目的:对2个遗传性异常纤溶酶原血症家系进行表型及基因突变分析，探讨遗传性异常纤溶酶原血症与脑梗死之间的关系。方法:回顾性分析2021年1月和3月温州医科大学附属第一医院神经内科确诊的2例发生脑梗死患者的临床资料，采集先证者1及其家系成员（共4代8人）和先证者2及其家系成员（共3代5人）的外周静脉血标本，检测纤溶酶原活性（PLG：A）、蛋白C活性、蛋白S活性、抗凝血酶活性及纤溶酶原抗原（PLG：Ag）、纤维蛋白原、D-二聚体和纤维蛋白（原）降解产物含量等指标进行分析。采用聚合酶链反应扩增PLG基因的所有19个外显子及其5′和3′侧翼区，用DNA直接测序法分析其扩增产物；测序结果使用Chromas软件与美国国家生物技术信息中心数据库中公布的人类PLG基因参考序列进行比对，寻找突变位点，采用反向测序法予以证实。结果:2例脑梗死患者均为青年起病，先证者1的PLG：A降低为21%，其4名家庭成员的PLG：A降低至50%左右；先证者2及2名家庭成员的PLG：A降低至50%左右；2例先证者及其家系成员的PLG：Ag和其余检测指标均基本正常。通过基因分析发现，先证者1的PLG基因第15号外显子存在c.1858G>A纯合错义突变，先证者1的4名家系成员和先证者2及其2名家系成员的PLG基因第15号外显子存在c.1858G>A杂合错义突变，导致纤溶酶原的第620位丙氨酸突变为苏氨酸（p.Ala620Thr）。结论:PLG：A水平降低与PLG基因p.Ala620Thr错义突变有关，先证者出现脑梗死可能与p.Ala620Thr错义突变导致机体纤维蛋白溶解功能受抑制有关。

目的:对一个遗传性抗凝血酶（AT）与凝血因子Ⅶ（FⅦ）联合缺陷症家系进行临床特征和基因突变分析，探讨 AT基因和 F7基因突变与疾病发生的关系。 方法:家系调查。收集2018年11月来温州医科大学附属第一医院就诊的先证者及其家系成员血液和临床资料（共3代16人），检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、抗凝血酶活性（AT：A）、抗凝血酶抗原（AT：Ag）、蛋白C活性（PC：A）、蛋白S活性（PS：A）、FⅦ活性（FⅦ：C）及FⅦ抗原（FⅦ：Ag）等指标以明确诊断。提取先证者及其家系成员外周血基因组DNA，用DNA直接测序法分析 AT基因和 F7基因全部外显子、侧翼及5′、3′非编码区，寻找基因异常位点，并通过克隆测序及反向测序进行验证。 结果:先证者（Ⅱ 6）AT：A和AT：Ag明显下降，分别为46%和135 mg/L（参考范围为250~360 mg/L）；其家庭部分成员（父亲Ⅰ 2、小姑Ⅰ 4、堂姐Ⅱ 1、表姐Ⅱ 3、小弟弟Ⅱ 8、侄子Ⅲ 3）AT：A和AT：Ag均降低至正常人的50%左右；其父亲（Ⅰ 2）、小姑（Ⅰ 4）、大弟弟（Ⅱ 7）、小弟弟（Ⅱ 8）、侄子（Ⅲ 3）FⅦ：C分别为45%、50%、48%、47%和48%，而FⅦ：Ag正常。基因分析显示先证者（Ⅱ 6）及其家庭部分成员（父亲Ⅰ 2、小姑Ⅰ 4、堂姐Ⅱ 1、表姐Ⅱ 3、小弟弟Ⅱ 7、侄子Ⅲ 3）AT基因5′非编码区存在rs3138521多态性；其父亲（Ⅰ 2）、小姑（Ⅰ 4）、大弟弟（Ⅱ 7）、小弟弟（Ⅱ 8）、侄子（Ⅲ 3）均存在 F7基因8号外显子c.1091G>A杂合错义突变，导致p.Arg304Gln。 结论:抗凝血酶与凝血因子Ⅶ分别存在rs3138521多态性和c.1091G>A杂合错义突变，可能是导致该家系成员AT与FⅦ联合缺陷的分子机制。

患儿:男，10岁，因“胸痛伴发热、吐血3 d”就诊于山东大学齐鲁儿童医院呼吸介入科，经过胸部查体、胸部CT、肺动脉造影、数字减影血管造影术、抗凝血酶活性检测、外显子组基因测序等检查，诊断肺动脉栓塞（双侧），家族性易栓症。临床上以胸痛、发热、气促为主要表现的肺栓塞患儿，不能以感染等常见原因解释的，需重点问询家族史，警惕家族性易栓症可能，应尽早基因检测，早诊断、早治疗对改善预后、减少并发症及病死率至关重要。

