目的:通过在单细胞水平分析小鼠磨牙细胞间异质性，构建牙髓细胞发育的时空图谱，进一步揭示牙齿发育的过程和调控机制。方法:分别收集出生后0、3 d的C57BL/6小鼠下颌第一磨牙各10颗，制备单细胞悬液，采用单细胞转录组测序（single-cell RNA sequencing，scRNA-seq）技术进行测序。从本课题组前期研究中提取出生后7 d小鼠磨牙scRNA-seq数据，与0、3 d数据进行合并分析。使用Seurat程序对测序数据进行质控、标准化、降维和聚类分析；Monocle程序进行拟时序分析，预测发育轨迹；Scillus程序进行基因本体分析，对细胞功能进行注释。使用原位杂交技术对标记基因进行体内定位，明确不同亚群细胞的体内分布和时空变化。结果:Seurat分析显示小鼠磨牙细胞具有26个细胞亚群，可分为牙髓细胞、牙囊细胞、上皮细胞、免疫细胞、内皮细胞、管周细胞、胶质细胞和红细胞等八大类细胞，其中牙髓细胞包含5个亚群：成熟牙髓细胞，标记基因为柯萨奇病毒腺病毒受体（coxsackie virus and adenovirus receptor，Cxadr）；牙乳头细胞，标记基因为SPARC相关模块化钙结合蛋白2（SPARC related modular calcium binding 2，Smoc2）；周期细胞，标记基因为Ⅱ型DNA拓扑异构酶（DNA topoisomerase Ⅱ alpha，Top2a）；前成牙本质细胞，标记基因为棕榈酰蛋白羧酸酯酶（notum palmitoleoyl-protein carboxylesterase，Notum）；成牙本质细胞，标记基因为牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，Dspp）。随着牙胚发育，成熟牙髓细胞的比例逐渐增加，周期细胞和成牙本质细胞比例逐渐降低。原位杂交染色和基因本体分析结果显示，Cxadr+成熟牙髓细胞定位于牙冠上部，主要功能为成骨和“细胞外结构组织”；Smoc2+牙乳头细胞位于根尖，主要功能与“细胞外结构组织”和器官发育相关；Top2a+周期细胞位于牙冠下部，进行有丝分裂；Notum+前成牙本质细胞邻近上皮根鞘，和Dspp+成牙本质细胞的主要功能同为生物矿化。Monocle分析显示牙髓细胞有2条发育轨迹，从Smoc2+牙乳头细胞起始，经过Top2a+周期细胞，再分化为Cxadr+成熟牙髓细胞或成牙本质细胞。结论:scRNA-seq技术能在转录组水平充分揭示细胞间的异质性，为研究器官发育过程和调控机制提供了有力工具。

目的:探讨柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackievirus-adenovirus receptor，CAR)在胸腺癌中的表达和溶瘤腺病毒H101抗肿瘤活性之间的关系及其机制研究。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测胸腺癌组织和细胞中CAR的基因和蛋白质表达量。H101病毒感染Bcap-37、MP59和T1889细胞后，RT-qPCR和半数组织培养感染量(TCID 50)法检测细胞中H101的表达及上清中病毒滴度。不同感染复数(MOI)H101感染T1889细胞后，CCK-8法检测各组细胞的增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡率。不同浓度组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(Trichostatin A，TSA)处理T1889细胞后检测细胞中CAR的表达量；TSA处理细胞后，感染H101，检测细胞中H101的表达量及病毒滴度，CCK-8法检测细胞活性；TSA处理或TSA＋ERK激活剂TBHQ处理细胞后检测T1889细胞中MARK、ERK1/2的磷酸化水平和CAR的蛋白质表达量。 结果:与癌旁正常组织相比，胸腺癌组织中CAR的基因和蛋白质表达量均显著降低( P<0.01)；胸腺癌MP59细胞和T1889细胞中CAR表达量明显低于胸腺上皮细胞(TEC)和Bcap-37细胞( P<0.01)，H101表达量及上清中H101滴度明显低于Bcap-37细胞( P<0.01)；H101感染细胞48 h后，MP59和T1889细胞活性与Bcap-37细胞相比明显升高，细胞凋亡率明显下降( P<0.01)。不同浓度TSA处理后，T1889细胞中CAR基因和蛋白质水平呈剂量依赖性升高。0.25 μmol/L TSA处理T1889细胞后，H101基因表达量和病毒滴度明显升高( P<0.05)，MAPK和ERK1/2蛋白的磷酸化水平不断下降，CAR表达不断升高；和TSA处理组相比，TSA＋TBHQ处理组细胞内CAR蛋白质表达量明显下降( P<0.01)，p-ERK1/2/ERK1/2比值明显升高( P<0.01)。 结论:TSA通过抑制MARK/ERK1/2通路上调CAR在胸腺癌中的表达，从而增强H101的抗肿瘤活性。

