目的:探讨亚砷酸钠（NaAsO 2）致永生化人皮肤角质形成（HaCaT）细胞恶性转化过程中核转录因子红细胞系-2p45（NF-E2）相关因子-2（NRF2）对自噬的调控作用。 方法:采用细胞培养方法，以含0.0（对照组）和1.0 μmol/L NaAsO 2（染砷组）的DMEM高糖培养基长期培养HaCaT细胞至第35代，构建细胞恶性转化模型，收集细胞恶性转化模型建立过程中对照组和染砷组的第0、1、7、14、21、28、35代细胞；分别采用NRF2干扰RNA（siRNA）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）抑制剂LY294002及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂Rapamycin处理染砷组的第35代恶性转化HaCaT细胞（T-HaCaT细胞）。采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测对照组、染砷组不同代次HaCaT细胞及各处理组T-HaCaT细胞内NRF2，PI3K-蛋白激酶B（Akt）-mTOR信号通路相关指标PI3K、Akt、mTOR、磷酸化（p）-PI3K、p-Akt、p-mTOR，自噬相关蛋白p62、Beclin1、微管相关蛋白1轻链（LC）3Ⅰ、LC3Ⅱ的蛋白表达情况。 结果:染砷组不同代次HaCaT细胞中NRF2蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值比较，差异均有统计学意义（ F = 9.371、16.035、15.932、27.739， P均< 0.05）；且NRF2蛋白表达、p-mTOR/mTOR比值均高于对照组同代细胞（ P均< 0.05）。与同代HaCaT细胞比较，T-HaCaT细胞中NRF2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62蛋白表达均明显较高，Beclin1蛋白表达和LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ比值均明显较低（ P均< 0.05）；NRF2沉默的T-HaCaT细胞较其对照siRNA(Con siRNA)组Beclin1蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均较高，NRF2、p-mTOR、p62蛋白表达均较低（ P均< 0.05）；LY294002处理组T-HaCaT细胞较其非处理组Beclin1蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均较高，NRF2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达均较低（ P均< 0.05）；Rapamycin处理组T-HaCaT细胞较其非处理组Beclin1蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均较高，p-mTOR蛋白表达较低（ P均< 0.05）。 结论:在砷致HaCaT细胞恶性转化过程中，NRF2可以作为自噬重要调节机制PI3K-Akt-mTOR中PI3K-Akt下游、mTOR上游因子，通过激活mTOR来调控自噬，而自噬的这一异常表现，最终可能引起细胞的恶性转化。

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶含量最多、活性最强的有效成分,是绿茶生物学功效的主要研究对象.大量研究表明,EGCG具有抗氧化、清除自由基、抗癌等生物学活性,并参与多条信号通路的调控.核转录因子红细胞系-2p45相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路调节Ⅱ相解毒酶、抗氧化酶和抗炎蛋白等物质转录,直接影响细胞氧化应激水平,是调控氧化还原水平的核心通路.研究表明,EGCG对Nrf2/ARE信号通路具有激活作用,在泌尿、呼吸、心脑血管和消化等众多系统中发挥作用.本文总结了EGCG作为Nrf2/ARE信号通路激活剂的研究进展,为EGCG开发利用提供参考.

为了研究人类核转录因子红细胞系2p45相关因子(nuclear factor erythrioid-2p45 related factor2,Nrf2)与线粒体转录因子A (mitochondrial transcription factor A,TFAM)对前列腺癌发生发展的影响,本研究选取了本院2014年4月至2016年4月52例经手术切除或经病理穿刺得到的前列腺癌组织标本作为研究对象,通过免疫组化检测了Nrf2与TFAM在前列腺癌组织中的表达情况,并应用Spearman等级相关分析验证了Nrf2、TFAM表达强度与Gleason评分的关系以及Nrf2表达强度与TFAM表达强度之间的关系.研究发现,Nrf2表达强度与Gleason评分呈正相关关系(p=0.007),相关系数r=0.471,相关性具有统计学意义(p=0.007);TFAM表达强度与Gleason评分呈正相关关系,相关系数r=0.623,相关性具有统计学意义(p=0.000);Nrf2与TFAM二者表达情况呈正相关关系,相关系数r=0.482,相关性具有统计学意义(p=0.003).我们的研究证明了Nrf2与TFAM二者是前列腺癌的发生发展的因素之一,且Nrf2与TFAM可能通过同一通路参与前列腺癌的发生发展.