目的:对1例遗传性抗凝血酶缺陷症患者及其家系进行临床表型和基因型分析，探讨其分子发病机制。方法:应用PCR扩增抗凝血酶基因的所有外显子及其侧翼序列，扩增产物纯化后直接测序分析，寻找基因变异位点并排除基因多态性。采用生物信息学软件(mutation taster)预测变异的致病概率。结果:先证者与其父亲各凝血指标正常，而抗凝血酶活性及抗原含量明显下降，分别是34%、48%和12.97 mg/dL、15.60 mg/dL；母亲均正常。测序结果显示先证者及父亲 AT基因存在g.2736dupT杂合变异。生物信息学软件预测该变异为致病性变异。 结论:该家系先证者及其父亲是 AT g．2736dupT变异所致的Ⅰ型遗传性抗凝血酶缺陷症，该变异为尚未报道过的新变异。

目的 对1例妊娠合并遗传性抗凝血酶(AT)缺陷症患者进行基因检测和分析.方法 收集患者的临床资料,检测其血浆抗凝血酶活性(AT:A)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fib)、D-二聚体(DD)、纤维蛋白原降解产物(FDP)、蛋白C活性(PC:A)、蛋白S活性(PS:A)等凝血指标.对患者的PROC、PROS1、SERPINC1、SERPIND1、PLG、PROCR、THBD、ADAMTS13、HRG、TFPI、CPB2、HABP2、PLAT、PLAU、SERPINA10、SERPINE1、SERPINF2、CALR、GP6、JAK2、MPL和凝血因子相关基因的转录起始点、5'-非翻译区(UTR)、编码区、剪切点8 bp内含子序列区域、转录终止子点突变、小缺失/重复和剪切位点进行突变检测.采用Sanger测序验证变异位点.对变异位点进行生物信息学分析,以明确致病性.结果 患者AT:A降低.基因检测结果显示,患者SERPINC1基因第2号外显子发生c.380G＞A(p.Cys127Tyr)杂合突变,JAK2基因第10号外显子发生c.1324G＞C(p.Glu442Gln)杂合突变,SERPINA10基因第2号外显子发生c.389T＞G(p.Leu130Trp)杂合突变.SERPINC1基因c.380G＞A(p.Cys127Tyr)变异在正常人群公共SNP数据库(ExAC数据库、1000G dbSNP13数据库和gnomAD数据库)中未被收录,ClinVar数据库、OMIM数据库和HGMD数据库中均未见该变异位点的相关报道,PolyPhen-2、MutationTaster和CADD在线软件预测其为致病性变异.JAK2基因c.1324G＞C(p.Glu442Gln)变异和SERPINA10基因c.389T＞G(p.Leu130Trp)评级均为意义不明确的变异.Sanger测序结果显示3个变异均存在.蛋白模拟结构分析结果显示,SERPINC1基因c.380G＞A(p.Cys127Tyr)变异可导致蛋白结构改变,从而影响蛋白功能.结论 SERPINC1基因c.380G＞A(p.Cys127Tyr)变异可能导致遗传性AT缺陷症.监测凝血相关指标,及时进行分子诊断,有助于改善遗传性AT患者的妊娠结局.

目的:初步探究滇鸡血藤水煎液活血功效的生物评价方法并挖掘参与凝血酶抑制的核心成分.方法:采用体外凝血酶活性抑制试验,评价滇鸡血藤水煎液体外凝血酶抑制活性.然后利用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)挖掘滇鸡血藤水煎液中的化学成分,并通过分子对接技术对这些化学成分的生物活性进行评估,筛选核心抗凝成分.结果:凝血酶抑制试验表明滇鸡血藤的标准煎剂(0.2 g·mL-1)具有高达78.40％的凝血酶抑制率,并从滇鸡血藤水煎液中推测鉴定了14个化合物,将其与凝血酶进行分子对接评价:戈米辛C(-7.9 kcal·mol-1)、戈米辛G(-7.6 kcal·mol-1)、内南五味子素C(-8.1 kcal·mol-1)、内南五味子素D(-9.4 kcal·mol-1)、阿里山五味子灵C(-9.4 kcal·mol-1)、五味子素C(-7.9 kcal·mol-1)、五味子素A(-7.3 kcal·mol-1)、异型南五味子素E(-8.2 kcal·mol-1)、五味子酯D(-8.6 kcal·mol-1)、红花五味子素(-7.4 kcal·mol-1)、内南五味子酯B(-7.6 kcal·mol-1)、内南五味子酯A(-8.1 kcal·mol-1)、乙酰基氧代南五味子烷(-8.5 kcal·mol-1)、内南五味子酯D(-9.2 kcal·mol-1).其中内南五味子素D和阿里山五味子灵C与凝血酶蛋白具有紧密结合的空间构型以及理想的结合能.结论:滇鸡血藤水煎液具有较好的凝血酶抑制活性,筛选出的2个具有凝血酶抑制活性的核心成分,可作为其质量标志物候选成分,为滇鸡血藤水煎液生物活性评价方法的建立和质控研究提供了参考依据.

