DICER1基因编码的Dicer酶是核糖核酸酶（RNase）Ⅲ家族的成员，在转录后基因沉默中起关键作用。DICER1基因突变会导致DICER1综合征从而使机体易患各种良恶性肿瘤，主要为多结节性甲状腺肿、胸膜肺母细胞瘤、囊性肾瘤、卵巢支持-间质细胞细胞瘤、睫状体髓质上皮瘤、子宫颈胚胎型横纹肌肉瘤、分化型甲状腺癌等。其中涉及到多种甲状腺疾病，包括甲状腺腺瘤、甲状腺乳头状癌、甲状腺滤泡状癌、甲状腺低分化癌和甲状腺母细胞瘤。通过研究DICER1综合征中的甲状腺疾病的特征。为明确DICER1综合征中甲状腺疾病的潜在危害性，辅助疾病诊断和疾病管理，本文对DICER1综合征中的甲状腺疾病的临床表现、诊断、监测以及其与DICER1综合征的关系进行文献综述。

近年来在胸膜肺母细胞瘤、胚胎型横纹肌肉瘤、卵巢Sertoli-Leydig细胞瘤以及中枢神经系统肿瘤中发现有DICER1体系突变和胚系突变，虽然肿瘤发生的部位不同，但DICER1却有相同的突变位置。DICER1基因位于14q32.13，编码一种核糖核酸酶（RNaseⅢ），在胞质内将pre-miRNA加工为成熟的miRNA，miRNA作为一种保守的基因沉默系统的效应器，在转录后调控中发挥广泛的作用。DICER1处于miRNA介导的沉默和其他的RNA干扰现象的核心位置，已经深深嵌入了癌症基因网络中。本文将从DICER1的结构和功能、与DICER1突变相关肿瘤、DICER1的检测方法，以及DICER1突变个体的未来管理等方面进行综述，以增加对DICER1相关肿瘤的认识。

目的 了解核糖核酸酶RnaseⅢ rncS基因缺失对单核细胞增生李斯特菌(LM)环境应激和生物被膜形成的影响. 方法 以LM SB5强毒株为对象,利用温度敏感型穿梭质粒pKSV7,通过基因重叠延伸PCR (SOE-PCR)和同源重组技术构建LM-△rncS基因缺失突变株,检测其在不同温度、pH、高盐、乙醇、H2O2胁迫环境下的适应能力,通过结晶紫染色法检测生物被膜的形成能力. 结果 与LM-SB5株相比,构建的LM-△rncS在37℃、pH 4及pH 7的环境适应能力无显著变化(P＞0.05),而在30℃、42℃、pH 9、5％NaCl、3.8％乙醇、0.1％ H2O2的应激环境下其适应能力及生物被膜的形成能力显著降低(P＜0.05),提示Rnase Ⅲ RncS参与了LM对低温、高温、碱、高盐、乙醇及H2O2胁迫环境的适应过程及生物被膜形成的调控. 结论 构建的LM-△rncS基因缺失突变株,在不同应激环境下的适应能力及生物被膜形成能力均显著降低,为RnaseⅢ RncS参与LM ncRNA调控环境应激的分子机制研究奠定了基础.

为研究单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶RnaseⅢRncS氨基酸突变对RNA降解活性的影响.利用生物信息学软件分析单核细胞增生李斯特菌(LM)野毒株SB5中rncS基因编码的RnaseⅢ的结构域,并选择关键氨基酸利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对其进行了基因突变;然后将rncS突变基因片段D50A、E122A克隆至表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达;应用SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组蛋白的表达情况及其抗原特异性;通过体外酶活试验研究其对RNA降解活性的影响.结构域分析结果显示,LM-RnaseⅢ氨基酸序列含有1个双链RNA结合结构域(DSRM)和1个核酸酶结构域(RIBOc),其中结构域RIBOc含有5个活性位点.SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组突变型RnaseⅢ-D50A和RnaseⅢ-E122 A蛋白相对分子质量均为42.5 kD,与理论值相符;Western blot分析表明重组突变型RnaseⅢ-1)50A和RnaseⅢ-E122A蛋白可与LM阳性血清发生免疫学反应.体外酶活实验表明,RnaseⅢ发挥降解活性依赖于Mn2+或Mg2+,将其第50位天冬氨酸突变后,RnaseⅢRncS的降解活性有所降低(P＜0.001);第122位谷氨酸突变后,RnaseⅢRncS降解活性极显著下降(P＜0.0001),提示第122位谷氨酸是维持LM RnaseⅢRncS酶活性的关键位点.

