目的:探索2，3，7，8-四氯二苯并二 英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD）诱发小鼠腭裂的作用及机制。 方法:将84只孕鼠根据体质量按随机数字表随机分为TCDD组和对照组（每组42只），在孕期第10天（gestation day 10，GD10）上午8时分别给予64 μg/kg TCDD和等量玉米油灌胃。HE染色观察GD13~GD15胎鼠腭发育的形态学变化，5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU）免疫荧光观察TCDD对GD13~GD15胎鼠腭突间充质细胞增殖的影响，原位杂交和实时定量PCR（real-time PCR，RT-PCR）检测母系印记基因3（maternally expressed gene3，MEG3）在胎鼠腭突间充质细胞中的定位和表达，蛋白质印迹法检测胎鼠腭突间充质细胞内Smad2、磷酸化Smad2（phospho-Smad2，p-Smad2）、Smad4、Smad7的蛋白表达，RNA 结合蛋白免疫沉淀实验（RNA binding protein immunoprecipitation，RIP）验证MEG3与转化生长因子β受体Ⅰ（transforming growth factor-β receptor Ⅰ，TGF-βRⅠ）的相互作用。结果:与对照组相比，TCDD组GD13（ t=6.66， P=0.003）和GD14（ t=6.56， P=0.003）胎鼠腭突间充质细胞中BrdU阳性细胞率显著减少，但在GD15时BrdU阳性细胞率显著增加（ t=-5.98， P=0.004）。原位杂交显示MEG3主要表达于间充质细胞的细胞核。RT-PCR结果显示，TCDD组腭突间充质细胞内的MEG3相对表达量显著高于对照组（GD13： t=39.28， P=0.012；GD14： t=18.75， P=0.042；GD15： t=28.36， P=0.045）。在GD14，TCDD组胎鼠腭突间充质细胞内p-Smad2、Smad4蛋白表达均显著低于对照组（p-Smad2： t=9.48， P=0.001；Smad4： t=63.10， P=0.001），Smad7蛋白表达量显著高于对照组（ t=30.77， P<0.001）。RIP实验结果显示，TCDD组GD14胎鼠腭突间充质细胞中TGF-βRⅠ结合MEG3的表达量（23.940±1.301）显著高于对照组（8.537±1.523）（ t=24.55， P<0.001）。 结论:TCDD可能通过促进MEG3与TGF-βRⅠ的靶向结合影响TGF-β/Smad信号途径的激活，从而抑制腭突间充质细胞的增殖，由此导致腭裂的发生。

母系表达基因3 (maternally expressed gene 3,MEG3)是小鼠母体印记基因Gt12的人类同系物,定位于染色体14q32.3,属于长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)[1].近年来研究发现lncRNA是调控基因表达、染色质重塑、转录、转录后加工等过程的重要分子[2-3],与多种肿瘤的发生密切相关.MEG3在多种正常组织中表达,但在多种肿瘤细胞中表达缺失[4-7].本课题组前期研究发现,人胰腺癌SW1990细胞中MEG3基因表达缺失,而上调MEG3表达后能显著抑制肿瘤细胞的增殖,并促进肿瘤细胞的凋亡[8].本研究进一步观察MEG3对SW1990细胞侵袭及运动能力的影响.

中枢性性早熟发病的具体机制至今仍不明确.近些年,科学家们发现一些基因的突变与HPG轴(下丘脑-垂体-性腺轴)提前激活有关.KISS1系统与MKRN3系统是近些年研究者们研究的热点.KISS1基因是一种肿瘤转移抑制基因,KISS1在HPG轴的上游发挥作用.MKRN3基因是一种母系印记基因,MKRN3在HPG轴下游发挥作用.有研究表明,KISS1系统的激活突变在HPG轴激活过程中起着重要的作用,MKRN3失活突变与中枢性性早熟密切相关.本文重点介绍了KISS1系统、MKRN3系统及中枢性性早熟与这两个系统的关系.

