β-内酰胺类抗生素是临床上广泛应用的一类抗生素，其抗菌机制是通过抑制细菌的细胞壁合成来达到杀菌的效果。然而，由于β-内酰胺类耐药基因在菌株间的广泛传播，导致β-内酰胺类抗生素的使用受到了极大的挑战。其中， blaTEM耐药基因是β-内酰胺酶的主要编码基因之一，迄今已鉴定出243个 blaTEM亚型，其在抗生素耐药性研究中具有极其重要的地位。本文将从 blaTEM基因的发现、结构及启动子， blaTEM基因的分布和传播， blaTEM基因的耐药机制以及研究现状进行综述，旨在为细菌中β-内酰胺类耐药基因亚型的研究提供借鉴。

目的:探讨亚胺培南联合常用抗菌药物对bla KPC-2型碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的体外抗菌作用。 方法:选取乐清市人民医院2018年1月至2019年1月分离的6株非重复的经聚合酶链反应和DNA序列确认的bla KPC-2型CRKP菌株，测量其对常用9种抗菌药物的敏感率，采取棋盘稀释法进行亚胺培南联合8种抗菌药物的药物敏感性试验，计算部分抑菌浓度指数（FIC）并评价联合应用效果；通过绘制体外时间-杀菌曲线评估联合用药的杀菌作用。 结果:6株bla KPC-2型CRKP菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、环丙沙星、利福平、头孢噻肟等抗菌药物耐药率为100.00％（6/6），对米诺环素、克拉维酸耐药率为66.67％（4/6），对替加环素耐药率为33.33％（2/6）；亚胺培南联合替加环素抗菌作用较好，对4株起协同作用、2株起相加作用；以菌株KPN2进行亚胺培南联合替加环素治疗的时间-杀菌曲线显示：菌株KPN2在亚胺培南1/2最低抑菌浓度（MIC）与替加环素1/4 MIC在（t+2）时杀菌率>95％，此作用可维持（t+10）h至（t+12）h，亚胺培南联合替加环素对002杀菌率逐步降低，002生长曲线逐渐上升。 结论:体外药物敏感性试验显示，亚胺培南联合替加环素对bla KPC-2型CRKP具有较好协同杀菌作用，可供临床治疗bla KPC-2型CRKP感染患者时参考。

目的:通过体外药物代谢动力学(PK)/药物效应动力学(PD)研究，比较国产和原研替加环素对细菌的抗菌与杀菌效果。方法:利用体外PK自动模拟系统PASS400模拟不同剂量替加环素给药方案(100 mg，1次/d；50 mg，12 h/d；100 mg，12 h/d)，观察国产与原研替加环素对大肠埃希菌标准株(ATCC25922)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌标准株(ATCC BAA-1706)和多重耐药鲍曼不动杆菌临床菌株(AB-16703)时间杀菌曲线以及相关PD参数。应用GraphPad Prism 7统计软件对数据进行分析。结果:在模拟不同给药剂量PK条件下，国产与原研替加环素具有相似的抗菌效果，但均表现较弱的抗菌效果。两者的时间杀菌曲线几乎重叠，最大杀菌量均<2 log，在24 h内，细菌都恢复生长到细菌的生长平台期。在PD参数比较中，原研与国产替加环素(100 mg，1次/12 h)对大肠埃希菌ATCC25922最大杀菌量分别为(-1.101±0.147)lg CFU/mL和(-1.105±0.208)lg CFU/mL；对肺炎克雷伯菌ATCC BAA-1706最大杀菌量分别为(-1.999±0.187)lg CFU/mL和(-1.865±0.066)lg CFU/mL；对鲍曼不动杆菌AB-16703最大杀菌量分别为(-0.240±0.209)lg CFU/mL和(-0.230±0.187)lg CFU/mL。不同给药方案下，两种药物对三种菌的最大杀菌量、细菌再生至初始菌量时间、24 h杀菌量和杀菌与恢复生长曲线与空白对照曲线面积差比较，差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:替加环素在体外模拟人体药物代谢过程条件下不能表现出良好的抗菌活性；原研与国产替加环素体外PK/PD效果相似。

