础研究与临床应用研究提供实验基础.方法 从基因表达综合数据库(GEO)中下载乳腺癌放疗患者相关miRNAs微阵列数据集GSE 107743,利用GEO2R分析工具筛选放疗后局部复发患者的差异表达miRNAs,mirDIP数据库预测差异表达miRNAs的靶基因,DAVID数据库对靶基因分别进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.最后采用实时荧光定量PCR在人乳腺癌细胞MCF-7中进行差异表达验证.结果 采用GEO2R分析工具筛选出9种与放疗抵抗相关的差异表达miRNAs,其中3种miRNAs(hsa-miR-600、hsa-miR-525-3p、hsa-miR-591)表达上调,6种miRNAs(hsa-miR-488-5p、hsa-miR-582-3p、hsa-miR-520h、hsa-miR-488-3p、hsa-miR-744-3p、hsa-miR-103b)表达下调.靶基因预测结果显示,9种差异表达miRNAs的潜在靶基因共134个.靶基因显著富集在细胞周期、细胞凋亡、干细胞分化等相关生物学过程(均P＜0.05)以及转化生长因子-β、磷脂酰肌醇3-激酶\蛋白激酶B信号通路等信号通路中(均P＜0.05).实时荧光定量PCR检测结果表明,6种miRNAs (hsa-miR-600、hsa-miR-525-3p、hsa-miR-591、hsa-miR488-5p、hsa-miR-582-3p、hsa-miR-520h)在经5 Gy 137Csγ射线辐照后的MCF-7细胞中表达差异改变与GEO2R分析结果完全一致.结论 利用生物信息学从乳腺癌放疗患者局部复发临床样本中筛选出的差异表达miRNAs可能与乳腺癌患者的放疗抵抗密切相关,有望成为放疗抵抗治疗的新靶点.

目的 探讨微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)Iowa Ⅱ株亲环素(CyPs)家族蛋白与微小隐孢子虫感染、致病、生存及与宿主免疫调控之间的关系.方法 利用生物信息学工具,获取微小隐孢子虫Iowa II株CyPs家族蛋白的序列信息,然后进行结构域预测、重要氨基酸位点的分析、motif搜索、蛋白的理化性质分析、信号肽预测和跨膜区预测,最后对不同物种的CyPs进行多重比对与进化树分析,并结合Blast-P同源比对和文献分析结果进行C.parvum Iowa Ⅱ株CyPs家族蛋白的功能预测.结果 搜索到了C.parvum基因组中7个含有cyclophilin superfamily典型结构域的CyPs编码基因,分别是cgd1_870、cgd2_1660、cgd2_4120、cgd5_3350、cgd7_520、cgd8_1560和cgd8_2350.通过功能预测发现,cgd1_870的N端含有信号肽,是一个典型的分泌型肽酰脯氨酸顺反异构酶(PPIase),很有可能是隐孢子虫和宿主相互作用的重要分子基础;cgd2_1660属于Cyclophilin_PPIL3 like亚家族,缺乏环孢菌素A(CsA)结合需要的关键氨基酸残基,无法结合CsA发挥免疫抑制作用;cgd2_4120属于cyclophilin_ABH_like亚家族,且含有CsA_PPIase_1 motif,在隐孢子虫细胞内可以作为CsA的胞内受体发挥着对隐孢子虫的免疫抑制作用;cgd7_520不仅具有CyPs家族的典型功能而且还具有WD40家族蛋白的相关功能,可能在隐孢子虫的生存过程中发挥着重要的作用;cgd8_2350还含有一个RRM结构域,不仅具备亲环素家族典型的PPIase活性,并且能够结合核酸参与基因表达过程的各种RNA加工过程,是一个对基因转录后水平有重要影响的蛋白.结论 隐孢子虫基因组中存在7种CyPs的编码基因,其特征与功能均存在异同,其中c#1_870具有分泌型的信号肽,是一个分泌性蛋白.

目的 探讨微小RNA-520e(miR-520e)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移和Janus激酶1( JAK1)／信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响.方法 采用实时定量PCR(QPCR)检测人肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞株H1299、H1975、H1650、A549的miR-520e水平;体外常规培养A549细胞并采用脂质体分别转染模拟物(过表达组)和阴性对照序列(NC组),以仅经脂质体处理的细胞为对照组.采用QPCR、活细胞计数CCK-8、划痕实验和Transwell实验检测miR-520e和含锌指和BTB结构域7A(ZBTB7A)水平、增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-9、磷酸化JAK1(p-JAK1)和磷酸化STAT3(p-STAT3)水平;双荧光素酶报告基因系统联合荧光素酶报告质粒psi-CHECK-2验证miR-520e与ZBTB7A的靶向关系.结果 与正常细胞相比,NSCLC细胞的miR-520e水平降低,其中A549细胞最低,差异有统计学意义( P＜0. 05).过表达组的miR-520e水平为19. 562± 1. 448,高于对照组的1. 002± 0. 057和NC组的1. 053±0. 082,ZBTB7A水平为0. 173±0. 026,低于对照组的1. 109±0. 091和NC组的1. 076±0. 136,差异均有统计学意义(P＜0. 05).与对照组和NC组相比,过表达组转染36、48 h后的增殖活力及转染48 h后的MMP-9、p-JAK1和p-STAT3水平均降低(P＜0. 05).过表达组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(23. 618±3. 684)%和(51. 644±7. 069)个,低于对照组的(57. 089± 4. 569)%和(152. 269±12. 833)个及NC组的(59. 267±5. 671)%和(149. 075±11. 239)个( P＜0. 05). MiR-520e模拟物与携带野生型ZBTB7A 3’端非翻译区的psiCHECK-2载体共转染细胞的相对荧光强度降低(P＜0. 05).结论 miR-520e在NSCLC细胞中表达下调且可能通过靶向ZBTB7A降低JAK1／STAT3信号通路活性来抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移.

