目的:探讨肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠癌组织的表达变化及其上游微小RNA(miRNA，miR)对其表达水平的调控。方法:选取2020年1月至2023年1月新乡医学院第一附属医院收治的58例结直肠癌临床标本和癌旁组织作为研究对象，采用双向电泳技术分析结直肠癌和癌旁组织差异表达的蛋白，选取肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象，采用蛋白质印迹法(Western blot)分析癌旁组织和结直肠癌组织肿瘤相关钙信号传感器2表达水平。免疫组织化学分析两组组织细胞增殖抗原(PCNA)的阳性率；相关性分析肿瘤相关钙信号传感器2与细胞增殖的关系。转录组学分析癌旁组织和结肠癌组织miRNA，筛选差异靶向肿瘤相关钙信号传感器2的miRNA，并采用双荧光素酶报告基因验证分析miRNA的靶向性。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:双向电泳筛选10个差异的蛋白质，本研究选择差异显著的蛋白肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象。癌旁组织中肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(0.92±0.14)明显低于结直肠癌组织(1.62±0.20)，差异有统计学意义( t＝14.320， P<0.05)。PCNA表达阴性患者肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(1.33±0.13)明显低于结直肠癌组织(1.69±0.16)，差异有统计学意义( t＝6.092， P<0.05)。癌旁组织和结直肠癌组织总计差异miRNA共1 218个，其中上调表达732个，下调486个。发现5个与肿瘤相关钙信号传感器2存在互补的miRNA，分别为miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p。癌旁组织中miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p表达水平(1.07±0.08、1.07±0.09、1.11±0.15、1.01±0.10、1.15±0.15)明显高于结直肠癌组织(0.28±0.05、0.30±0.07、0.45±0.08、0.54±0.09、0.69±0.12)，差异有统计学意义( t＝21.050、26.350、14.850、12.600、9.165， P<0.05)。miRNA对照和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.96±0.07、0.94±0.03、0.92±0.06、0.91±0.08、0.95±0.05)明显高于miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p模拟物和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.22±0.06、0.24±0.07、0.34±0.09、0.45±0.08、0.60±0.12)，差异有统计学意义( t＝23.541、23.102、18.208、14.231、12.514， P<0.05)。 结论:肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠组织中表达显著上调，受miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p等miRNA调控。

目的 分析血清miR-27与老年2 型糖尿病下肢血管病变及25(OH) D3 水平的关系.方法 选取2017年10月—2019年5月河北省沧州市人民医院内分泌科确诊老年2型糖尿病患者86例为T2DM组,并以有无下肢血管病变分为下肢血管病变 (LLPAD)亚组44例和非下肢血管病变( Non-LLPAD) 亚组42例;选择同期医院门诊健康体检者76例为对照组,测定比较各组血清miR-27 mRNA表达及TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c、FPG、25(OH)D3 、hs-CRP、Fib水平.结果 T2DM组miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG水平高于对照组,25( OH) D3 、HDL-C水平低于对照组( t =13. 371、13. 036、25. 364、19. 698、29. 326、38. 489、95. 524、66. 547,66. 241、8. 698, P均=0. 000);LLPAD 亚组 miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、 HbA1c、 hs-CRP、 FPG 水平高于 Non-LLPAD 亚组,25 (OH)D3 、HDL-C水平低于Non-LLPAD亚组(t=5. 275、13. 541、26. 541、8. 965、20. 146、14. 548、14. 369、23. 654、7. 711、9. 491,P均=0. 000);miR-27 mRNA与25(OH)D3 、HDL-C呈负相关(r= -0. 486、-0. 483,P=0. 039、0. 039),与TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG呈正相关(r=0. 651、0. 572、0. 494、0. 747、0. 438、0. 523、0. 591,P均＜0. 05);高水平的miR-27 mRNA、TC及低水平的25(OH)D3 均为老年2型糖尿病合并下肢血管病变发生的危险因素(OR=2. 437、4. 268、13. 625,P＜0. 05);miR-27 mRNA、25(OH)D3 两者的AUC相近,均小于TC;miR-27 mRNA、25( OH) D3 诊断老年2型糖尿病下肢血管病变的敏感度、特异度相近(P＞0. 05),均小于TC(P＜0. 05).结论 老年2型糖尿病下肢血管病变患者血清miR-27 mRNA水平升高,与25(OH)D3 呈负相关;miR-27、25(OH)D3 诊断2型糖尿病下肢血管病变具有较高的敏感度、特异度,可作为判定2型糖尿病下肢血管病变的生物学标志物.