目的:采用肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2为抗原制备重组蛋白疫苗，在小鼠肺炎模型中评价疫苗的免疫原性、保护效果和保护机制。方法:利用大肠埃希菌原核表达系统表达肺炎克雷伯菌KPC-2蛋白，经GST亲和层析对目的蛋白进行纯化；采用KPC-2蛋白制备疫苗，经皮下注射免疫新西兰兔，心脏采血分离血清，用Protein G亲和层析纯化多克隆抗体，同时运用调理吞噬杀菌试验检测抗体的体外杀菌活性。采用KPC-2疫苗免疫雌性BALB/c小鼠3次，间接ELISA检测血清中特异性IgG抗体滴度。末次免疫后7 d，通过气管插管构建小鼠肺炎克雷伯菌肺部感染模型，感染1 h后尾静脉给予0.1 mg美罗培南治疗，通过比较免疫组与佐剂组的生存率、细菌定植量和组织病理学差异，以及给药组与生理盐水组生存率的差异评价疫苗的保护效果。采用KPC-2多克隆抗体被动免疫评价抗体的保护效果。结果:KPC-2免疫组小鼠血清特异性IgG水平显著高于对照组( t＝4.325, P<0.05)，免疫组生存率显著高于对照组[70% (7/10) vs 10% (1/10)， P<0.05]；免疫组小鼠肺组织炎性程度及细菌定植量显著低于对照组( t＝3.127, P<0.05)；疫苗主动免疫与被动免疫均具有良好的保护效果，且对抗生素治疗有明显的增效性；KPC-2多克隆抗体在体外表现出明显的吞噬杀菌活性( t＝5.427, P<0.05)。 结论:KPC-2疫苗具有良好的免疫原性和保护效果，体液免疫应答在其保护中发挥了重要作用，证明采用耐药靶标作为抗原制备疫苗具有可行性。

铜绿假单胞菌是临床上常见的多重耐药菌之一，因其可以通过产生具有“保护作用”的生物膜从而影响抗菌药物的渗透杀伤效能，导致宿主形成顽固而持久的慢性感染。生物被膜使得铜绿假单胞菌产生对抗菌药物的耐药性和对宿主免疫系统的逃避性，因此传统常规的抗菌药物很难达到有效的杀菌治疗效果。了解铜绿假单胞菌生物被膜形成的过程及影响生物被膜的调控机制可以为我们今后研究新的抗菌药物提供思路和方法。

