目的:探讨程序性死亡受体1（PD-1）/程序性死亡受体配体1（PD-L1）通路在急性髓系白血病（AML）患者中的表达及其与临床特征、预后的关系，并体外验证其对PD-1阳性自然杀伤（NK）细胞抗AML细胞的影响。方法:前瞻性收集2019年7月至2020年12月于郑州大学附属肿瘤医院确诊的65例AML患者骨髓标本及32例AML患者外周血，同时留取24名健康人外周血作为健康对照。流式细胞术检测骨髓肿瘤细胞PD-L1、外周血NK细胞PD-1表达水平，分析骨髓肿瘤细胞PD-L1与NK细胞PD-1表达与患者临床病理特征及疗效、预后的关系。流式细胞术检测AML细胞株THP-1（靶细胞）的PD-L1、NK细胞株NKL（效应细胞）的PD-1表达水平。经及未经PD-L1抑制剂梣酮（25 μmol/L）处理的THP-1细胞分别为实验组和对照组，分别与NKL细胞按不同效靶比共培养。流式细胞术检测THP-1细胞凋亡情况和NKL细胞NKG2D的表达水平，CCK-8法检测细胞增殖情况并计算增殖抑制率，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测共培养体系上清中干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果:AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于健康对照组[38.5%（25/65）比8.3%（2/24）， P＝0.029]，AML患者外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例高于健康对照组[40.6%（13/32）比12.5%（3/24）， P＝0.035]。骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性和阴性患者间及外周血NK细胞PD-1阳性和阴性患者间性别、年龄、就诊时血象、原始细胞比例、危险度分层、染色体核型、有无基因突变（除外NPM1基因）、融合基因及法、美、英协作组（FAB）分型的构成差异均无统计学意义（均 P>0.05）。复发难治患者中骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于初治患者[58.8%（10/17）比31.2%（15/48）， P＝0.045]，复发难治患者与初治患者间外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例的差异无统计学意义[38.5%（5/13）比42.1%（8/19）， P＝0.837]。PD-L1阳性与阴性患者完全缓解（CR）率差异无统计学意义[69.6%（16/23）比74.3%（26/35）， P>0.05]；PD-1阳性与阴性患者CR率差异无统计学意义[66.7%（8/12）比70.6%（12/17）， P>0.05]。PD-L1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[12.5%（2/16）比19.2%（5/26）， P>0.05]；PD-1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[25.0%（2/8）比16.7%（2/12）， P>0.05]。流式细胞术检测示，NKL细胞PD-1阳性率为（67±6）%，THP-1细胞PD-L1阳性率为（85±5）%。与NKL细胞共培养后，与对照组相比，实验组THP-1细胞凋亡率和增殖抑制率均明显增高，NKL细胞表面NKG2D表达升高，共培养上清中IFN-γ、TNF-α水平升高。 结论:AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平较高，外周血NK细胞PD-1表达水平亦较高，复发难治AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平高于初治患者。体外抑制THP-1细胞PD-L1表达可增强NKL细胞肿瘤杀伤活性，其机制可能是抑制THP-1细胞PD-L1表达后上调了NKL细胞活化型受体NKG2D的表达以及促进了IFN-γ和TNF-α的分泌。

目的:建立护肝解毒汤标准煎液的指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为其标准煎液及制剂的质量评价研究提供参考.方法:采用HPLC法结合中药色谱指纹图谱相似度评价系统,对15批护肝解毒汤标准煎液进行指纹图谱、相似度分析及共有峰的指认,并建立煎液中5种指标性成分的同时检测方法,计算各成分的转移率.结果:15批标准煎液指纹图谱相似度＞0.90,有22个共有峰,对照品比对出绿原酸、葛根素、芍药苷、甘草素、落新妇苷、黄藤苷、盐酸小檗碱、五味子醇甲、黄柏酮、梣酮10个成分,15批标准煎液中绿原酸、葛根素、落新妇苷、盐酸小檗碱、五味子醇甲的转移率分别为48.26％～63.80％、20.30％～31.50％、28.24％～39.11％、2.89％～5.60％、13.51％～21.85％.结论:采用指纹图谱、出膏率及指标性成分含量测定相结合的模式,对护肝解毒汤标准煎液的量值传递过程进行分析,可初步拟定护肝解毒汤标准煎液的质量标准,为其后续新药开发及相关制剂的质量控制提供依据.