本文报道一对先天性短肠综合征（congenital short-bowel syndrome，CSBS）合并肠旋转不良的姐弟。病例1出生体重2 550 g，身长48 cm，2017年9月10日生后23 d因肠梗阻于厦门大学附属妇女儿童医院急诊行“Ladd's术及阑尾切除术”，小肠全长65 cm，术后予肠内、外联合营养支持6个月。全外显子组测序提示 CLMP基因（chr11：122953792-122955421）纯合变异（NM 024769；核酸缺失外显子3～5），父母均无相关表型且均为杂合携带。病例2为病例1之弟，2020年3月20日在本院出生，出生体重2 932 g，身长49 cm；产前羊水单基因测序检出与姐姐一致的基因变异。生后第2天行“Ladd's术及阑尾切除术”，小肠51 cm。术后6个月实现肠内营养。分别随访至12个月，病例1体重和身高均< P1，病例2体重8.03 kg（ P3～ P5），身高76.0 cm（ P25～ P50）。

目的 探讨癌胚抗原相关黏附分子1(CEACAM1或CC1)对柯萨奇病毒(CVB3)感染后柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)表达和继发心肌损伤的影响.方法 构建过表达小鼠CC1重组病毒,包装重组慢病毒pLVXCEACAM 1-ZsGreen-Puro(rLV-CEACAM 1)并测定慢病毒生物学滴度.分为CC1正常组、CC1过表达组、CC1正常+CVB3组和CC1过表达+CVB3组;各组使用AnnxinV-PE/7-AAD双染法检测心肌细胞凋亡率,CCK8检测细胞活性;qPCR检测CAR基因表达;Western blot检测CAR蛋白表达,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素1β(IL-1[β)水平.结果 (1)CEACAM1重组载体测序提示目的基因序列连接,证明小鼠CEACAM1重组病毒载体构建成功,测定重组慢病毒滴度为1.5×10u TU/L.(2)Co过表达+CVB3组较其他组心肌细胞凋亡率明显升高,心肌细胞增殖最低(P＜0.05).(3) CAR基因相对表达量在CC1过表达+CVB3组最高,而在CC1正常组最低,CAR蛋白表达也有类似结果;CC1过表达组较CC1正常组胞内CVB3相对表达量显著升高(P＜0.05).(4)CC1过表达组INF-α、IL-1β水平较高,CVB3感染后较前明显升高.结论 CC1可能可以促进CVB3感染心肌细胞后心肌组织或细胞上CAR的表达,CAR可能是CC1调控CVB3感染心肌致心肌损伤过程的潜在作用靶点.