目的:原核表达淋病奈瑟球菌MetQ蛋白，采用鼻腔免疫途径初步评估MetQ蛋白的免疫保护效果。方法:利用基因重组技术构建pCold TF-metQ- E.coli BL21表达菌株，并进行MetQ蛋白的表达纯化。将6 ~ 8周龄BALB/c雌性小鼠随机分两组，每组6只，MetQ组：MetQ蛋白+霍乱毒素B亚单位（CTB）佐剂等比例混匀后对小鼠进行鼻腔滴注，10 μg/只；磷酸盐缓冲液（PBS）组：鼻腔滴注等比例、等剂量的PBS + CTB佐剂。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MetQ组末次免疫后3只小鼠的血清及阴道分泌物中的抗体效价。免疫印迹分析MetQ在不同淋病奈瑟球菌中的表达情况。间接ELISA分析MetQ抗血清与全菌抗原的结合能力。评估MetQ抗血清对淋病奈瑟球菌的杀菌活性以及对ME-180细胞的黏附抑制作用。计量资料以 ± s表示，不同处理组间比较采用 t检验。 结果:成功表达去除信号肽的MetQ蛋白。MetQ组小鼠经鼻腔免疫后血清能检测到特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgA抗体，抗体滴度分别达1 × 10 7、1 × 10 5、2 × 10 4、1 × 10 2，阴道分泌物能检测到特异性IgG、IgA抗体，抗体滴度分别达1 × 10 3和1 × 10 2。免疫印迹结果显示，MetQ蛋白在8株淋病奈瑟球菌中均有表达。间接ELISA结果显示，MetQ抗血清与淋病奈瑟球菌全菌抗原结合能力为20。血清杀菌力实验结果显示，与无血清对照组（100%）相比，MetQ抗血清的有效杀菌滴度可达1∶320（淋病奈瑟球菌存活率：46.33% ± 6.67%， t = 8.05， P = 0.001），MetQ抗血清稀释1∶160、1∶640时，淋病奈瑟球菌存活率分别为22.01% ± 6.80%（ t = 11.47， P <0.001）、84.55% ± 6.99%（ t = 2.21， P > 0.05）。黏附抑制实验结果显示，与无血清对照组（100%）相比，MetQ抗血清稀释1∶20、1∶40、1∶80能抑制淋病奈瑟球菌对ME-180细胞的黏附作用（淋病奈瑟球菌黏附率= 17.25%、28.23%、54.51%， t = 48.44、31.88、7.29，均 P<0.05）。 结论:MetQ蛋白在不同淋病奈瑟球菌中均有表达，经鼻腔免疫小鼠后能在血清及阴道分泌物中检测到高效价的特异性抗体。MetQ抗血清与淋病奈瑟球菌有较好的亲和性，并具有较好的血清杀菌活性及抗体黏附抑制作用，是一种有潜力的淋病奈瑟球菌疫苗候选蛋白。

目的:探讨硫氯酚与庆大霉素联用对粪肠球菌的抗菌活性。方法:11株粪肠球菌临床菌株于2018年1月至2019年12月收集自中南大学湘雅三医院住院患者，通过微量肉汤稀释法检测硫氯酚及庆大霉素对粪肠球菌的抗菌活性；通过微量棋盘稀释法检测硫氯酚与庆大霉素的联用效果；最后，选取亚抑菌浓度的硫氯酚及与庆大霉素分别单独及联合处理48 h后观察其持续抗菌效果。多组间计量资料比较采用单因素方差分析，多组中两两比较采用Tukey或Dunnett检验。结果:硫氯酚对粪肠球菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为2~4 mg/L和4~8 mg/L。硫氯酚与庆大霉素联用具有协同抑菌作用，其协同抑菌指数为0.313~0.375。硫氯酚与庆大霉素联用48 h能持续抑制粪肠球菌的增殖（ P<0.01）。硫氯酚能协同庆大霉素抑制粪肠球菌生物膜的形成及分散24 h已形成的生物膜（ P<0.05）。 结论:硫氯酚与庆大霉素联用对粪肠球菌具有协同抑制作用，且抑菌效果可持续48 h以上。

目的:探讨含有血小板源性生长因子BB(PDGF-BB）的载银介孔二氧化硅纳米颗粒（Ag-MSN）这种新型纳米抗菌材料（P-Ag-MSN）的银离子（Ag +）缓释特点及其对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的细胞毒性和体外抗菌性能。 方法:2016年1月至2018年6月，模板法与共沉淀法结合，精确制备出Ag-MSN,将PDGF-BB加载进入Ag-MSN，利用火焰原子吸收光谱法进行检测Ag +缓释特点；从SD大鼠提取并培养BM- SCs，对CD29、CD45进行流式细胞检测，鉴定BMSCs的纯度，取长势良好的第3代BMSCs，检测P-Ag-MSN的细胞毒性；制备不同浓度的P-Ag-MSN混悬液，检测对骨髓炎常见细菌的体外抗菌效果。数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析, P<0.05表示差异有统计学意义。 结果:P-Ag-MSN中的Ag +逐步释放，6~ 12 h后达到峰值；随后释放的幅度逐步下降，并逐渐稳定在一定的浓度。不同浓度的P-Ag-MSN对大鼠BMSCs在1、3、5、7 d时的相对增殖率均值均在80％以上，细胞毒性评级均为0级或I级，对大鼠BMSCs无明显细胞毒性，差异无统计学意义（ P>0.05）。P-Ag-MSN对于大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠球菌均有杀菌效果，其最小杀菌浓度（MBC）分别为25.0、50.0、50.0 μg/ml，对金黄色葡萄球菌无明显杀菌效果，其MBC为100.0 μg/ml。 结论:新型纳米抗菌材料P-Ag-MSN的细胞毒性小，具有良好的缓释效果，在体外对骨髓炎常见细菌有明显抗菌作用。

