目的:探讨巨噬细胞来源外泌体对白念珠菌（CA）形态转换的影响及其作用机制。方法:体外培养人急性单核细胞白血病细胞系THP-1，采用佛波酯诱导其分化成M0巨噬细胞。活化CA并配置其菌悬液，感染M0巨噬细胞，并于高内涵成像分析系统下观察细胞吞噬现象。采用差速离心法分别提取M0巨噬细胞来源的外泌体（外泌体组）及CA感染M0巨噬细胞后分泌的外泌体（CA外泌体组），并通过透射电镜观察、纳米颗粒跟踪分析、Western印迹法检测外泌体表面标志蛋白来鉴定并比较两组外泌体。将这两组外泌体分别与CA共培养（外泌体处理组、CA外泌体处理组），CA独立培养作为空白对照组，倒置显微镜下观察上述3组CA的形态变化，酶联免疫吸附试验检测胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量，实时荧光定量PCR检测cAMP相关基因RAS1及CDC35（也称Cyr1）的表达水平。结果:Western印迹检测显示，外泌体组和CA外泌体组外泌体均表达外泌体标志物肿瘤易感基因101蛋白（TSG101），均不表达阴性标志蛋白钙联蛋白（calnexin）；透射电镜观察及纳米颗粒跟踪分析显示，两组外泌体形态、大小无明显差异。倒置显微镜观察显示，与空白对照组相比，外泌体处理组及CA外泌体处理组CA由酵母相向菌丝相的转换明显受到抑制，其菌丝长度也明显缩短。酶联免疫吸附试验结果显示，外泌体处理组及CA外泌体处理组CA细胞内cAMP含量[分别为（16.70 ± 0.84）和（16.82 ± 0.87）pmol/ml]均显著低于空白对照组[（21.82 ± 1.08）pmol/ml； t = 6.45、6.23，均 P = 0.003]。实时荧光定量PCR结果显示，外泌体处理组及CA外泌体处理组CA cAMP相关基因RAS1及CDC35表达均较空白对照组下调（均 P < 0.01），且CA外泌体处理组RAS1 mRNA表达量低于外泌体处理组（ t = 7.43， P = 0.002）。 结论:M0巨噬细胞外泌体以及M0巨噬细胞感染CA后外泌体均能有效抑制CA菌丝的生长，且后者抑制作用更强，其作用机制可能是通过下调cAMP/蛋白激酶A通路中的cAMP实现。

目的:比较腹膜透析滤出液（PDE）外泌体微RNA（microRNA，miR）-503在不同腹膜转运特性患者中的表达差异，并预测miR-503的靶基因及其可能的生物学作用，为其在腹膜转运特性方面的研究提供生物信息学数据。方法:选取24例稳定维持性腹膜透析（PD）患者，根据腹膜平衡试验（PET）结果分为高转运（高/高平均转运组， n=12）和低转运（低/低平均转运组， n=12）两组。收集患者留腹过夜的PDE 500 ml，利用超滤杯进行浓缩后，超速离心法提取外泌体，重悬于磷酸盐缓冲液（PBS），通过透射电镜（TEM）、纳米粒子跟踪分析（NTA）、Western印迹和荧光染色鉴定外泌体的形态结构和功能。提取PDE外泌体miR，实时荧光定量PCR法检测两组PDE外泌体miR-503的表达水平，并分析miR-503的相对表达量与PET值和24 h超滤量的相关性。使用Targetscan和miRDB数据库预测miR-503的靶基因，运用富集分析工具DAVID（https://david.ncifcrf.gov/）进行基因本体（gene ontology，GO）功能富集和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）信号通路分析。 结果:PDE中提取到的外泌体透射电镜下呈杯状，直径100 nm左右，表达特异性表面标志CD63、CD81和热休克蛋白-70（HSP-70），可被间皮细胞内化吞噬。与低转运组相比，高转运组PDE外泌体miR-503的相对表达量较高（ P=0.002），且PDE外泌体miR-503的相对表达量与PET值呈正相关（ r=0.547， P=0.006），但与24 h超滤量无相关性（ r=-0.297， P=0.159）。miR-503共有156个靶基因可通过2个不同数据库同时预测出，156个靶基因的GO分析显示主要富集在与蛋白激酶结合、调节蛋白修饰和代谢过程以及调控上皮细胞增殖方面。KEGG通路则富集了许多肿瘤相关和经典的信号传导通路，包括转化生长因子-β（TGF-β）通路和血管内皮生长因子（VEGF）信号通路，同时血管内皮生长因子A（VEGFA）也是miR-503的直接靶基因，与许多纤维化机制中的蛋白相关。 结论:PDE外泌体miR-503在高转运组中明显升高，并与PET值呈正相关。生物信息学分析提示其可能通过靶向VEGFA调控腹膜血管新生。

目的 通过对聚六亚甲基胍消毒剂中和剂的选择鉴定,为进一步研究其杀菌效果提供依据.方法 采用中和剂悬液定量鉴定试验方法.结果 以大肠杆菌8099和白色念珠菌ATCC10231为试验菌,用5 g/L十二烷基硫酸钠、20g/L卵磷脂、20 g/L吐温80的PBS作中和剂,可有效中和4种聚六亚甲基胍消毒剂的残留作用.结论 5 g/L十二烷基硫酸钠、20 g/L卵磷脂、20 g/L吐温80的PBS是去除残留聚六亚甲基胍消毒液的理想中和剂.