目的 探讨长非编码RNALINC01133通过靶向微小RNA(microRNA,miR)-625调控G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1,CCND1)促进胰腺癌发展的机制.方法 分析TCGA数据库中胰腺癌患者LINC01133水平和患者生存之间的关系.通过双荧光素酶报告验证LINC01133靶向miR-625和miR-625靶向CCND1.将胰腺癌细胞系SW1990分为4组:对照组、LINC01133组、LINC01133+mimic组和mimic组.通过质粒转染技术过表达miR-625和(或)LINC01133.通过qPCR和Western blot检测RNA和蛋白水平,CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞活力、细胞迁移和侵袭能力.结果 高水平的LINC01133与胰腺癌更低的生存率和无进展生存期有关(P<0.05).LINC01133直接靶向miR-625.LINC01133组miR-625水平显著低于对照组(P<0.05),LINC01133+mimic组的miR-625水平显著高于LICN01133组(P<0.05).LINC01133组的细胞活力、迁移和侵袭能力显著高于对照组(P<0.05),mimic组的细胞活力、迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.05),LINC01133+mimic组的细胞活力、迁移和侵袭能力显著低于LINC01133组(P<0.05).miR-625直接靶向抑制CCND1 mRNA和蛋白的表达,LINC01133通过靶向miR-625促进CCND1的表达.结论 在胰腺癌中,LINC01133具有促癌作用,并且LINC01133可能通过靶向miR-625促进CCND1的表达水平,从而促进胰腺癌细胞生长、迁移和侵袭.

目的 筛选儿童哮喘中重要的微小RNA (miRNA)及其靶基因.方法 从基因表达数据集(GEO)数据库中下载儿童哮喘基因芯片数据集GSE120172,用R语言软件对差异表达的miRNA(DEM)进行分析.利用miRDB、rniRTarBase和TargetScan三个在线工具预测DEM的潜在靶基因,并用R软件包clusterProfiler对靶基因进行注释.然后,利用STRING和Cytoscape软件构建蛋白质·蛋白质相互作用(PPI)和miRNA-hub基因网络.最后,使用CTD数据库进一步验证hub基因与哮喘之间的相关性.结果 共筛选出24个DEM,其中18个上调,6个下调,并预测到297个靶基因.基因本体论(GO)分析结果显示,靶基因在生物学过程中主要涉及上皮细胞增殖、细胞间连接,细胞组分主要与质膜、膜的组分有关;分子功能包括GTP酶活性、受体结合.京都基因与基因组百科全书(KE GG)通路显示,靶基因主要涉及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PDK-AKT)信号通路、叉头盒O(FoxO)信号通路.根据网络分析,miR-22-3p、miR-625-5p为重要的下调分子,miR-206、miR-200b-3p、miR-548at-5p、miR-193a-3p和miR-935是儿童哮喘相关的重要上调miRNA,细胞周期蛋白D1(CCND1)、去乙酰化酶1(SIRT1)、组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)等15个潜在靶基因是筛选出的关键基因.结论 筛选出7个在儿童哮喘的发生发展中有潜在作用的DEM及其靶基因.