目的 探讨核转录因子红细胞系-2p45(NF-E2)相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)在良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)和前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织中的表达及临床意义.方法 收集2015-01-10-2016-01-10武汉市第一医院泌尿外科就诊的前列腺癌患者80例,设为前列腺癌组.选择同院同期前列腺增生患者52例,设为对照组.免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)检测前列腺癌和前列腺增生组织中Nrf2的表达情况;实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测Nrf2 mRNA和蛋白的表达水平;分析前列腺癌患者肿瘤组织中Nrf2的表达与患者年龄、肿瘤大小、血清前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)含量、Gleason评分、临床分期、是否淋巴结处转移和是否化疗耐药的关系;培养前列腺癌细胞系DU145,采用siRNA敲减DU145细胞中Nrf2的表达,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞对多西他赛(docetaxel,DTX)等化疗药物的敏感性.结果 前列腺癌组织中Nrf2 mRNA相对表达水平为3.61±1.75,高于前列腺增生组织的1.08±0.78,差异有统计学意义,t=3.669,P=0.0032;前列腺癌组织中Nrf2蛋白相对表达水平为2.55±1.03,高于前列腺增生组织的0.73±0.54,差异有统计学意义,t=3.513,P=0.0056.前列腺癌组织Nrf2阳性率为71.25％(57/80)高于前列腺增生组织7.69％(4/52),差异有统计学意义,χ2=51.217,P<0.001.前列腺癌患者肿瘤组织中Nrf2阳性率与血清PSA含量(χ2=19.985,P=0.001)、肿瘤大小(χ2=4.665,P=0.031)、Gleason评分(χ2=9.937,P=0.002)、临床分期(χ2=11.446,P=0.003)和有无淋巴结转移(χ2=6.572,P=0.01)有关联,与患者年龄无关(χ2=1.993,P=0.448).62例患者进行以DTX为基础的化疗,其中化疗敏感37例,化疗耐药25例.化疗敏感组Nrf2阳性20例,阴性17例,阳性率为54.1％,化疗耐药组Nrf2阳性20例,阴性5例,阳性率为80.0％,两组差异有统计学意义,χ2=4.387,P<0.036.siNrf2组24、48和72 h DTX、奥沙利铂和5-氟尿嘧啶(5-FU)的IC50明显低于siCtrl组,差异均有统计学意义,均P<0.01.结论 Nrf2在前列腺癌组织中的表达升高,可能参与前列腺癌的发生发展及化疗耐药的产生,可作为肿瘤治疗的潜在靶点.

目的 探究混合砷染毒对核转录因子红细胞系-2p45(NF-E2)因子-2(nuclear erythroid 2-related factor,Nrf2)抑制的人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT细胞)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein,Keap1)和N-6-腺嘌呤DNA甲基转移酶(N-6-adenine DNA methyltransferase,N6AMT1)表达的影响.方法 细胞培养72 h,分为4组:空白对照组、Keap1抑制对照组、Nrf2抑制对照组和三个Nrf2抑制混合染砷组,混合砷染毒浓度分别为2.1μmoL/L、4.2μmol/L、21.0 μmol/L;采用实时荧光定量PCR和蛋白质分子印记(western blot)方法测定各组细胞N6AMT1、Keap1的mRNA和蛋白水平.结果 与Nrf2抑制对照组比较Keap1和N6AMT1 mRNA表达不全相等(均有P＜0.05).与Nrf2抑制对照组比较,低、中、高剂量Keap1蛋白表达促进(均有P＜0.05),N6AMT1蛋白表达呈低剂量促进(t=-3.18,P=0.034),中、高剂量抑制(均有P＜0.05).结论 Nrf2抑制状况下,N6AMT1基因可能与Keap1-Nrf2通路调控有关.低剂量砷暴露时,Keap1激活可促进N6AMT1基因表达,促进砷代谢;高剂量砷暴露N6AMT1蛋白表达下调,抑制砷代谢.Keap1-Nrf2通路可能参与N6AMT1表达调控,而影响砷毒性作用.

