目的 研究蒙药藜芦(Veratrum nigrum L.)的化学成分及其细胞毒活性,为阐明蒙药藜芦的药效物质基础提供依据.方法 采用硅胶柱色谱、反相制备高效液相等方法,对蒙药藜芦的醇提取物进行分离纯化,根据其理化性质及波谱技术(1D、2D-NMR、HRMS)对分离的化合物进行结构鉴定;采用CCK-8法测定单体化合物对3种癌细胞系,包括人乳腺癌细胞系(MCF-7)、人肺癌细胞系(A549)、人结直肠腺癌细胞系(HCT-15)的细胞毒活性.结果 从藜芦的三氯甲烷及乙酸乙酯萃取层分离得到7种化合物,分别为:藜芦定(1)、1α,3β-dihydroxy-5α-jervanin-12-en-11-one(2)、贝母素甲(3)、贝母素乙(4)、西贝碱(5)、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(6)、异东莨菪素(7).细胞毒活性检测结果表明化合物2对HCT-15细胞系有显著的细胞毒活性,化合物4对MCF-7细胞系有中等的细胞毒活性.结论 化合物1首次从内蒙古产藜芦中分离得到,化合物3～6为藜芦属内首次分离得到,化合物2和化合物7首次从该种植物中分离得到;化合物2、4对MCF-7、HCT-15两种细胞系分别具有不同程度的细胞毒活性.

目的 探讨蒺藜生药粉对大鼠的长期毒性.方法 将 120 只SD大鼠随机分为对照组(等体积饮用水)及低、中、高剂量组(蒺藜生药粉 2.13,4.25,8.50 g/kg),各 30 只.各组大鼠灌胃给予相应药物或等体积饮用水(15 mL/kg),每天 1 次,连续 30 d.观察末次给药后及末次给药 30d后大鼠的体质量、一般情况(形态外观、中毒反应症状等);采用苏木素-伊红染色,观察肝脏组织病理学变化情况;检测血液细胞、血液生化、血清电解质、凝血指标变化情况.结果 给药期间各给药组大鼠均未见死亡及明显毒性反应.开始给药至末次给药 30d后各给药组大鼠体质量均呈自然增长趋势,末次给药后及末次给药 30d后与对照组比较无明显差异(P>0.05).末次给药后,各给药组出现不同程度灶状炎性细胞浸润,且高剂量组可见肝细胞脂肪变性,末次给药 30d后均有不同程度改善.末次给药后与对照组比较,中剂量组雌性大鼠碱性磷酸酶(ALP)水平明显降低(P<0.05);低剂量组雄性大鼠红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)水平、平均红细胞血红蛋白浓度明显升高,平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、网织红细胞水平明显降低,中剂量组雄性大鼠MCH明显降低,高剂量组雄性大鼠RBC及Hb水平明显升高(P<0.05).末次给药 30d后与对照组比较,高剂量组雌性大鼠MCV明显升高,低、中、高剂量组雌性大鼠ALP及中剂量组雌性大鼠γ-谷氨酰转肽酶水平明显降低(P<0.05);低、高剂量组雄性大鼠淋巴细胞百分比明显升高(P<0.05).结论 长期(≥30d)给予高剂量(≥8.50g/kg)蒺藜生药粉对大鼠具有一定的肝毒性,但随停药时间的延长大鼠可自行恢复.

目的:探讨蒺藜生药粉及其水提取物的肝毒性作用机制.方法:蒺藜生药粉、蒺藜水提取物经口给予SD大鼠1个月.选取健康大鼠140只,雌雄各半,随机分为正常对照组,蒺藜粉低、中、高剂量组,蒺藜水提物低、中、高剂量组.检测大鼠血清中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)含量,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测肝组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD).实时PCR检测大鼠肝组织法尼醇X受体(FXR)、细胞色素7A1(CYP7A1)、过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR α)表达,组织病理学观察大鼠肝脏病理学变化.结果:解剖观察肝重量、肝系数均无明显变化.与正常对照组比较,蒺藜粉高剂量组GOT显著升高(P＜0.01),蒺藜水提物高剂量组GOT、GPT显著升高(P＜0.05或P＜0.01);蒺藜水提取物高剂量组GSH、MDA表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01),中剂量组MDA表达显著升高(P＜0.01),低剂量组SOD显著降低(P＜0.05);蒺藜生药粉中、高剂量组CYP7A1表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01);蒺藜水提物中剂量组CYP7A1表达显著升高(P＜0.01),高剂量组PPAR α显著降低(P＜0.01);组织病理学检查蒺藜粉中、高剂量组及蒺藜水提物各剂量组均可见肝细胞水肿、肝细胞脂肪变性,灶状炎细胞浸润,且蒺藜水提取物程度更深.结论:蒺藜水提物对肝脏的影响较为显著,且蒺藜肝毒性机制可能是抑制PPAR α的表达,使CYP7A1、MDA的表达过度所引起的.