目的 探讨胃腺癌组织长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)、母系印记表达基因3(MEG3)表达变化及其临床意义.方法 选择胃腺癌患者142例,取手术切除的胃腺癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR法检测lncRNA HOTAIR、MEG3表达.比较胃腺癌组织与癌旁正常组织lncRNA HOTAIR、MEG3表达变化,并分析胃腺癌组织lncRNA HOTAIR表达与lncRNA MEG3表达的关系以及二者与患者临床病理特征的关系.结果 与癌旁正常组织比较,胃腺癌组织lncRNA HOTAIR相对表达量明显升高,lncRNA MEG3相对表达量明显降低(P均<0.05).Pearson相关分析显示,胃腺癌组织lncRNA HOTAIR相对表达量与lncRNA MEG3相对表达量呈负相关关系(r=-0.626,P<0.01).胃腺癌组织lncRNA HOTAIR、MEG3相对表达量均与肿瘤组织分化程度、TNM分期有关(P均<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位及淋巴结转移无关(P均>0.05).结论 胃腺癌组织lncRNA HOTAIR表达升高、lncRNA MEG3表达降低,二者均参与胃腺癌的发生、发展.

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)覆盖了人类DNA的大部分非编码信息,占整个基因组的90％以上,它们构成了一个广泛而复杂的分子群,在肿瘤的病理生理过程中以多种形式存在.2003年,lncRNA人母系表达基因(MEG)3被证明是垂体瘤的一个潜在的肿瘤抑制因子,之后研究者又在脑膜瘤、肝癌、肺癌、神经内分泌瘤,以及前列腺癌等其他肿瘤上对其在基因表达调控、印记、转录和翻译后的作用上进行了研究,发现MEG3在多种恶性肿瘤组织中低表达或表达缺失,而上调MEG3的表达与肿瘤生长抑制相关,其在肿瘤发生中的作用和机制得到了更好地阐明.总结MEG3的功能及在肿瘤发生中的研究进展.

目的 探索人母系表达基因3(MEG3)在肝癌发生发展中作用及机制.方法 实时定量PCR检测肝癌细胞系以及正常细胞系中MEG3表达;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印记检测血管内皮生长因子(VEGFA)及其受体(VEGFR1)表达.结果 与正常肝细胞HL-7702比较,肝癌细胞(MHCC97L、SMMC7721、MHCC97H、HepG2)中MEG3表达明显下降(P＜0.01);与对照组LV-scramble比较,转染过表达载体LV-MEG3导致SMMC7721和MHCC97H细胞增殖倍数降低[SMMC7721由(5.8±0.4)倍降至(3.1±0.3)倍;MHCC97由(6.4±0.5)倍降至(3.4±0.3)倍],细胞凋亡率增加[SMMC7721由(2.8±0.4)％升至(12,4±0.6)％;MHCC97H由(2.2±0.4)％升至(13.5±0.5)％],VEGFA和VEGFR1表达下降(P＜0.01).结论 长链非编码RNA MEG3可抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡,其机制可能与下调细胞内血管内皮生长因子及受体表达有关.

目的 探讨长链非编码RNA母系印记基因3(lncRNA MEG3)在骨肉瘤组织中的表达及对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡与侵袭的影响.方法 实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测5例骨肉瘤组织及癌旁对应正常组织中lncRNA MEG3的表达水平.构建pcDNA3.1-MEG3重组质粒,MEG3过表达后,MTT方法检测MG63细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测MG63细胞的凋亡率;Transwell实验检测MG63细胞侵袭能力的变化;Westernblot方法检测MG63细胞增殖细胞核抗原(PCNA)与Racl蛋白的表达变化.结果 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P＜0.01).lncRNA MEG3过表达后,MG63细胞的增殖与侵袭能力显著降低,凋亡率显著上升,PCNA与Racl蛋白的表达显著降低(P＜0.01).结论 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中低表达,过表达lncRNA MEG3能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖与侵袭,并促进凋亡.

目的 探讨转录因子Kaiso是否调节人母系表达基因3(MEG3)表达及其在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用.方法 RT?qPCR检测正常乳腺细胞系MCF?10A和多个乳腺癌细胞系MCF?7、BT?474、MDA?MB?435、MDA?MB?231中Kaiso和MEG3的表达;蛋白印迹检测Kaiso在各种细胞中的表达;免疫组织化学检测50例乳腺癌和癌旁组织中Kaiso表达;RT?qPCR检测过表达Kaiso对母系印记基因编码的长链非编码RNA(lncRNA MEG3)转录水平的影响.结果 MCF?10A中lncRNA MEG3转录水平高于Kaiso的转录水平(P<0.001),在MCF?7、BT?474、MDA?MB?435、MDA?MB?231细胞中Kaiso明显上调,而lncRNA MEG3明显下调(P<0.001);MCF?10A中Kaiso表达水平较低,而在MDA?MB?231高转移性乳腺癌细胞中呈现出高表达状态(P<0.05).Kaiso在乳腺癌旁组织中为低表达(P<0.001),而在癌组织中高表达于细胞质与细胞核中.另外在MCF?10A细胞中使Kaiso过表达后lncRNA MEG3的转录水平明显下调(P<0.01).结论 Kaiso调节lncRNA MEG3在乳腺癌组织细胞中的表达,在乳腺癌的发生发展中可能发挥重要作用.