目的:探讨右美托咪定对高氧诱导急性肺损伤小鼠的保护作用及核转录因子红细胞系2p45相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的影响.方法:将100只C57BI/6小鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、地塞米松组(100 mg·kg-1)、右美托咪定低(40 mg·kg-1)、高(80 mg·kg-1)剂量组.除正常对照组外,其余各组建立高氧诱导急性肺损伤模型,并于造模成功后腹腔注射相应药物,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水,qd,持续7d.实验结束后,检测小鼠肺/体比值、肺损伤评分、血氧分压(PaO2),小鼠肺组织中Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平,胱天蛋白酶-1(caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)蛋白水平.制作肺部HE染色切片,观察肺损伤情况.结果:与正常对照组比较,模型组肺/体比值、肺损伤评分、Nrf2 mRNA及蛋白表达水平、IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白表达水平明显升高,PaO2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05);与模型组比较,右美托咪定组肺/体比值、肺损伤评分、Nrf2 mRNA及蛋白表达水平、IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白表达水平明显降低,PaO2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),且呈剂量相关性;右美托咪定低剂量组与地塞米松组比较差异有统计学意义(P＜0.05).正常对照组肺泡组织结构正常,无炎症细胞浸润、无胶原蛋白沉淀;模型组、右美托咪定低剂量组肺泡壁明显增厚、破裂,可见中性细胞及少量嗜酸性细胞浸润,肺间质可见较多胶原蛋白沉淀;右美托咪定高剂量组及地塞米松组肺泡结构基本正常,有少量中性细胞侵润,几乎无胶原蛋白沉淀.结论:右美托咪定对高氧诱导急性肺损伤小鼠的保护作用与抑制Nrf2 mRNA及蛋白表达水平表达,进而抑制IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白表达有关.

[目的]通过研究知柏地黄汤对细胞抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路的调节及其对大鼠血清代谢物的干预作用,探讨其治疗阴虚火旺证的可能机制.[方法]将人肝癌细胞系HepG2细胞分为对照组、知柏地黄汤低、中、高浓度组,分别以0、1、20和100mg·mL-1的知柏地黄汤干预24h,通过双萤光素酶报告基因实验筛选知柏地黄汤显著调控的信号通路;荧光定量PCR检测所筛选通路相关基因的表达,并利用磷钼酸比色法及氧化酶法检测细胞内三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量、细胞耗氧率(oxygen consumption rate,OCR)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的变化.45只SD大鼠随机分成3组,空白组以0.9％氯化钠溶液灌胃21d,干姜组先以10g·kg-1干姜附子肉桂汤灌胃14d、再以0.9％氯化钠溶液灌胃7d,干知组先以10g·kg-1干姜附子肉桂汤灌胃14d、再以知柏地黄汤灌胃7d,灌胃体积为10mL/(kg·d),以液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)技术检测血清中代谢物的改变.[结果]双萤光素酶报告基因实验显示,知柏地黄汤对ARE元件调控最为显著,荧光定量PCR结果显示知柏地黄汤可以促进核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、小肌腱膜纤维肉瘤(musculoaponeurotic fibrosarcoma,Maf)的转录(P<0.001,P<0.05),同时抑制Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)的转录(P<0.001).与对照组比较,知柏地黄汤组细胞ATP含量(P<0.05)、OCR(P<0.001)及SOD活性(P<0.05)均升高.动物实验证实,知柏地黄汤灌胃治疗可以改善阴虚火旺模型大鼠胆碱、甘胆酸及棕榈酰左旋肉碱(palmitoyl-L-carnitine,PALC)的紊乱,其中胆碱及PALC含量差异有统计学意义(P<0.001).[结论]知柏地黄汤能够通过ARE信号通路,抑制机体的氧化应激反应,进而改善阴虚火旺引起的代谢紊乱,这可能是知柏地黄汤治疗阴虚火旺证的作用机制之一.

核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2(nuclear factor erythroid-2p45-related factor 2,Nrf2)是细胞应对外界应激的主要调控因子,通过调控一系列细胞保护酶,维持细胞稳态.然而,在许多肿瘤细胞中Nrf2过度激活,导致肿瘤细胞获得增殖优势并产生化疗耐药,因此,靶向抑制Nrf2是肿瘤增敏治疗的一种新思路.人参皂苷Rd是人参皂苷中的重要活性成分,具有显著的抗肿瘤作用.本研究以不同浓度的人参皂苷Rd处理人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC) H460细胞,利用CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜观察H460细胞的形态变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-qPCR和Western印迹检测的Nrf2及其下游调控基因的表达情况;此外通过转染Nrf2-siRNA下调H460细胞中Nrf2的表达,观察其对人参皂苷Rd增敏的影响.结果 显示,与对照组相比,人参皂苷Rd能够抑制H460细胞增殖活力,诱导细胞G0/G1期阻滞,促进细胞凋亡,具有剂量依赖性(P＜0.05);此外,人参皂苷Rd能够下调Nrf2,醌氧化还原酶1[NAD(P) H:quinoneoxidoreductase,NQO1],谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate--cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)和调节亚基(glutamate--cysteine ligase regulatory subunit,GCLM)的mRNA和蛋白质水平,同时增强H460细胞对化疗药的敏感性(P＜0.05),而转染Nrf2-siRNA后,人参皂苷Rd的增敏作用减弱.表明人参皂苷Rd可以抑制非小细胞肺癌H460细胞活性并增敏化疗,其机制可能是通过抑制Nrf2信号通路来实现.

