目的:利用MLPA技术结合熔解曲线法建立一种能鉴别山药及其常见混伪品的新方法.方法:以山药、参薯、木薯、番薯为研究对象,针对四个物种的matK序列分别设计MLPA特异性探针,通过DNA变性、杂交、连接、扩增及熔解反应等步骤,建立MLPA-熔解曲线鉴别体系,利用各样品熔解曲线中特异性峰(Tm值)的差异实现不同物种的鉴定.结果:27份样品中,山药Tm值为78.3 ℃,参薯Tm值为79.9℃,木薯Tm值为81.2℃,番薯Tm值为82.9℃,且相互之间没有交叉干扰.该法对山药、参薯、木薯、番薯各自单独的最低检测限为0.1 ng/μL;对相互混淆掺伪的最低有效检出率为5％.27份样品的检测结果均与测序结果一致.结论:MLPA技术结合熔解曲线法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,具有进一步推广应用的潜力.

目的 基于高效液相色谱四极杆飞行时间质谱(high performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS)联用技术结合化学计量学建立姜半夏和姜水半夏的鉴定方法.方法 采用 Agilent Poroshell 120 SB-C18(2.1×150mm,2.7μm)色谱柱,以甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相,0.3 mL/min流速梯度洗脱.电喷雾离子化源、QTOF作为检测器,正离子模式检测.Profinder软件进行特征化合物提取.将Profinder软件导出的数据以PFA格式导入安捷伦代谢组学统计分析软件(mass profiler professional,MPP).通过MPP软件的主成分分析,查找姜半夏和姜水半夏之间有显著性变化的化合物,以偏最小二乘法建立姜半夏真伪鉴别预测模型,预测样品的掺伪.结果 筛选得到姜水半夏特有化合物 237个,姜半夏特有化合物 242 个.建立了姜半夏真伪鉴别模型,在掺入一定比例姜水半夏时,模型能预测样品偏离,具有一定的预测性.结论 该方法可为判别姜半夏的掺伪提供参考依据.

目的:研究建立酸枣仁三维荧光光谱鉴别方法,为酸枣仁真伪鉴别提供依据.方法:建立6批不同产地酸枣仁三维荧光光谱,并利用三维荧光技术对2批酸枣仁伪品、3批掺伪品鉴别分析,采用荧光区域积分法对不同产地酸枣仁、酸枣仁伪品及掺伪品三维荧光图谱进行区域积分,将区域积分值进行相似度评价、聚类分析和主成分分析.结果:相似度结果显示,不同产地酸枣仁三维荧光图谱相似性均为1,相似性极高;聚类结果与主成分分析结果一致,明确将样品分为3类,均能通过区域积分值实现酸枣仁正品、伪品、掺伪品的区分.结论:利用三维荧光技术可以对不同产地酸枣仁质量进行一致性评价,实现酸枣仁真伪的快速鉴别,为酸枣仁的质量评价提供参考.

目的 建立蛤蚧定喘丸中醋鳖甲的DNA分子鉴定方法.方法 根据鳖、佛罗里达鳖线粒体基因序列的差异设计特异性引物TS和AF,进行荧光定量PCR和方法学考察,然后对市售蛤蚧定喘丸中醋鳖甲进行鉴定.结果 含有鳖、佛罗里达鳖的 DNA 样品仅与相应引物扩增后可检测到荧光信号,有特定温度单一峰,Tm 分别为 77.45、79.72℃.该方法的检测限为 10 copies/μL,重复性较高(CV<1%).10 批蛤蚧定喘丸中有 9 批仅检出鳖DNA,被鉴定为正品;1 批同时检出鳖DNA和佛罗里达鳖DNA,被鉴定为掺伪品.结论 本研究所建立的方法可快速、可靠地鉴定蛤蚧定喘丸中醋鳖甲炮制品成分,有助于监管含醋鳖甲成方制剂的质量,并为成方制剂中动物药成分的专属性鉴定研究提供新途径.

目的 建立测定酸枣仁和理枣仁中6'''-芥子酰斯皮诺素含量的高效液相色谱法(HPLC),以鉴别酸枣仁中掺伪理枣仁.方法 2020年12月至2022年12月,采用HPLC法,选用Agela Venusil ASB C18柱(4.6 mm×200 mm,5μm);以乙腈-0.2％冰醋酸水溶液为流动相梯度洗脱,对酸枣仁及理枣仁中6'''-芥子酰斯皮诺素的含量进行分析测定;检测波长:335 nm;体积流量:1.0 mL/min,柱温为30℃.结果 6'''-芥子酰斯皮诺素在2.32～138.96μg/L(r=1)内呈良好的线性关系.理枣仁平均加样回收率为97.5％,相对标准偏差(RSD)为1.5％.酸枣仁平均加样回收率为97.8％,RSD为1.7％.6'''-芥子酰斯皮诺素在酸枣仁中含量范围为0.0033％～0.0051％,在理枣仁中含量范围为0.0506％～0.0660％.结论 建立的6'''-芥子酰斯皮诺素HPLC含量测定分析方法灵敏度高、专属性强、重现性好,可用于酸枣仁中掺伪理枣仁的鉴别研究.