目的 调查复合杂合突变导致遗传性蛋白C缺陷症家系的临床特征与基因突变情况,并分析其基因型与临床表型的关系.方法 采集先证者及其家系成员(3代5人)外周静脉血,检测蛋白C活性、蛋白S活性和抗凝血酶活性等指标以明确表型诊断.采用PCR对先证者PROC基因所有外显子及侧翼序列进行扩增,PCR产物纯化后进行直接测序.运用ClustalX-2.1-win软件分析突变的保守性;使用在线生物信息学软件预测突变的致病性.结果 家系中有 4 人存在遗传性蛋白C缺陷症,先证者临床表现为肺栓塞和下肢深静脉血栓栓塞,其他家系成员无明显的血栓形成事件表现.基因测序发现先证者PROC基因第7 号外显子存在 c.541T＞G 杂合错义突变(p.Phe181Val)和 c.577-579delAAG 杂合缺失突变(p.Lys192deletion),其父亲为c.541T＞G突变杂合子,母亲和妹妹为c.577-579delAAG突变杂合子.保守性分析显示Phe181 和Lys192 在同源物种间均高度保守,生物信息学软件预测该 2 个突变位点均为有害突变.结论 该遗传性蛋白C缺陷症家系存在c.541T＞G杂合错义突变和c.577-579delAAG杂合缺失突变,该复合杂合突变可能引起先证者蛋白C活性明显降低,从而导致反复深静脉血栓栓塞和肺栓塞.

50 d实验期内,比较红光(610±10)nm、蓝光(450±10)nm、白光(全光谱)和自然光(full spectrum)对30日龄蚂蟥生长和内在品质的影响.结果表明:30 ～40日龄期间,蓝光对蚂蟥的促生长作用最强,红光组和白光组在50 d后表现出明显的促进蚂蟥生长的优势,红光和白光最终质量显著高于蓝光和自然光(P＜0.05);红光下蚂蟥特定生长率(SGR)、增重率、消化酶活力均高于其他各组(P＜0.05);白光下蚂蟥SOD,CAT,ALP酶活性最高,与其他各组相比有显著差异(P＜0.05);不同光质对蚂蟥水分、总灰分、酸不溶性灰分、pH和抗凝血酶活性影响不显著.蚂蟥50日龄后,红光下消化酶活性最高且生长最快,白光下抗逆酶活性最高,光质对蚂蟥内在品质无显著影响.

目的 通过对反复胚胎种植失败(RIF)患者易栓症标志物进行筛查,评估其发病规律及高危因子,提供有效的预防及治疗方案. 方法 应用测序技术、血液凝固法、发色底物法及酶联免疫吸附法检测90例RIF患者(病例组)及90例首次胚胎移植即成功妊娠的不孕症患者(对照组)血浆中亚甲基四氢叶酸还原酶多态性(MTHFR C677T)、蛋白S活性、蛋白C活性、抗凝血酶(ATⅢ)活性、抗心磷脂抗体(ACL-IgG/IgM)、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(抗β2 GPI)的变化. 结果 MTHFRC677T位点T/T基因型在病例组显著高于对照组(43.3％ vs.23.3％,P＜0.05),Cramer V相关系数为0.574(P＜0.05);病例组与对照组ACL IgG/IgM阳性率、抗β2 GPI阳性率、蛋白S活性、蛋白C活性、抗凝血酶活性均无显著差异(P＞0.05).结论 MTHFR C677T位点T/T基因型可能与RIF的发生有关,可作为本地区IVF患者的易栓症筛查指标.

目的 探讨荭草苷和木犀草素对人红细胞自然老化的保护作用及构效关系.方法 采用健康成年人去白细胞抗凝血制成红细胞悬浮液,建立自然老化模型.测定红细胞溶血度,抗氧化酶系及腺苷三磷酸酶(ATPase)活性,丙二醛(MDA)浓度.通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分析损伤红细胞膜蛋白变化,采用扫描电镜和透射电镜观察红细胞形态及红细胞膜骨架超微结构.结果 荭草苷、木犀草素均能较显著抑制红细胞溶血,保护抗氧化酶活性及ATPase活性,同时荭草苷、木犀草素还能显著降低MDA含量(P＜0.05,P＜0.01),对红细胞膜蛋白具有保护作用,明显改善红细胞形态及超微结构.结论 荭草苷和木犀草素对人红细胞自然老化的保护作用是通过直接对抗氧自由基损伤和保护抗氧化酶系活性及红细胞结构功能的完整性而实现的.