溃疡性结肠炎(UC)是以结肠上皮屏障的受损及免疫稳态的破坏为特征的慢性非特异性炎症疾病,病程冗长、迁延不愈、复发率高,是公认的难治性消化性疾病.微小RNA(miRNA)已被证实在UC患者和UC动物模型中均存在特异性或差异性表达,可作为UC诊断的标志物或治疗的参考.因中药治疗UC疗效确切、作用广泛、副作用小,故本文以miRNA为切入点,系统阐述中药通过调控miRNA的表达进而调节UC相关信号通路的作用机制.结果发现,绿原酸、安肠汤、扶阳活血解毒方可通过调控miR-155、miR-146a、miR-31-5p等的表达,进而抑制信号转导及转录激活蛋白(STAT)信号通路转导来改善UC;柠檬苦素、人参皂苷Rh2、青蒿琥酯等可通过调控miR-214、miR-155、miR-19a等的表达,进而抑制核因子κB(NF-κB)信号通路转导来改善UC;氯化两面针碱、小檗碱、白藜芦醇等可通过调控miR-31、miR-146a、miR-146b等的表达,进而抑制Toll样受体4(TLR4)信号通路转导来改善UC;芒果多酚、复方芩柏颗粒、黄芪多糖可通过调控miR-126、miR-193a-3p的表达,进而抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路转导来改善UC.

目的:研究白藜芦醇对生长期大鼠峰值骨密度和骨质量的影响.方法:36只1月龄雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组、淫羊藿苷组和白藜芦醇组,每组12只.淫羊藿苷组灌服淫羊藿苷25 mg·kg-1·d-1,白藜芦醇组灌服白藜芦醇8.4 mg·kg-1·d-1,空白对照组灌服等体积蒸馏水.在灌胃4、8、12周时测定大鼠全身骨密度.12周时处死所有大鼠,进行股骨和椎骨离体骨密度检测、骨生物力学分析、血清骨代谢指标检测、显微CT扫描以及重要器官的器官指数计算和病理学观察.结果:实验期间各组大鼠体质量均呈上升趋势,组间比较差异无统计学意义(P>0.05);各组大鼠心、肝、肾、肺、子宫等的器官指数差异无统计学意义(均P>0.05),器官组织病理学也未见异常改变.灌胃12周时,淫羊藿苷组和白藜芦醇组大鼠全身骨密度均高于空白对照组(均P<0.05),而淫羊藿苷组和白藜芦醇组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);右侧股骨和椎骨离体骨密度改变呈现出与全身骨密度改变相同的趋势.与空白对照组比较,淫羊藿苷组和白藜芦醇组大鼠股骨最大载荷,以及椎骨最大载荷、弹性模量显著升高(P<0.05或P<0.01).与空白对照组比较,淫羊藿苷组和白藜芦醇组股骨松质骨的体积骨密度、骨小梁数目、骨小梁厚度和骨小梁占骨髓腔体积百分比(BV/TV)均显著升高(P<0.05或P<0.01),骨小梁分离度显著下降(P<0.05或P<0.01);各组间股骨皮质骨的体积骨密度无明显变化(P>0.05).淫羊藿苷组和白藜芦醇组骨钙素含量显著高于空白对照组(均P<0.05),而抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP 5b)含量显著低于空白对照组(均P<0.05).结论:白藜芦醇能提高骨形成、抑制骨吸收,增加青年大鼠的峰值骨密度和骨质量,增强骨强度,改善骨组织微结构,并且无明显毒副作用.

目的 通过研究沉默信息调节因子1 (Sirtuin 1,SIRT1)基因与PI3K-AKT通路相互作用,探讨SIRT1基因对成骨细胞分化的影响.方法 自Sprague Dawley大鼠乳鼠颅骨提取成骨细胞进行原代培养,细胞培养至3～4代时,将细胞随机分为对照组,白藜芦醇组,白藜芦醇+EX-527组.采用细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测白藜芦醇及EX-527对细胞毒性大小.碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红(alizarin red S)染色分别检测ALP水平和钙结节.免疫组织化学法观察Ⅰ型胶原的产生,用以判断细胞的分化情况.Western blot分别检测SIRT1,Runtrelated transcription factor 2(RUNX2),骨桥蛋白(OPN)蛋白表达水平以及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinaseB,AKT)磷酸化水平.结果 白藜芦醇和EX-527对细胞增殖无影响(P＞0.05),细胞毒性小,ALP水平和钙结节在加入白藜芦醇后有明显上升,加入EX-527后显著下降.Ⅰ型胶原量在加入了白藜芦醇后上升,SIRT1含量降低也引起了Ⅰ型胶原量下降.成骨细胞分化相关因子RUNX2和OPN随SIRT1表达增高而增高(P＜0.01或P＜0.001),当SIRT1被抑制后,相关因子蛋白水平表达降低(P＜0.001).同时,磷酸化PI3K和AKT水平也呈现SIRT1依赖性地上调和下调(P＜0.05或P＜0.001).结论 SIRT1对大鼠成骨细胞分化的影响可能是通过PI3K-AKT通路进行调控.