植物Dicer-like蛋白家族属于核糖核酸酶Ⅲ (RNase Ⅲ),主要在植物体内产生miRNA与siRNA等非编码RNA,在植物的生长发育、器官发生、昼夜节律、生物和非生物胁迫反应以及对病毒和转座子的防御中都起重要作用.本文综述了Dicer-like蛋白的结构、功能、种类、定位,以及在生物与非生物逆境研究中的进展,以期为Dicer-like家族在植物中的进一步的研究与利用提供理论参考.

目的 通过生物信息学分析核糖核酸酶A家族成员2(RNASE2)基因与胶质瘤免疫浸润水平及临床预后的关系.方法 通过生物信息分析获取癌症基因组图谱(TCGA)及中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中RNASE2基因在胶质瘤中的表达情况,并分析RNASE2基因与胶质瘤预后、免疫浸润的关系及相应的信号通路.结果 RNASE2基因在胶质瘤中的表达水平高于癌旁组织(P﹤0.05).RNASE2基因表达水平在世界卫生组织(WHO)Ⅱ级、WHOⅢ级、WHOⅣ级胶质瘤中依次递增,且在复发胶质瘤中的表达水平明显高于原位胶质瘤,差异均有统计学意义(P﹤0.01).RNASE2低表达的胶质瘤患者生存情况明显优于RNASE2高表达患者,差异有统计学意义(P﹤0.01).RNASE2 mRNA表达水平与CD8+T细胞呈负相关,与调节性T细胞呈正相关(P﹤0.05).富集分析显示,RNASE2与免疫、炎症调控的信号通路相关.结论 RNASE2基因在胶质瘤中表达上调,影响胶质瘤免疫浸润水平,导致免疫微环境失衡,进而造成不良预后.表明RNASE2的转录水平可作为预测胶质瘤预后和免疫浸润的生物标志物.

microRNA(miRNA)是一类长度大约18-24个核苷酸的非编码RNA.miRNA的产生是在细胞核中的RNA聚合酶II(RNA polymerase Ⅱ)的作用下,生成长度可达1000个核苷酸并带有发夹结构的pri-miRNA, pri-miRNA经过一种被称为"Drosha"的核糖核酸酶Ⅲ(RNase Ⅲ) 进 一 步 加 工,产 生 miRNA 的 前 体(pre-RNA),之后被exportin-5转运到细胞质中,再由另一种核糖核酸酶III"Dicer"对pre-RNA进行处理,产生一条双链miRNA,又经AGO2蛋白做最后处理,从而产生一条成熟的miRNA[1].miRNA的主要调节方式是通过其5'端的2-8个核苷酸序列,与靶mRNA的3'-非编码区(3'-untranslated region,3'-UTR)结合,抑制靶mRNA的翻译过程[2].基于这种机制,miRNA参与了哺乳动物约50％的基因表达与调控,而且一个miRNA往往可以作用于多个mRNA,一个基因也可以由多种miRNA来控制表达.miRNA在循环、呼吸、内分泌、以及生殖等系统中都有着非常丰富的表达,参与机体正常的生理活动.在疾病的发生和发展中,部分miRNA则会出现表达异常的情况,这些异常将带来一些病理变化,这标志miRNA检测具有潜在临床意义.

[目的]探究环状RNA circ_0018478调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用和可能机制.[方法]RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=18)和心衰(n=28)患者心肌中circ_0018478及其宿主基因含E3泛素蛋白连接酶4的HECT和RLD结构域(HERC4)的表达水平.荧光原位杂交(FISH)实验和核质RNA定量检测circ_0018478的细胞分布情况,放线菌素D干预实验和核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验检测circ_0018478的RNA稳定性.过表达腺病毒介导的circ_0018478时,分别在RNA和蛋白水平检测乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中如Ⅰ型和Ⅲ型胶原等纤维化相关基因表达的影响.利用EdU染色和Trans-well细胞迁移实验鉴定circ_0018478对mCFs增殖和迁移能力的影响.质谱shot-gun分析circ_0018478可能翻译蛋白的肽段序列.利用小干扰RNA(siRNA)抑制HERC4-193表达,检测对circ_0018478调控mCFs纤维化表型的影响.[结果]在心衰病人心肌中,相较于无显著表达差异的宿主基因HERC4,环形RNA circ_0018478表达显著增加.FISH和核质分离实验结果证实circ_0018478主要定位于心肌细胞胞质中.放线菌素D和RNase R消化实验证实circ_0018478具有典型的RNA稳定性.过表达circ_0018478可抑制mCFs的增殖、迁移和纤维化相关基因的表达.质谱shot-gun和Western blot检测结果提示circ_0018478可翻译预期的HERC4-193蛋白.过表达circ_0018478和HERC4-193可一致地抑制mCFs的纤维化表型,而抑制HERC4-193表达可有效减弱circ_0018478抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用(P<0.05).[结论]Circ_0018478通过翻译蛋白HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用.