目的:探究长链非编码RNA HOXA-AS2 (lncRNA HOXA-AS2)与微小RNA-520a-3p (miR-520a-3p)之间的靶向关系及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法:qPCR检测lncRNA HOXA-AS2与miR-520a-3p在多种卵巢癌细胞(SKOV3、HO8910、OVCAR3细胞)及正常卵巢上皮细胞HOSE中的表达水平.生物信息学手段预测HOXA-AS2与miR-520a-3p之间的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证.将si-HOXA-AS2、miR-520a-3pmimic、anti-miR-520a-3p和相应对照片段分别或共转染SKOV3细胞,MTT、Transwell和Western blotting法分别检测各组SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白(CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14)表达情况.结果:与HOSE细胞相比,多种卵巢癌细胞中HOXA-AS2均呈高表达(均P＜0.05)、miR-520a-3p均呈低表达(均P＜0.05);HOXA-AS2可靶向下调miR-520a-3p的表达.si-HOXA-AS2和miR-520a-3pmimics组SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力均较对照组均显著降低(均P＜0.01),且p21、p27蛋白表达显著升高,而CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白表达显著减少(均P＜0.01);si-HOXA-AS2+anti-miR-520a-3p组SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力较si-HOXA-AS2和si-HOXA-AS2+anti-miR-NC组显著增强(均P＜0.05).结论:lncRNA HOXA-AS2通过靶向抑制miR-520a-3p表达进而增强卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力.

目的 观察结肠癌组织中微小RNA(miRNA)-520a和RAB22A的表达变化,并探讨其意义.方法 选择77例结肠癌患者,术中分别切取癌组织及其癌旁正常组织.采用荧光实时定量PCR技术检测组织中的miR-520a和RAB22A,分析两指标与结肠癌患者临床病理参数的关系,并分析两者的相关性.结果 结肠癌组织及其癌旁正常组织中miR-520a的相对表达量分别为0.56±0.22、1.61±0.53,RAB22A的相对表达量分别为4.12±1.46、1.33±0.54,两者比较P均<0.01.结肠癌组织中miR-520a和RAB22A的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移以及TNM分期有关(P均<0.05).结肠癌组织中miR-520a的表达和RAB22A的表达呈负相关(r=-0.756,P<0.01).结论 结肠癌组织中RAB22A表达升高,而miR-520a表达降低,二者可能与结肠癌进展有关.

目的 通过DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)与siRNA干扰改变乳腺癌细胞MCF-7中DNA甲基化水平,探讨DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)表达对乳腺癌细胞相关mRNA、微小RNA(miRNA)的影响.方法 通过5-Aza-CdR抑制乳腺癌细胞整体甲基化水平,免疫荧光染色检测其抑制效果,高通量测序检测乳腺癌细胞miRNA的表达,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测乳腺癌细胞miRNA及乳腺癌相关基因的表达;通过siRNA干扰抑制乳腺癌细胞中Dnmt3b的表达,qRT-PCR和Western blotting检测siRNA干扰效率,细胞生长曲线反映细胞生长情况.结果 5-Aza-CdR降低细胞整体甲基化水平,siRNA干扰后Dnmt3b的表达下降,细胞生长显著抑制;高通量测序显示5-Aza-CdR作用后67个miRNA表达有统计学差异(均P<0.05);qRT-PCR结果显示5-Aza-CdR作用后乳腺癌细胞中miR-200a、miR-411、miR-382、miR-409、miR-493、miR-127、miR-520a、miR-654表达显著上调(P<0.05);siRNA干扰Dnmt3b后乳腺癌细胞中miR-29b、miR-506、miR-200a、miR-203b、miR-409、miR-520a、miR-654的表达显著上调(P<0.05),而miR-200b、miR-127的表达显著下调(均P<0.05);5-Aza-CdR作用后乳腺癌细胞WWOX、MMP7的表达下调,TCF21、TIMP1的表达上调(均P<0.05);siRNA干扰Dnmt3b后乳腺癌细胞抑癌基因BRCA1、BRCA2及癌基因MMP7、survivin的表达均下调(均P<0.05).结论 Dnmt3b可影响乳腺癌细胞相关基因WWOX、TCF21、BRCA1、BRCA2、MMP7、TIMP1、PKM2、survivin及miR-29b、miR-506、miR-200a、miR-200b、miR-203b、miR-409、miR-127、miR-520a、miR-654的表达.