目的:探讨乙型肝炎患者血清微小RNA-27a(miR-27a)、微小RNA-625(miR-625)表达水平及与肝硬化和肝癌的相关性.方法:选取2019年11月至2021年2月在成都医学院第三附属医院消化内科就诊的慢性乙型肝炎患者67例,作为乙型肝炎组、乙型肝炎后肝硬化患者63例,作为肝硬化组、乙型肝炎后肝癌患者65例,作为肝癌组,同期健康体检者65例作为对照组.实时荧光定量PCR法检测四组受试者血清miR-27a、miR-625水平;采用多因素Logistic回归分析影响乙型肝炎后肝硬化、肝癌发生的因素;采用受试者工作特征曲线评估血清miR-27a、miR-625水平对乙型肝炎后肝硬化、肝癌发生的预测价值.结果:对照组、乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组血清miR-27a水平依次升高,miR-625水平依次降低(P<0.05).血清miR-27a水平为影响乙型肝炎后肝硬化、肝癌发生的独立危险因素(P<0.05),血清miR-625水平为影响乙型肝炎后肝硬化、肝癌发生的保护因素(P<0.05).血清miR-27a、miR-625、二者联合预测乙型肝炎后肝硬化发生的曲线下面积(AUC)分别为0.708(95％CI:0.620～0.797)、0.761(95％CI:0.680～0.843)、0.815(95％CI:0.743～0.888),敏感度分别为73.02％、68.25％、65.08％,特异度分别为61.19％、73.13％、85.07％.血清miR-27a、miR-625、二者联合预测乙型肝炎后肝癌发生的AUC分别为0.870(95％CI:0.812～0.929)、0.913(95％CI:0.864～0.963)、0.966(95％CI:0.938～0.993),敏感度分别为79.23％、76.92％、73.64％,特异度分别为66.57％、72.54％、89.55％.结论:乙型肝炎患者血清miR-27a表达上调,miR-625表达下调,分别为影响乙型肝炎进展为肝硬化、肝癌的独立危险因素和保护因素,对乙型肝炎后肝硬化、肝癌的发生有一定的预测价值.

目的 探讨麝香保心丸(SBP)能否调控微小RNA-144-3p(miR-144-3p)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)减轻心肌细胞铁死亡.方法 将大鼠心肌细胞H9C2细胞分为3组:对照组、模型组和SBP组.对照组转染control RNA模拟物(mimic),模型组转染miR-144-3p mimic,SBP组转染miR-144-3p mimic并加入SBP(2 g/L)干预96 h.另取各组细胞分别加入加入不同浓度铁死亡诱导剂[爱拉斯汀(erastin)或RAS选择性致死化合物3(RSL3)]培养48 h.荧光素酶报告基因检测报告分析miR-144-3p与SLC7A11相互作用;结晶紫实验测量吸光度计算心肌细胞增值率和存活率;Real-time PCR检测 miR-144-3p、SLC7A11 mRNA 表达;Western Blot 检测细胞 SLC7A11、4-羟基壬醛(4-HNE)蛋白表达;免疫荧光检测心肌细胞脂质过氧化物水平.结果 与对照组比较,模型组24、48、72、96 h细胞增殖率及SLC7A11蛋白表达下降(P＜0.05),miR-144-3p及4-HNE蛋白表达增加(P＜0.01).与模型组比较,SBP组48、72、96 h细胞增殖率升高(P＜0.05),miR-144-3p mRNA表达降低(P＜0.01).各组细胞存活率随erastin或RSL3浓度升高而降低,78、156、312、625、1 250 nmol/L erastin及50、100、200nmol/L RSL3的干预,模型组较对照组心肌细胞存活率下降(尸＜0.05),SBP组较模型组心肌细胞存活率升高(P＜0.05).结论 SBP可以通过调控miR-144-3p/SLC7A11信号通路减轻心肌细胞铁死亡.