本研究使用生物膜发生器法建立体外铜绿假单胞菌生物膜实验模型，评价2种流经杀菌树脂的水对铜绿假单胞菌生物膜清除效果，探讨低浓度消毒因子持续处理对口腔综合治疗台水路消毒的有效性。实验组选择消毒因子浓度为1~2 mg/L的聚碘树脂（iodinated resin，IR）滤过水、溴代聚苯乙烯海因树脂（简称：溴代海因树脂，bromined hydantoin resin，BHR）滤过水，对照组选择无菌蒸馏水，使用浸泡法持续处理生物膜片，处理时间为3、7、10、20、40 d。应用生物膜菌落总数计数法（total viable count，TVC）及激光共聚焦显微镜观察法（confocal laser scanning microscopy，CLSM）对生物膜的清除效果进行评价。结果显示，（1）TVC：IR组处理3、7、10、20 d后及BHR组处理3、7、10 d后，细菌清除率均低于99.9%，判定为消毒不合格；IR组处理40 d后及BHR组处理20、40 d后，细菌清除率分别达99.95%、99.99%、100.00%，消毒合格。（2）CLSM观察：处理前铜绿假单胞菌生物膜片呈片状、团块状分布，生物膜细菌覆盖率为19.24%±1.97%，活细菌比例为93.91%±1.39%，生物膜基质覆盖率为17.69%±1.11%。处理20 d后，IR组可见生物膜减少，但仍有基质残留，生物膜细菌覆盖率为6.77%±1.61%，活细菌比例为54.85%±5.65%，生物膜基质覆盖率为2.41%±0.85%，与处理前及对照组比较，差异均有统计学意义（ F=359.996， P<0.001）；BHR组未见生物膜样结构。处理40 d后，IR组仍存有少量生物膜基质残留，生物膜基质覆盖率为0.67%±0.47%，与处理前及对照组相比，差异有统计学意义（ F=1 021.373， P<0.001），未见生物膜细菌覆盖；BHR组未见生物膜样结构。综上，BHR滤过水持续浸泡法在清除生物膜活、死细菌及生物膜基质方面更具优势，含相应低浓度消毒因子的诊疗用水在口腔综合治疗台水路系统生物膜控制领域可发挥重要作用。

接种疫苗作为预防控制侵袭性脑膜炎奈瑟菌病（IMD）最经济有效的措施之一，如何科学制定与当前IMD流行病学特征相适应的免疫策略是影响其防控效果的关键因素。尽管我国2021年上市的ACWY群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗（MenACWY/MCV4）已在临床试验中证实了其免疫原性及安全性，但实践应用中仍未完全覆盖IMD高发人群，且缺乏长期的血清学免疫持久性数据。为积极响应WHO发布的2030年战胜脑膜炎的路线规划，本研究整理归纳了全球MCV4疫苗的应用现况及各国免疫策略，从基础免疫及加强免疫角度系统分析了血清学免疫持久性数据，结果显示，MCV4基础免疫的初免年龄越大，血清学免疫持久性越好；与W群、Y群和C群相比，抗A群脑膜炎奈瑟菌（ Nm）血清杀菌活性衰减最快。在完成基础免疫后的3~6年加强1剂MCV4，可诱导持久的免疫反应及快速的免疫记忆。鉴于当前青少年是我国IMD高发及 Nm高携带率群体，我国MCV4的应用年龄范围需基于严谨科学的临床试验数据逐步扩大，并探索评估加强免疫策略的必要性及相应的实施程序。