目的 一种主要成分为醋酸氯己定的皮肤消毒剂杀菌效果检测试验中和剂的选择.方法 以单料D/E中和肉汤、双料D/E中和肉汤、5 g/L卵磷脂+100 g/L吐温80PBS、30 g/L卵磷脂+150 g/L吐温80PBS为备选中和剂,采用悬液定量法进行中和剂鉴定试验,比较4种中和剂对一种醋酸氯己定皮肤消毒剂的杀菌效果的中和作用.结果 含双料D/E中和肉汤和30 g/L卵磷脂+150 g/L吐温80PBS中和剂均可有效中和该消毒剂的残效作用,并且中和剂及中和产物对受试菌株均为无抑制和杀灭作用.结论 该种醋酸氯己定皮肤消毒剂适合的中和剂为含双料D/E中和肉汤和30 g/L卵磷脂+150 g/L吐温80PBS.消毒剂效果评价试验中选择适合的中和剂有助于提高试验结果的准确性.

目的 验证5种消毒剂的杀菌性能及消毒效果,为环境微生物控制的策略及实施提供依据.方法 采用中和剂鉴定试验测定相应中和剂的中和效果,然后通过悬液定量杀灭试验测定消毒剂的杀菌效果和作用时间;最后通过载体定量杀灭试验测定消毒剂在最短有效作用时间下对不同载体表面微生物的杀灭效果.结果 试验选取的中和剂对测试的消毒剂有良好的中和作用,中和剂及中和产物对测试微生物的生长无显著影响,可用于悬液定量杀灭试验及载体定量杀灭试验.悬液定量杀灭试验中,5种消毒剂对测试微生物均具有较高的杀灭作用,对细菌的杀灭对数值在4.26～6.44之间,对真菌的杀灭对数值在3.51～5.35之间,芽孢杆菌的杀灭对数值为4.21.载体定量杀灭试验中,消毒剂对细菌的杀灭对数值在4.25～5.65之间,对真菌的杀灭对数值在3.31～4.72之间,芽孢杆菌的杀灭对数值为3.61.结论 5种消毒剂对测试微生物的杀灭效果均符合标准规定,可用于洁净区的表面消毒灭菌.

目的 分析双链季铵盐类消毒剂对临床分离的革兰阳性球菌的灭菌效果,为消毒剂在临床科室的应用提供实验依据.方法 对临床分离的革兰阳性球菌进行细菌鉴定及药敏试验,采用悬液定量杀菌试验方法,分别用170 mg/L和340 mg/L的双链季铵盐消毒剂对其中革兰阳性球菌作用不同时间,观察其消毒效果.结果 不同浓度消毒剂对各革兰阳性球菌作用1 min,平均杀灭对数值均＞7.0,杀灭率达100.00％;药敏试验表明,MRSA对复方新诺明外的其他抗菌药物的耐药率均高于MSSA (P ＜0.05),MRS对所有抗菌药物的耐药性均高于MSS(P ＜0.05),肠球菌属粪肠球菌对奎奴普丁/达福普汀、四环素外的其他抗菌药物耐药率均明显低于屎肠球菌(P＜0.05),屎肠球菌对氨苄西林的耐药率为92.7％,粪肠球菌对氨苄西林完全敏感.结论 该双链季铵盐消毒剂在低浓度、短时间内对多重耐药型革兰阳性球菌的杀灭效果卓著.

[目的]从体外和体内研究Lactobacillus animalis LGM对Th细胞分化转录因子T-bet、GATA-3、ROR-γt和Foxp3的调节作用,以及探究L.animalis LGM对小鼠结肠炎的影响.[方法]本试验采用改良型的Hungate滚管技术从猪结肠内容物中分离一株L.animalis LGM,根据其16S rRNA序列进行鉴定.收集L.animalis LGM培养液上清,与细菌脂多糖(LPS,2μg/mL)同时孵育Caco-2细胞24 h,体外研究L.animalis LGM对Caco-2细胞内Th细胞分化转录因子(T-bet,GATA3,ROR-γt和Foxp3) mRNA表达的影响;配制L.animalis LGM细菌悬液,研究L.animalis LGM灌胃对DSS诱导结肠炎小鼠症状及结肠Yh细胞分化转录因子和细胞因子(IFN-γ,IL-4,IL-17和IL-10) mRNA表达的影响,表达结果采用荧光定量PCR法检测.[结果]与对照组相比,L.animalis LGM培养液上清显著上调Caco-2细胞内ROR-γt与Foxp3 mRNA表达(P＜0.05),显著下调GATA3、IL-4、IL-17和TGF-β mRNA表达(P＜0.05).L.animalisLGM灌胃显著上调小鼠结肠内ROR-γt和Foxp3的表达(P＜0.05),显著降低了促炎因子IL-4和IL-17的表达(P＜0.05),阻止了小鼠结肠长度缩短(P＜0.05).[结论]猪肠道分离L.animalisLGM表现出对Th细胞分化转录因子的选择性调节,显著上调Caco-2细胞及结肠炎小鼠ROR-γt与Foxp3 mRNA表达.降低DSS诱导结肠炎小鼠炎症水平,对DSS诱导结肠炎起保护作用,有助于维护肠道环境稳态.