目的 探讨结直肠癌组织长链非编码RNA母系印记基因3(LncRNA MEG3)、微小RNA-31(miR-31)表达及与病理特征的相关性.方法 选取2019年1月—2021年10月我院收治的85例结直肠癌,比较癌组织与癌旁组织LncRNA MEG3与miR-31表达,应用Pearson相关性分析探讨LncRNA MEG3与miR-31的关系,采用荧光素酶报告基因检测分析LncRNA MEG3靶向调控miR-31情况,并比较不同病理特征患者LncRNA MEG3与miR-31表达,应用Spearman分析探讨LncRNA MEG3、miR-31与病理特征的相关性.结果 癌组织LncRNA MEG3表达低于癌旁组织,miR-31表达高于癌旁组织(P<0.01).LncRNA MEG3与miR-31表达呈负相关(r=-0.718,P<0.01).荧光素酶报告基因检测结果显示,LncRNA MEG3 mimic可明显抑制WT-miR-31的荧光素酶活性(P<0.05);LncRNA MEG3组SW480细胞中miR-31表达显著降低,anti-LncRNA MEG3组SW480细胞中miR-31表达显著升高(P<0.05).不同T分期、N分期、M分期、分化程度患者LncRNA MEG3与miR-31表达比较差异有统计学意义(P<0.01).LncRNA MEG3表达与T分期、N分期呈负相关(r=-0.737、-0.725,P<0.01),与分化程度呈正相关(r=0.824,P<0.01);miR-31表达与T分期、N分期呈正相关(r=0.830、0.748,P<0.01),与分化程度呈负相关(r=-0.742,P<0.01).结论 结直肠癌组织中LncRNA MEG3呈低表达,miR-31呈高表达,且LncRNA MEG3可特异性结合miR-31,负向调控miR-31表达,影响结直肠癌患者病理特征.

目的 探究长链非编码RNA母系印记基因3(LncRNA MEG3)与微小RNA-31(miR-31)在结肠腺瘤-癌序列转化中的交互作用与意义.方法 选取2016年6月—2018年8月手术切除的62例结肠腺瘤、62例结肠腺瘤癌前病变、62例结肠癌组织,均行实时定量PCR检测LncRNA MEG3、miR-31 的相对表达量;分析LncRNA MEG3 与miR-31表达在不同序列转化阶段的相关性;分析LncRNA MEG3与miR-31表达在结肠腺瘤-癌序列转化中的交互作用;分析LncRNA MEG3、miR-31表达与结肠癌患者病理特征的相关性;分析LncRNA MEG3、miR-31表达对结肠癌患者生存率与死亡危险度的影响.结果 LncRNA MEG3 相对表达量在结肠腺瘤-癌序列转化中呈逐渐下降趋势,miR-31相对表达量在结肠腺瘤-癌序列转化中呈逐渐升高趋势(P<0.01).Pearson相关性分析显示,LncRNA MEG3与miR-31在结肠腺瘤、结肠腺瘤癌前病变、结肠癌组织中均呈负相关(r=-0.741、-0.753、-0.774,P<0.05).LncRNA MEG3低表达与miR-31高表达在结肠腺瘤-癌序列转化中呈正向交互作用(OR=30.375,γ=2.244),为次相乘模型.LncRNA MEG3相对表达量与结肠癌患者临床分期、淋巴结转移呈负相关,与结肠癌组织分化程度呈正相关,miR-31相对表达量与结肠癌组织临床分期、淋巴结转移呈正相关,与结肠癌组织分化程度呈负相关(P<0.01).LncRNA MEG3低表达结肠癌患者3年生存率低于高表达患者,3年内死亡危险度是高表达患者的7.000倍(95％CI:1.027,47.704,P<0.05);miR-31高表达结肠癌患者3年生存率低于低表达患者,3年内死亡危险度是低表达患者的4.810倍(95％CI:1.846,12.536,P<0.05,P<0.01).结论 LncRNA MEG3低表达与miR-31高表达在结肠腺瘤-癌序列转化中具有正向交互作用,且二者均与结肠癌患者病理特征、生存状况密切相关,能为临床制定治疗方案、预测预后提供有效信息.