目的:探究分化拮抗非编码RNA-201(differentiation antagonizing non-protein coding RNA,DANCR-201)在单核-巨噬细胞炎症反应中的调控作用.方法:纳入中国医学科学院阜外医院疑为冠心病接受冠状动脉CT检查的患者25例,年龄≥45岁.根据冠状动脉CT血管造影图像,研究对象分为3组,包括无斑块健康对照组(n=10)、完全钙化斑块组(n=10)和易损斑块组(n=5).采用全转录组测序技术分析外周血全血中表达差异的长链非编码RNA分子.培养人单核细胞白血病细胞系(THP)-1细胞,用于建立M1和M2型巨噬细胞极化模型,采用慢病毒感染和Smart Silencer转染技术分别过表达和敲低DANCR-201,检测炎症因子、脂质代谢与血管钙化相关基因的表达水平,采用油红O染色法检测巨噬细胞脂质吞噬能力,采用胆固醇流出实验检测巨噬细胞胆固醇逆转运能力.结果:DANCR-201在易损斑块组患者外周血的表达水平显著升高.在单核细胞系中过表达DANCR-201,可促进单核趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)高表达(P<0.01);反之,敲低DANCR-201时,可使MCP-1和TNF-α 的表达水平显著下降(P<0.01).在M1和M2型巨噬细胞中,DANCR-201显著抑制Runt相关转录因子2(Runx 2)表达水平(P<0.01),并促进骨保护素(OPG)高表达(P<0.05);反之,敲低DANCR-201时,M1和M2型巨噬细胞中的Runx 2表达水平升高,而OPG表达水平下降(P<0.01).DANCR-201对巨噬细胞脂质吞噬和胆固醇逆转运能力无显著影响.结论:DANCR-201促进M1和M2型巨噬细胞的炎症反应,其在动脉粥样硬化斑块形成中的作用机制仍需深入研究.

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸联合硫酸特布他林片辅助常规治疗老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)并呼吸衰竭对功能康复及β2微球蛋白(β2-MG)、胆碱酯酶(CHE)血清水平的影响.方法 选取老年COPD并呼吸衰竭患者129例,根据简单随机化法分为对照A组、对照B组、联合组,各43例.3组均采取常规治疗,在此基础上对照A组采取N-乙酰半胱氨酸,对照B组采取硫酸特布他林片,联合组采取N-乙酰半胱氨酸、硫酸特布他林片,均治疗2w.统计3组治疗前、治疗2w后肺功能〔第1秒呼气量(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC〕、血气指标〔氧合指数(OI)、血氧饱和度(SaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)〕、血清β2-MG、CHE、气道重塑指标〔血管紧张素(Ang)-Ⅰ、Ang-Ⅱ、转化生长因子(TGF)-β1〕、Keap1-Nrf2-ARE通路功能相关指标〔Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白(Keap)1、核转录因子红细胞系-2p45相关因子(Nrf)2、抗氧化反应元件(ARE)〕蛋白表达水平及治疗期间不良反应.结果 治疗2 w后3组FEV1、FVC、FEV1/FVC与OI、SaO2较治疗前显著增高,且联合组显著高于对照A组、对照B组,PaCO2较治疗前显著降低,且联合组显著低于对照A组、对照B组(P<0.05);治疗2 w后3组血清β2-MG与Ang-Ⅱ、TGF-β1水平较治疗前显著降低,且联合组显著低于对照A组、对照B组,血清CHE与Ang-Ⅰ水平较治疗前显著增高,且联合组显著高于对照A组、对照B组(P<0.05);治疗2 w后3组Keap1、Nrf2、ARE表达较治疗前显著增高,且联合组显著高于对照A组、对照B组(P<0.05);联合组不良反应发生率与对照A组、对照B组相比,无显著差异(P>0.05).结论 应用N-乙酰半胱氨酸联合硫酸特布他林片辅助常规治疗老年COPD并呼吸衰竭可显著改善肺功能、血气情况与Keap1-Nrf2-ARE通路功能,调节血清β2-MG、CHE水平,抑制气道重塑,且治疗过程中安全性好.