目的 采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对玉蝴蝶祛斑膏的中间体及单药味进行化学成分鉴定及综合分析,并对其化学成分进行药味归属,为建立玉蝴蝶祛斑膏特征图谱奠定基础.方法 以 phenomenex Luna Omega Polar C18(2.1 mm× 100 mm,1.6 μm)为色谱柱,以 0.2％乙酸水溶液为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱(0～1 min,12％～17％B;1～5 min,17％～28％B;5～10 min,28％～90％B;10～11 min,90％～100％B;11～14 min,100％B);检测波长为300 nm;柱温为25 ℃,流速为0.25 mL·min-1.并采用G6530C型Q-TOF-MS,质谱检测分别在正、负离子模式下进行,干燥气温度:350℃,干燥气流速:10 L·min-1,雾化气压力:35 psi,鞘气温度:350℃,鞘气流速:12L·min-1,毛细管电压:4000 V(正模式)和3500 V(负模式),一级质谱选用MS模式,质量扫描范围:100～1500 m/z.二级质谱选用Auto-MS/MS模式,质量扫描范围:100～1000 m/z,碰撞电压:10、15、20、30 eV.所得数据由Agilent MassHunter软件采集.数据处理采用Agilent软件Qualitative Navigator(B.08.00)和 Qualitative Workflows(B.08.00).对玉蝴蝶祛斑膏及单药味进行 UPLC-UV和UPLC-TOF-MS分析,在正负离子模式下采集数据.结果 在正负离子模式条件下共鉴定和推测出19个化合物,结合质谱碎片信息对各色谱峰进行指认和归属.其中5个化合物归属到柿叶,14个化合物归属到木蝴蝶,5个化合物归属到菟丝子;结合文献报道和对照品对比,鉴定出15个化合物,主要为黄酮类化合物,其中包括黄芩苷、木蝴蝶苷B、金丝桃苷、芹菜素等.结论 本研究比较全面地阐明了玉蝴蝶祛斑膏的化学组成,对玉蝴蝶祛斑膏的鉴别和质量评价研究有重要的参考价值.

目的 探讨柿叶黄酮(PLF)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的改善作用及机制.方法 将雄性SD大鼠采用高脂饮食喂养12周制备NAFLD大鼠模型.将建模成功的大鼠按随机数字表法分为模型组、水林佳组(28 mg/kg)、PLF组(200 mg/kg)及PLF+自噬抑制剂组(PLF+3-MA组,200 mg/kg PLF+2 mg/kg 3-MA),另取正常SD雄性大鼠为对照组,每组6只.给药6周后,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学改变;计算肝指数;采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST);微量法测定肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测肝组织核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、自噬蛋白Sequestosome-1/Protein 62(SQSTM-1/P62)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)的表达.结果 对照组大鼠肝细胞形态未见明显异常,模型组肝脏细胞出现脂肪空泡和炎症反应.与对照组相比,模型组大鼠的肝指数、TC、TG、LDL-C、ALT、AST以及MDA水平均升高,P62蛋白表达增加,HDL-C和SOD水平降低,Nrf2、LC3-Ⅱ蛋白表达降低(P＜0.05).与模型组相比,水林佳组、PLF组大鼠的脂肪空泡和炎症反应明显改善,肝指数、TC、TG、LDL-C、ALT、AST和MDA水平均降低,P62蛋白表达降低,SOD水平升高,Nrf2、LC3-Ⅱ蛋白表达升高(P＜0.05).而PLF+3-MA组对大鼠血脂水平、SOD和MDA指标以及标志性蛋白的改善作用均低于PLF组.结论 PLF可通过激活自噬与抗氧化应激的协同作用对NAFLD大鼠肝脏产生保护效应.