白鲜皮来源于芸香科植物白鲜Dictamnus dasycarpus的干燥根皮,具有清热燥湿、祛风解毒的功效.白鲜皮的化学成分丰富,主要成分有生物碱类、柠檬苦素类、黄酮类等,具有抗菌、抗炎、抗过敏、杀虫、抗肿瘤、保肝、改善心血管系统、神经保护等药理作用.对白鲜皮及其有效部位和单体成分(包括白鲜皮水提物、白鲜皮醇提物、白鲜皮煎剂、白鲜碱、梣酮、黄柏酮、柠檬苦素等)的药理作用进行总结和归纳,为进一步深入的药理机制研究及开发利用提供理论依据.

目的:制备梣酮标准样品,确保梣酮及相关产品检测的准确性、可比性和可溯源性.方法:以芸香科植物白鲜的干燥根皮为原料,采用硅胶柱色谱分离制备梣酮单体.分别采用高效液相色谱(HPLC)法、薄层色谱(TLC)法和液质联用(LC-MS)技术对梣酮单体纯度进行分析,通过紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振等波谱技术对梣酮单体的结构进行表征,并参照GB/T 15000.3标准样品的工作导则要求考察其均匀性、稳定性和定值.结果:HPLC、TLC和LC-MS检测结果显示,所制单体纯度较高,在相关图谱中无明显杂质峰或斑点存在;经多种波谱技术鉴定分离单体化合物为梣酮;所制梣酮单体的均匀性良好,10瓶样品间纯度差异无统计学意义(P>0.05);梣酮单体在0～4℃条件下贮藏24个月稳定性良好,稳定性的扩展不确定度为0.16％;8家实验室联合定值试验确定其标准值为99.75％,扩展不确定度为0.34％.结论:成功制备了符合GB/T 15000.3要求的梣酮标准样品,该样品可用于梣酮及相关产品的质量控制和检测方法的评定.

目的 研究紫堇Corydalis edulis全草的化学成分.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱和半制备HPLC等色谱方法分离纯化,结合其理化性质和MS、NMR等波谱学数据鉴定化合物的结构.结果 从紫堇乙醇提取物的正丁醇萃取部位分离鉴定了15个化合物,分别鉴定为6,7-亚甲二氧基二氢异香豆素(1)、oxohydrastinine(2)、6,7-dimethoyisoquinolin-1(2H)-one(3)、6,7-methylenedioxy-1(2H)-isoquinolinone(4)、(+)-丁香树脂素(5)、梣皮树脂醇(6)、红景天苷(7)、1-(2-羟基苄基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、淫羊藿次苷D2(9)、水杨苷(10)、淫羊藿次苷F2(11)、淫羊藿次苷B2(12)、烟酰胺(13)、邻苯二酚(14)和5-羟基-2-羟甲基吡啶(15).结论 化合物1为新天然产物,化合物3、5～12、14和15为首次从紫堇属植物中分离得到,化合物2、4和13为首次从紫堇中分离得到.

目的:考察不同产地白鲜皮药材质量,为白鲜皮药材质量控制提供参考.方法:采用HPLC法,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,在210～500 nm检测,提取228 nm波长处的色谱图计算相似度,以白鲜碱峰为参照峰,计算相对峰面积,进行聚类分析.结果:15批次白鲜皮药材的相似度均大于0.9,确定13个共有峰,指认出白鲜碱、黄柏酮、梣酮3个峰,聚类分成3类.结论:该方法为白鲜皮药材质量全面评价体系的建立提供了参考.