目的 检测柯萨奇病毒抗体、自身抗体及心肌酶谱,并探讨其与扩张型心肌病的相关性.方法 将宝鸡市中医医院2016年1月至2018年10月收治的89例扩张型心肌病患者作为观察组,另选择同期在我院体检的46例健康志愿者作为对照组.检测并比较两组受检者的柯萨奇病毒抗体、自身抗体表达[包括抗β1肾上腺素能受体自身抗体(ant-β1)、抗肌球蛋白重链自身抗体(ant-MHC)、抗毒蕈碱2受体自身抗体(ant-M2)、抗腺嘌呤核苷酸(ADP/ATP)转位酶(ANT)自身抗体(ant-ANT)]及心肌酶谱水平[包括肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和α-羟丁酸脱氢酶(a-HBDH)].按NYHA心功能分级将观察组患者分为NYHA Ⅰ～Ⅱ级组(34例),NYHAⅢ～Ⅳ级组(55例),检测并比较两组患者的柯萨奇病毒抗体、抗心肌自身抗体表达以及心肌酶谱水平.结果 观察组患者的Cox-IgM阳性率为34.83％,明显高于对照组的8.70％,其ant-β1、ant-MHC、ant-M2、ant-ANT水平分别为(67.46±14.71)μg/L、(33.74±11.62)μg/L、(56.44±8.23) μg/L、(153.54±34.18)μg/L,均明显高于对照组的(48.78±10.03) μg/L、(21.58±9.51)μg/L、(30.11±6.21)μg/L、(67.59±19.43) μg/L,差异均有统计学意义(P＜0.05);观察组患者的CK、CK-MB、AST和α-HBDH水平分别为(166.81 ±30.44) U/L、(26.74±4.18) U/L、(38.57±8.28) U/L、(175.36±41.28)U/L,均明显高于对照组的(103.46±23.15) U/L、(15.53±3.46) U/L、(22.69±7.44) U/L、(128.54±29.45)U/L,差异均有统计学意义(P＜0.05);NYHAⅢ～Ⅳ级组患者的CoxB-IgM阳性率为43.64％,明显高于Ⅰ～Ⅱ级组的20.59％,其ant-β1,ant-MHC,ant-M2,ant-ANT水平分别为(70.48±17.15) μg/L、(36.58±14.19) μg/L、(61.25±9.68) μg/L、(176.54±40.29) μg/L,也均明显高于Ⅰ～Ⅱ级组的(62.55±13.03)μg/L、(30.66±10.53)μg/L、(52.18±7.69) μg/L、(143.58±26.43) μg/L,差异均有统计学意义(P＜0.05);NYHⅢ～Ⅳ级组的CK、CK-MB、AST和α-HBDH水平分别为(213.54±36.13)U/L、(21.64±5.22) U/L、(41.54±9.03)U/L、(192.25±49.27)U/L,均明显高于Ⅰ～Ⅱ级组的(174.98±24.49) U/L、(16.28±3.23)U/L、(33.39±7.16)U/L、(157.64±33.03) U/L,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 柯萨奇病毒抗体、自身抗体的表达与扩张型心肌病的发生、发展存在相关性.检测柯萨奇病毒抗体、自身抗体表达及心肌酶谱有助于扩张型心肌病的临床诊断.

目的 对儿童急性间质性肺炎(acute interstitial pneumonia,AIP)肺组织行致病病原体鉴定,以明确儿童AIP致病原因.方法 回顾性分析2002年1月至2018年10月重庆医科大学法医学教研室(重庆法医验伤所)儿童间质性肺炎的尸体解剖资料并筛选样本;参照美国胸科协会/欧洲呼吸学会发表的临床-影像-病理诊断标准确诊为AIP的20例患儿作为AIP组;非肺部疾病意外死亡的13例儿童作为对照组.通过免疫组化方法对两组肺组织分别进行呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、柯萨奇-腺病毒(coxsackie and adenovirus,CAV)、A型流感病毒、B型流感病毒、肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,CMP)和Toll-2受体抗体检测,并进行统计学分析.结果 AIP组抗体阳性例数如下:RSV 10例,CAV 7例,A型流感病毒1例,B型流感病毒2例,TLR2 2例,CMP 1例.对照组中RSV 1例、CAV病毒2例、TLR2 2例、A型流感病毒1例、B型流感病毒1例;经统计学分析,两组RSV抗体阳性检出率有统计学意义(P＜0.05),其余病原体抗体检出率无统计学意义(P＞0.05).结论 呼吸道合胞病毒可能是儿童急性间质性肺炎的致病病原体.