目的:鉴定柿叶提取物中黄酮类成分,从TLR4/NLRP3炎症信号通路和肠道菌群角度探究对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的作用机制.方法:利用HPLC法对柿叶(persimmon leaf,PL)提取物中5个黄酮类成分进行含量测定.采用3％葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)构建小鼠UC模型.每天记录小鼠体质量和饮水量.Elisa法检测血清IL-6,TNF-α,IL-1β,IL-10水平,HE染色观察结肠组织的变化,Western blot法检测结肠组织中TLR4,IL-1β,NF-κB p65和NLRP3蛋白的表达,16S rDNA扩增子测序法检测粪便中肠道菌群的变化.结果:与Control组相比,DSS组小鼠体质量、结肠长度、IL-10水平显著降低(P<0.01);疾病活动指数和IL-6,TNF-α,L-1β水平升高(P<0.01).与DSS组相比,给药组小鼠体质量下降缓慢,结肠长度延长,疾病活动指数降低;IL-6,TNF-α,IL-1β水平显著降低(P<0.01),IL-10水平显著升高(P<0.01);TLR4/NLRP3相关蛋白表达显著上升(P<0.01);PL给药组TLR4,IL-1β,NF-κB p65,NLRP3蛋白表达降低(P<0.01);16 S rDNA扩增子测序法结果显示鼠乳杆菌、约氏乳杆菌、罗姆布茨菌、艾克曼菌种均有增加的趋势.病理结果显示DSS组小鼠可见结肠组织有严重的黏膜溃疡、隐窝丧失、炎性细胞浸润和杯状细胞耗竭,给药后小鼠结肠组织病变得到改善.HPLC法分离度好、准确度高.结论:柿叶提取物对DSS诱导的UC小鼠肠道损伤有保护作用,可能与抑制TLR4/NLRP3炎症信号通路降低炎症反应从而改善肠道微环境有关.

目的 优化柿叶总黄酮固体分散体口腔崩解片处方.方法 在单因素试验基础上,以崩解剂(聚乙烯吡咯烷酮,PVPP)、填充剂Ⅰ(微晶纤维素,MCC)、填充剂Ⅱ(甘露醇)用量为影响因素,崩解时间为评价指标,星点设计-效应面法优化处方.结果 最佳处方为固体分散体60 mg,PVPP 238 mg/片,MCC 28 mg/片,甘露醇45 mg/片,阿斯巴甜7.5 mg/片,柠檬酸7.5 mg/片,少量硬脂酸镁补足片重至390 mg/片,崩解时间30.4 s.结论 该方法简单、稳定、可行,可用于柿叶总黄酮固体分散体口腔崩解片处方的优化.

本研究采用紫外-可见分光光度法测定了17个品种柿树(Diospyros kaki)叶中的总黄酮含量,并通过高效液相色谱法(HPLC)测定了异槲皮苷、芦丁、紫云英苷、槲皮素、山柰素和异鼠李素6种黄酮类物质的含量.结果显示,各品种间总黄酮含量差异显著,17个品种柿树的柿叶中总黄酮含量为24.47～43.00 mg·g-1 (DW).其中,‘油蒌头,、‘金柿,、‘晚御所,和‘湘西甜柿’含量最高,分别为43.00、41.17、41.57和42.32 mg·g-1(DW),无显著差异;‘八月黄’含量最低,为24.47 mg·g-1(DW).总黄酮含量与不同柿树类型(砧木、涩柿、不完全甜柿和完全甜柿)无明显相关性.HPLC分析结果显示,除‘鄂柿1号,外,其余16个品种的6种黄酮类物质,均以紫云英苷含量最高;异鼠李素仅在‘禅寺丸’叶片中被检测到,但含量较低,仅0.075mg·g-1(DW).本研究结果说明,17个柿树品种中,‘油蒌头’、‘金柿’、‘晚御所’、‘湘西甜柿’、‘上西早生,、‘鄂柿1号,、‘次郎’中黄酮含量较高,可用于柿叶茶的研制和加工.

目的:探讨大鼠心梗模型下柿叶提取物对心室重塑的影响及相关机制.方法:用24只Sprague Dawley大鼠结扎左冠状动脉前降支制作心肌梗死大鼠模型,随机分为心肌梗死组(n=8)、柿叶提取物组(n=8)、假手术组(n=8).6周后,用TUNEL法测定心肌细胞凋亡,免疫印迹法检测心肌Fas、Caspase-3蛋白含量,并测定大鼠血流动力学参数和左心室质量指数.结果:柿叶提取物组、心肌梗死组左心室质量指数分别为2.417±0.053、2.514±0.101(F=136.762,P=0.011),明显低于心肌梗死组;柿叶提取物组、心肌梗死组Fas分别是0.342±0.058、0.585±0.059(F=163.991,P=0.000);柿叶提取物组、心肌梗死组Caspase-3蛋白水平分别是0.124±0.019、0.478±0.079(F=183.553,P=0.000),明显低于心肌梗死组.柿叶提取物组、心肌梗死组心肌细胞凋亡指数分别是1.198±0.171、0.507±0.132(F=93.023,P=0.000),明显低于心肌梗死组.柿叶提取物组左心室舒张末期压(left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)明显降低(F=347.661,P=0.000),左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)明显增加(F=444.949,P=0.000).结论:心肌细胞凋亡参与心肌梗死后心室重塑过程,柿叶提取物可能通过减少凋亡相关蛋白表达抑制心肌细胞凋亡从而预防心室重塑,改善心肌梗死后心脏收缩功能.