目的:考察制药环境用消毒剂对环境分离菌的杀灭效果,为制药企业合理有效使用消毒剂提供依据.方法:在5家制药企业洁净区采集环境菌,分离纯化后鉴定到属或种.以微孔板稀释代替传统试管稀释,采用悬液定量杀灭试验法,快速评价0.39％酸性苯酚、70％异丙醇、75％乙醇、2％苯扎溴铵溶液、1％过氧化氢5种常用消毒剂对环境分离菌的杀灭效果.结果:最长作用时间下,0.39％酸性苯酚,2％苯扎溴铵溶液、70％异丙醇对细菌营养体的杀灭对数值均大于5;1％过氧化氢对霉菌孢子的杀灭对数值均大于4,对细菌芽孢的杀灭对数值在2.13～4.90之间.75％乙醇对葡萄球菌属的1株菌和微球菌属的3株菌的杀灭对数值小于5,其余菌株均大于5.缩短作用时间时,各消毒剂对环境分离菌的杀灭效果呈现出明显差异.微球菌属和葡萄球菌属分别对75％乙醇和70％异丙醇的敏感性较低.2％苯扎溴铵溶液对洋葱伯克霍尔德菌属菌株杀灭效果较差,作用时间延长,杀灭对数值增大.0.39％酸性苯酚对细菌营养体的杀灭效果较好,但溶血性葡萄球菌对其敏感性较低.结论:多种类多数量的环境菌株更能代表制药环境真实的微生物污染状况,是筛选合适的制药环境用消毒剂的重要因素.制药企业应在进行消毒剂效能验证时,结合实际环境监测结果,提高环境菌的数量和种类.依据效能验证数据,有计划的选择、轮换消毒剂.

目的 研究湿巾中污染菌种类及其防控措施.方法 采用细菌分离鉴定和悬液定量杀菌试验方法,对市售湿巾进行污染菌检测鉴定并观察不同消毒剂对污染菌的杀灭效果.结果 以湿巾中分离的蜡样芽胞杆菌为指标菌,在清洁条件下,浓度为有效碘5 000 mg/L的碘伏及酸性氧化电位水对其作用60 min,杀灭对数值均＜5.0;用有效氯2 000 mg/L含氯消毒剂和30 g/L过氧化氢消毒剂对蜡样芽孢杆菌芽孢作用30 min,杀灭对数值均＞5.0;用浓度为50 mg/L二氧化氯对其作用5 min,杀灭对数值均＞5.0.结论 市售湿巾细菌污染严重,可考虑使用过氧化氢或二氧化氯对湿巾生产用水及储水器和管道进行消毒.

目的 分离鉴定牙科综合治疗台水路系统(DUWLs)中污染微生物,通过优势菌对不同消毒剂的抗性评价现行消毒与感染控制措施.方法 选取某三甲专科口腔医院DUWLs作为研究对象,采用菌落计数法对使用中的DUWLs进行微生物培养计数,采用质谱分析仪分离鉴定优势菌,通过最低抑菌浓度试验(MIC)和最小杀菌浓度试验(MBC)评价优势菌对不同消毒剂的抗性,通过悬液定量杀菌法比较产黏液分枝杆菌与标准菌株(龟分枝杆菌脓肿亚种)的抗力.结果 24台DUWLs的48个水标本菌落检出率100.00％,平均菌落数为(2.25±1.43)×105 CFU/mL,并分离出9种污染微生物,优势菌为产黏液分枝杆菌(35.72％),其次为真菌(21.43％).分离的产黏液分枝杆菌对醋酸氯己定、次氯酸钠、过氧乙酸、过氧化氢4种常用消毒剂的MIC分别为1.5、500、5、100 mg/L,MBC分别为3、500、10、200 mg/L,对次氯酸钠的抗力接近标准菌株;0.5％醋酸氯己定在30 min内无法有效杀灭分离的产黏液分枝杆菌和标准菌株龟分枝杆菌脓肿亚种,0.1％次氯酸钠、3％过氧化氢及0.1％过氧乙酸在30 min内均可有效杀灭分离的产黏液分枝杆菌和标准菌株龟分枝杆菌脓肿亚种.结论 对含氯消毒剂抗力更强的非结核分枝杆菌已取代铜绿假单胞菌与军团菌成为本研究所选医院DUWLs中优势菌群,DUWLs的消毒应选择合适的消毒剂种类、浓度,以及有效的作用时间和使用频率.