目的 研究急性心肌梗死后房室传导阻滞(AVB)大鼠房室结区柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和缝隙连接蛋白(Cx)45定位和表达情况,了解缺血相关AVB的发生机制及房室结区的电生理特征.方法 选择SD大鼠,随机分为模型组(n=12)和假手术(SH)组(n=6).模型组根据AVB持续时间不同分为AVB 2 h组(n=6)和AVB 4 h组(n=6).结扎大鼠右冠状动脉建立AVB模型,分别于建模后2h和4h对模型组和SH组取材.对房室结区行连续切片,行免疫荧光标记检测CAR和Cx45的定位及表达情况.行Western blot定量分析各组房室结区CAR和Cx45蛋白的表达情况.结果 免疫荧光标记显示CAR和Cx45主要定位于房室结,模型组(AVB 2h和AVB 4h组)与SH组相比,CAR和Cx45表达增加.Western blot显示AVB 2 h组CAR和Cx45表达增加,与SH组相比,蛋白表达差异有统计学意义(P＜0.05);AVB 4 h组相比于SH组蛋白表达增多,但无统计学意义;CAR和Cx45蛋白表达相关性分析显示,CAR和Cx45的表达具有明显正相关(r=0.7030,P＜0.05).结论 急性心肌梗死后AVB早期大鼠房室结区CAR和Cx45表达增加,且CAR和Cx45的表达呈正相关.

目的 分析柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和基质金属酶(MMP)基因多态性与病毒性心肌炎(VMC)易感性的关系.方法 选择2016年11月-2019年11月于安阳市人民医院心血管内科诊治的VMC患者149例作为VMC组,选择同期体检的60名健康志愿者作为对照组,检测CAR-968G/A、MMP-2 C1306T和MMP-9 C1562T位点多态性,采用Logistic回归分析三者基因多态性与VMC的关系.结果 VMC组CAR-968G/A位点AA、AG、GG基因型及MMP-2 C1306T、MMP-9 C1562T位点CC、CT、TT基因型频率与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);VMC组CAR-968G/A位点A、G等位基因,MMP-2 C1306T位点C、T等位基因以及MMP-9 C1562T位点C、T等位基因频率与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);在隐性模式下,VMC组CAR-968G/A位点AA+AG基因型频率低于对照组(P＜0.05),GG基因型频率高于对照组(P＜0.05);在显性模式下,VMC组MMP-2 C1306T位点CC基因型频率高于对照组(P＜0.05),CT+TT基因型频率低于对照组(P＜0.05),VMC组MMP-9 C1562T位点CC基因型频率低于对照组(P＜0.05),CT+TT基因型频率高于对照组(P＜0.05);多因素 Logistic 回归分析显示,CAR-968G/A、MMP-2 C1306T、MMP-9 C1562T 基因多态性可增加VMC患病风险.结论 CAR-968G/A、MMP-2 C1306T、MMP-9 C1562T基因多态性可能与VMC易感性有关.

近年来,由于生活质量、饮食结构等因素的影响,消化道肿瘤发病率日渐升高且年轻化,研究消化道肿瘤发生、发展、迁移机制,如何尽早发现并有效治疗已成为目前研究的热点.紧密连接是上皮细胞之间或细胞-细胞之间的膜连接复合体,由紧密连接蛋白家族(claudins)、闭锁蛋白(occludin)、连接黏附分子(junc-tional adhesion molecule, JAM )和柯萨奇腺病毒受体(Coxsackie-adenovirus receptor,CAR)等多种蛋白分子构成,具有维持细胞极性、屏障保护、物质转运和信号传导功能.

目的 研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制.方法 CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3和白细胞介素1β(IL-1β)表达水平;ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量;Western blot法检测NLRP3蛋白的变化,免疫共沉淀(Co-IP)法检测NLRP3相互作用蛋白的表达.结果 CVB3刺激RAW264.7细胞、骨髓来源或腹腔巨噬细胞后,NLRP3和IL-1β表达明显升高;下调NLRP3后,IL-1β分泌明显减少;NLRP3抗体Co-IP所得复合物银染,组间差异蛋白经质谱分析鉴定为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2),证明CVB3诱导NADK2与NLRP3相互作用.结论 CVB3通过激活NADK2促进巨噬细胞NLRP3活化,增加炎症因子IL-1β表达和释放.