研究发现柿叶主要含有黄酮、多酚类、萜类、醌类、香豆素等多种化学成分.药理研究表明其具有抗氧化、降血糖、抗菌抗炎、抗肿瘤等作用,具有预防治疗多种疾病的作用.柿叶资源丰富,是一种潜在的药用植物,但市场上柿叶相关药品较少.故本文通过对柿叶的药理作用、化学成分、临床应用、文献研究概况进行综述,以期为柿叶的研究开发提供参考.

目的 在体外氧糖剥夺/再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤模型中,研究柿叶黄酮提取物(flavonoid components extract from Diopyros Kaki,FLDK)对BV2小胶质细胞活化及炎症因子释放的抑制效应,并初步探讨其可能机制.方法 将BV2小胶质细胞随机分为3组:正常对照组(control组)、氧糖剥夺/再灌注组(OGD/R组)、柿叶黄酮提取物治疗组(OGD/R+FLDK组),以氧糖剥夺3h和再灌注24 h的方法建立OGD/R损伤模型.采用CCK-8法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测白介素-1α(IL-1α)、白介素-1β (IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子分泌,RT-PCR法检测Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)、骨髓样分化因子88 (myeloid differentiationfactor 88,MyD88)、核转录因子-κB (nuclear transcription factor-κB,NF-κB)的mRNA水平,Western blot法检测TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平及核转录因子-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB)磷酸化水平.结果 CCK-8及LDH法结果显示,FLDK可显著减轻OGD/R损伤介导的BV2细胞活性下降及细胞损伤率增加(P＜0.05);ELISA、RT-PCR及Western blot法结果显示,FLDK可显著降低OGD/R损伤介导的BV2小胶质细胞炎症因子释放,TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA及蛋白表达水平,IκB蛋白的磷酸化水平及NF-κB p65核易位(P＜0.05).结论 在体外OGD/R损伤模型中,柿叶黄酮提取物抑制BV2小胶质细胞活化及炎症因子释放发挥抗炎作用的机制可能是通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活实现的.

研究柿叶的化学成分.用柱色谱和重结晶法进行分离纯化,采用质谱、核磁共振等技术鉴定化学结构.从柿叶中分离得到了14个化合物,分别鉴定为常春藤皂苷元(Ⅰ)、积雪草酸(Ⅱ)、齐墩果酸(Ⅲ)、熊果酸(Ⅳ)、β-胡萝卜苷(V)、山柰酚(Ⅵ)、槲皮素(Ⅶ)、山柰酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅷ)、山柰酚3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(Ⅸ)、槲皮素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅹ)、槲皮素3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅺ)、芦丁(Ⅻ)、三油酸甘油酯(ⅩⅢ)和没食子酸(Ⅻ).化合物Ⅰ为首次从柿叶中分离得到,化合物Ⅱ和化合物ⅩⅢ均为首次从柿属植物中得到.

目的 研究柿叶醋酸乙酯提取物(EAEPL)对脂多糖(LPS)刺激的小胶质细胞(BV-2)的炎症因子及凋亡细胞的表达作用,探讨EAEPL对脑卒中的抗炎及抗细胞凋亡的作用.方法 采用LPS诱导的BV-2细胞作为体外神经炎症模型,用EAEPL进行干预;采用ELISA法检测白介素6(IL-6),白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量变化;采用Western blot法检测IL-6、IL-1β、TNF-α、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化-细胞外信号调节激酶(p-ERK)、凋亡基因Bax、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的蛋白表达水平.结果 LPS刺激BV-2细胞24 h之后,IL-6、IL-1β 和TNF-α 炎症因子细胞表达及蛋白表达水平明显升高(P<0.01,P<0.001),p-AKT、p-ERK蛋白表达水平明显降低(P<0.01,P<0.001),促凋亡蛋白Bax表达水平明显升高(P<0.001),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显降低(P<0.001);EAEPL预处理后,相对于模型组,炎症因子细胞表达水平降低,IL-1β 在10、20μg·mL-1时差异具有统计学意义(P<0.05),IL-6、TNF-α 在20μg·mL-1时差异具有统计学意义(P<0.05);炎症因子蛋白表达水平均明显下降(P<0.05,P<0.01);p-AKT、p-ERK蛋白表达水平升高,p-AKT在各浓度差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001);p-ERK在10、20μg·mL-1时差异具有统计学意义(P<0.01);Bax蛋白表达水平明显下降(P<0.05,P<0.01);Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001).结论 EAEPL可调节LPS刺激的BV-2的炎症因子表达和激活AKT/ERK通路,具有抗炎和抗细胞凋亡作用,进一步阐明了EAEPL抗脑卒中的作用机制.