目的:建立白鲜皮饮片-标准汤剂-配方颗粒的HPLC指纹图谱,对其质量相关性进行评价.方法:采用HPLC,InertSustain C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长228 nm;流速1.0 mL·min-1,柱温30℃.以对照指纹图谱对白鲜皮饮片-标准汤剂-配方颗粒进行相关性评价.结果:白鲜皮15批饮片、标准汤剂、配方颗粒指纹图谱呈现了10个共有峰,且具有良好的相关性.此外,从10个共有峰中指认出白鲜碱、黄柏酮、梣酮3个化学成分.结论:建立了白鲜皮饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱,全面反映了三者的多组分情况,为白鲜皮配方颗粒质量标准的建立及其全程质量控制提供了参考.

综合运用多种现代色谱分离方法对白鲜根皮中的化学成分进行研究,从白鲜根皮的甲醇提取物中分离得到19个化合物.采用UV,IR,NMR,MS和CD等波谱方法鉴定了这些化合物的化学结构,分别为kihadanin D(1)、黄柏酮(2)、kihadaninA(3)、kihadanin B (4)、kihadanin C (5)、柠檬苦素(6)、吴茱萸内酯醇(7)、梣酮(8)、furo[2,3-b] quinolin-4-ol(9)、前茵芋碱(10)、ifflaiamine(11)、白鲜醇(12)、柚皮素(13)、香叶木素(14)、汉黄芩素(15)、东莨菪素(16)、黄花菜木脂素A(17)、香草酮(18)和焦谷氨酸甲酯(19),其中化合物1为新的柠檬苦素类化合物,化合物9为首次从植物界分离得到,化合物11,13～14,17～19为首次从该属植物中分离得到.对化合物1～18的细胞毒活性进行了筛选,发现1对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231),人非小细胞肺癌细胞(A549)和人结肠癌细胞(HT29)具有一定生长抑制作用,IC50分别为16.22,21.72,31.06 μmol·L-1.

目的:采用HPLC双波长法同时测定白鲜皮中γ-崖椒碱、柠檬苦素、白鲜碱、黄柏酮和梣酮的含量.方法:采用Waters Symmetry@C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-水为流动相,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;分别于210和236 nm测定5种成分的含量.结果:γ-崖椒碱、柠檬苦素、白鲜碱、黄柏酮和梣酮分别在2.5～200μg/mL(r=0.9999)、40～200 μg/mL(r=0.9998)、40～200 μg/mL(r=0.9990)、110～ 550 μg/mL(r=0.9997)和100～500 μg/mL(r=0.9998)范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为94.98％、96.88％、96.71％、96.12％和95.79％,RSD分别为3.43％、2.99％、2.71％、2.79％和3.09％.结论:所建立的HPLC双波长法操作简便,结果准确,重复性好,适用于白鲜皮中γ-崖椒碱、柠檬苦素、白鲜碱、黄柏酮和榉酮5种成分的含量测定.

目的 研究梣酮对LPS介导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系MH7A增殖和迁移的影响.方法 MH7A细胞随机分为对照组、LPS组及梣酮低、中、高剂量组(10、20、50 μmol/L),各梣酮组预给药后LPS诱导MH7A细胞24h.然后,CCK-8法检测细胞活性,试剂盒法检测LDH释放,BrdU掺入法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移,Western blot法检测MMP1、MMP9、MMP13、p-JNK、p-STAT3蛋白表达.结果 梣酮对MH7A细胞活性、LDH释放无明显影响(P＞0.05).与LPS组比较,梣酮组显著抑制细胞增殖、侵袭和迁移(P＜0.05),显著降低MMPl、MMP9、MMP13、p-JNK、p-STAT3蛋白表达(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论 梣酮可抑制LPS介导MH7A细胞增殖和迁移,可能是通过调控JNK、STAT3信号通路实现的.