目的:为藜豆及其变种的进一步研究与开发利用提供参考.方法:以"Mucuna pruriens""藜豆""猫豆"等为关键词,组合查询2008—2017年在PubMed、Elsevier、中国知网、万方、维普等数据库中收录的相关文献,对藜豆及其变种药理作用等方面的研究进展进行归纳和综述.结果与结论:作为一种在全球热带、亚热带地区广泛分布的传统药用植物,藜豆及其变种在治疗帕金森病中的作用主要与左旋多巴及其类似物有关;其在治疗男性不育症、降血糖、抗蛇毒等其他方面也具有明确的药理作用,相关的氨基酸、生物碱、多酚、蛋白质等活性成分正在被逐步揭示.目前,藜豆及其变种的国际研究还主要集中在药效学验证方面,但其提取物的制备工艺和主要成分组成还不统一,其应用开发尚处于初级阶段.藜豆及其变种对于上述疾病的药理作用等方面的深入研究和资源开发利用仍有待进一步重视和加强.

目的 利用分子对接技术预测金莲花中牡荆素、荭草素、牡荆素-2"-O-β-L-半乳糖苷、荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷、藜芦酸、金莲花碱的抗病毒和抗炎机制.方法 运用Discovery Studio 2.5软件和药物化学数据库,将金莲花的6个活性成分与Toll样受体蛋白(TLRs)及神经氨酸酶(NA)靶点进行分子对接,通过模拟运算,分析对接结果及其功能区域的相互作用关系.结果 牡荆素、荭草素、牡荆素-2"-O-β-L-半乳糖苷、藜芦酸、金莲花碱均作用于1种或多种TLR,而荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷与3种TLR均无相互作用;黄酮类化合物,即牡荆素、荭草素、牡荆素-2"-O-β-L-半乳糖苷、荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷均可与NA结合,而藜芦酸和金莲花碱与NA无相互作用.结论 金莲花的6个活性成分中,5个成分可影响TLRs介导的信号通路,TLR3、4、7是其抗病毒抗炎作用的潜在靶点;4个黄酮类化合物可通过作用于NA而影响流感病毒活性.本研究可为探讨金莲花的抗病毒和抗炎有效成分及其进一步开发利用提供依据.

甾体生物碱是天然甾体的含氮衍生物,在化学特性和生物活性方面具有甾体类和生物碱类化合物的双重属性.甾体生物碱是贝母、黄杨、藜芦、龙葵等传统中药中的主要药效成分,并且也存在于马铃薯、蕃茄、茄等常用食物中.现代药理学研究表明,甾体生物碱类成分在抗肿瘤、心血管系统、抗菌、杀虫等方面具有很强的活性,同时也具有较强的毒性.甾体生物碱因其结构的特殊性,对其定量分析造成一定难度.对1998-2017年相关文献中甾体生物碱类成分的定量分析方法进行综述,其中应用于甾体生物碱总含量的测定方法主要有分光光度法-酸性染料比色法、酶联免疫吸附法、滴定法等;特定甾体生物碱的含量普遍采用高效液相色谱法,主要包括HPLC-UV,HPLC-ELSD,HPLC-MS和HPLC-CAD等.本文对近20年甾体生物碱定量分析的相关研究进行了归纳,并对各种含量测定方法的优势和局限性加以总结,以促进对相关中药质量以及相关食物安全性控制方法的改进和提升,同时也为甾体生物碱类成分以及相关中药的进一步开发利用提供分析方法方面的参考.

目的:建立同时测定风湿定片中甘草酸、水杨苷、甘草次酸、毒藜碱、丹皮酚、欧前胡素及异欧前胡素含量的方法.方法:采用高效液相色谱-电雾式检测器(HPLC-CAD)法.色谱柱为Thermo Hypersil BDS C18,流动相为乙腈-10 mmol/L甲酸铵(甲酸调pH至4.5,梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,CAD雾化器温度为35℃,气压为(59.6±0.1)psi,检测频率为10 Hz,进样量为20μL.结果:甘草酸、水杨苷、甘草次酸、毒藜碱、丹皮酚、欧前胡素及异欧前胡素检测质量浓度线性范围为0.42～16.80、0.28～11.20、0.16～6.20、0.98～39.40、1.02～41.00、0.11～4.40、0.10～3.80μg/mL(r≥0.9991);检测限分别为0.03、0.02、0.02、0.03、0.03、0.02、0.02μg/mL,定量限分别为0.11、0.06、0.06、0.10、0.11、0.08、0.07μg/mL;精密度、稳定性(48 h)、重复性试验的RSD均<2.0％(n=6或n=7);平均回收率为98.61％～99.76％,RSD为1.11％～1.51％(n=6).结论:建立的方法操作简便、灵敏度高、结果准确,可用于风湿定片中甘草酸、水杨苷、甘草次酸、毒藜碱、丹皮酚、欧前胡素及异欧前胡素含量的同时测定.