目的 探讨circ_0000285对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞氧化损伤的影响及其可能作用机制.方法 H2O2诱导大鼠心肌细胞H9C2建立细胞氧化损伤模型,si-NC、si-circ_0000285、si-circ_0000285与anti-miR-NC、si-circ_0000285与anti-miR-625分别转染至H9C2细胞后加入200μmol/L H2O2处理;用实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测circ_0000285、miR-625的表达量;用试剂盒检测丙二醛(malondialedhyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)的浓度与超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)的活性;用MTT实验检测细胞增殖能力;用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测circ_0000285与miR-625的靶向关系;Western blot法检测活化半胱氨酸蛋白酶3(cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-3,cleaved caspase-3)、微管相关蛋白轻链3II(microtubule-associated protein l light chain 3Ⅱ,LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(microtubule-associated protein l light chain 3Ⅰ,LC3-Ⅰ)蛋白表达量并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值.结果 H2O2诱导的H9C2细胞中circ_0000285的表达量升高(1.00±0.04 vs.2.24±0.12),而miR-625的表达量降低(1.00±0.05 vs.0.37±0.05);转染si-circ_0000285可降低H2O2诱导的H9C2细胞中MDA[(44.59±2.74)μmol/L vs.(25.87±2.83)μmol/L]、NO[(88.91±4.15)μmol/L vs.(50.01±4.42)μmol/L]的浓度和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(1.67±0.26 vs.1.07±0.12)(P<0.05),并可降低细胞凋亡率(28.26％±4.20％vs.15.42％±0.80％)和cleaved caspase-3蛋白浓度(P<0.05),而细胞存活率(47.62％±5.48％vs.90.21％±3.67％)、SOD的活性[(11.32±1.39)U/mL vs.(37.44±2.43)U/mL]升高(P<0.05);circ_0000285可靶向调控miR-625的表达;共转染si-circ_0000285与anti-miR-625后H2O2诱导的H9C2细胞中MDA[(25.78±2.33)μmol/L vs.(36.83±2.29)μmol/L]、NO[(50.46±3.15)μmol/L vs.(70.72±2.12)μmol/L]的浓度和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(1.07±0.11 vs.1.49±0.27)升高(P<0.05),细胞凋亡率(15.35％±0.52％vs.19.76％±0.74％)和cleaved caspase-3蛋白浓度升高(P<0.05),而细胞存活率(90.24％±4.01％vs.57.12％±4.07％)和SOD的活性[(37.93±2.59)U/mL vs.(22.45±1.88)U/mL]降低(P<0.05).结论 干扰circ_0000285表达可通过上调miR-625的表达而促进心肌细胞增殖并可抑制细胞氧化应激反应、凋亡及自噬从而减轻H2O2诱导的心肌细胞氧化损伤.

目的 探讨微小RNA-625-3P(miR-625-3p)与结肠癌根治手术患者病理学特征及预后的关系.方法 选取廊坊市人民医院2014年1月～2017年1月收治的结肠癌患者166例进行回顾性研究,采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测结肠癌组织与癌旁组织miR-625-3p表达水平,分析其与患者临床特征的相关性,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox比例风险回归模型分析预后影响因素.结果 miR-625-3p在结肠癌组织表达水平高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P＜0.05);与miR-625-3p低表达患者比较,miR-625-3p高表达患者低分化、浸润程度T3～T4、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移的比例更高,差异具有统计学意义(P均＜0.05);miR-625-3p高表达患者中位PFS、OS低于低表达患者,差异具有统计学意义(P＜0.05).多因素Cox比例风险模型分析结果显示:TNM分期Ⅲ～Ⅳ期(HR=1.853,95％CI=1.190-2.886)、淋巴结转移(HR=1.793,95％CI=1.224～2.628)、miR-625-3p高表达(HR=1.939,95％CI=1.126～3.336)是结肠癌患者预后不良的独立危险因素(P＜0.05).结论 结肠癌组织中miR-625-3p高表达,与TNM分期、淋巴结转移等临床特征密切相关,共同影响患者预后.

目的:探究基于肉瘤基因(RAS)信号通路研究微小RNA-625(miR-625)对多发性骨髓瘤大鼠的干预作用.方法:在60只大鼠中取15只作为空白组(A组)不建模,其余建立多发性骨髓瘤模型大鼠作为试验组,建模成功后分为模型组(B组)、过表达组(C组)、沉默组(D组)各15只,A组、B组做空白处理,C组、D组分别加入miR-625过表达质粒、miR-625siRNA行过表达、沉默转染.观察各组大鼠RAS通路蛋白及肿瘤相关指标的变化.结果:实验组大鼠肿瘤体积、腹水量平均值、荷瘤重量平均值均高于空白组(P＜0.05).与A组相比,B、C组细胞增殖率、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达量较高,细胞侵袭数、迁移数较多,细胞凋亡率、RAS、p-p38、Bax蛋白表达量较低(P＜0.05).与B、C组相比,D组大鼠肿瘤体积、腹水量平均值、荷瘤重量、细胞增殖率、RAS、p-p38、Bax蛋白表达量较低,细胞凋亡率、Bcl-2蛋白表达量较高,细胞侵袭数、迁移数较少(P＜0.05).结论:沉默miR-625可能通过抑制RAS信号通路,抑制多发性骨髓瘤大鼠恶性生物学行为.