目的 建立通宣理肺颗粒中紫苏叶挥发油掺伪桂皮油的高效液相色谱(HPLC)检查方法.方法 通过收集通宣理肺颗粒挥发油富集挥发性成分,并采用HPLC测定通宣理肺颗粒中桂皮醛.以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-水(35∶65);检测波长:290nm;柱温:35℃;流速:1.0ml/min;进样量:10μl.结果 97批次(83个生产批号,10家生产企业)通宣理肺颗粒中有42批次(41个生产批号,2家生产企业)检出桂皮醛.结论 此法对通宣理肺颗粒中掺伪桂皮醛有鉴别作用,方法专属性强,重复性好,为监管该中成药的质量起到了一定作用.

目的:建立一种能同时鉴别全蝎(东亚钳蝎)及其混伪品细尖狼蝎的有效方法.方法:基于东亚钳蝎和细尖狼蝎的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CO Ⅰ)基因差异,设计区分东亚钳蝎、细尖狼蝎的特异性引物,建立多重PCR方法,并对退火温度、引物浓度、循环次数、DNA模板用量等条件进行优化筛选.对不同来源的东亚钳蝎和细尖狼蝎样品进行实测验证,根据特异性条带大小进行鉴别.结果:当退火温度为51.6℃,循环次数为30,DNA模板用量为30 ng时,东亚钳蝎和细尖狼蝎分别出现约342 bp和108 bp的特异性条带.结论:该方法可以实现东亚钳蝎、细尖狼蝎及掺杂样品的快速而又准确地鉴别,并可弥补传统鉴别方法的不足.

目的 建立酸枣仁及常见伪品理枣仁的鉴别方法,为酸枣仁的质量控制和市场监督提供依据.方法 对酸枣仁和理枣仁进行性状及显微鉴别,采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定其中 6'''-芥子酰斯皮诺素的含量,色谱柱为Phenomenex C18 柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相为 0.1%甲酸-10 mmol/L甲酸铵水溶液-甲醇(梯度洗脱),流速为 0.2 mL/min,柱温为30℃,进样量为 5μL,离子源为电喷雾离子源,正离子、多反应监测模式扫描,电喷雾电压为 3.5 kV,离子源温度为 150℃,去溶剂气温度为 500℃,扫描范围为 50～1 000 amu.结果 酸枣仁和理枣仁在性状上外种皮纹理存在差异,在显微特征上外种皮栅状细胞、种皮内表皮细胞存在差异.6'''-芥子酰斯皮诺素的质量浓度在 0.205 2～6.156μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好(r = 0.997 5,n = 6),检测限为 21.13 pg.酸枣仁和理枣仁样品的精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均低于 3.0%(n = 6);加样回收率分别为 97.01%和 97.80%,RSD分别为 2.15%和 2.09%(n = 6).10 批酸枣仁和理枣仁中 6'''-芥子酰斯皮诺素的含量分别为0.23,3.70μg/mL.拟订酸枣仁中掺伪理枣仁限度为 5%,样品中 6'''-芥子酰斯皮诺素测得含量大于 0.5μg/mL时可视为掺伪理枣仁.结论 所建立的方法操作简便、结果准确、重复性和稳定性均良好,可有效鉴别酸枣仁和理枣仁.

[目的]利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP),建立快速鉴别大蓟混伪品飞廉和魁蓟的方法.[方法]通过比对ITS基因序列,分别筛选飞廉、魁蓟的限制性内切酶位点并设计鉴别引物.考察PCR反应的退火温度、循环数及不同酶的适用性,对酶切反应时间和酶切底物量进行优化.同时对该方法适应性及掺伪比例的专属性、稳定性进行考察.[结果]当退火温度为 58～60℃、循环数为 30 个时,样品均能扩增出一条 379 bp的DNA条带.底物为 8 μL、酶切温度为37℃、酶切反应 120 min时,ZraI酶将飞廉切割成 120 bp和 259 bp两条DNA条带;DNA底物为 8 μL、酶切温度为 37℃、酶切反应 60 min时,ApaLI酶将魁蓟切割成 126 bp和 253 bp两条DNA条带.[结论]试验建立的PCR-RFLP方法能够准确地鉴别大蓟混伪品飞廉、魁蓟,避免此类药材的混用,以保证临床用药安全.

目的 评价香砂养胃丸(水丸、浓缩丸、大蜜丸)的整体质量.方法 采用超高效液相色谱(UPLC)法,色谱柱为Acquity UPLC? HSS T3 柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为 0.3 mL/min,检测波长为 275 nm(0～13 min)、284 nm(13～25 min)、254 nm(25～35 min)、225 nm(35～60 min),柱温为 30℃,进样量为 2μL.建立 46 家生产企业香砂养胃丸(水丸、浓缩丸、大蜜丸)样品的UPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012 版)软件进行相似度评价,并对市售55 批样品进行木香掺伪检查.结果 46 家生产企业样品UPLC指纹图谱,水丸和大蜜丸分别确定 23 个共有峰,浓缩丸确定 21 个共有峰.共指认 11 个成分,分别为紫丁香苷、维采宁Ⅱ、甘草苷、芸香柚皮苷、橙皮苷、甘草酸铵、川陈皮素、和厚朴酚、木香烃内酯、去氢木香内酯、厚朴酚.浓缩丸的相似度与水丸和大蜜丸相比更低,相似度低于 0.90 的水丸样品占 8.57%,浓缩丸占 55.56%,大蜜丸样品占 50.00%.55 批样品均未混用藏木香或土木香;4 批水丸和 2 批浓缩丸(涉及 6 个厂家)的木香烃内酯与去氢木香内酯峰面积比值低于 0.6,可能混有川木香.结论 所建立的UPLC指纹图谱,能同时鉴别木香及其易混品,可用于香砂养胃丸的质量控制.