目的 建立腺毛菊苣Cichorium glandulosum种子(菊苣子药材)和混伪品菊苣Cichorium intybus种子HPLC指纹图谱及多成分含量测定,并结合化学模式识别法对二者进行分析比较,为其资源利用开发和进一步的质量控制研究提供参考.方法 采用YMC-PACK ODS-A色谱柱,以 0.2%磷酸溶液(A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱,体积流量为 1.0 mL/min,检测波长为 254 nm,柱温为 40℃,进样量为 5 μL.利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012 版)》建立 19 批腺毛菊苣种子和 4 批菊苣种子样品的HPLC指纹叠加图谱并分析相似度,通过对照品比对指认,确定化学成分并进行含量测定,使用SPSS 20.0 和SIMCA-P 14.1 软件进行聚类分析、主成分分析(principal component analysis,PCA)分析和正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)分析,对不同批次样品进行质量评价.结果 建立了 19 批腺毛菊苣种子和 4 批菊苣种子HPLC指纹叠加图谱,并确定 19 个共有峰,通过对照品比对指认了其中 8 个色谱峰;建立了绿原酸、秦皮乙素、1,4-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸 A、1,5-二咖啡酰奎宁酸含量测定方法;指纹图谱相似度在0.915～0.998;OPLS-DA分析与PCA分析结果一致,可将样品分为 3 组,并筛选出1,5-二咖啡酰奎宁酸、槲皮素、绿原酸、菊苣酸 4 个差异性成分.结论 通过HPLC指纹图谱结合化学模式识别方法,建立了一种简单可靠的菊苣子药材质量评价方法,为菊苣子药材的质量评价和资源化利用提供依据.

目的 建立不同生长期(花前期、开花期和成熟期)毛菊苣Cichorium glandulosum地上部位药材的HPLC指纹图谱,结合化学模式识别法和薄层色谱(TLC)生物自显影技术评价毛菊苣药材质量,为其进一步研究与开发提供依据.方法 采用PolyPack C18-AQ色谱柱,以甲醇(A)-乙腈(B)-0.3％磷酸溶液(C)为流动相进行梯度洗脱,检测波长为254 nm,体积流量为1.0 mL/min.采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012)》建立不同生长期毛菊苣地上部位药材的HPLC指纹图谱并分析相似度.应用聚类分析(cluster analysis,CA)、主成分分析(principal component analysis,PC A)和偏最小二乘法-判别分析(partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA)筛选不同生长期下毛菊苣地上部位药材中具有的差异性化学成分.利用TLC-生物自显影技术对不同生长期毛菊苣药材进行体外抗氧化作用研究.结果 不同生长期下20批次药材HPLC指纹图谱共匹配出12个共有峰,指认出3号峰为秦皮乙素、6号峰为异槲皮苷、7号峰为3,5-O-二咖啡酰奎宁酸.CA将20批不同生长期下药材分为4类;PCA确定了3个主成分因子,累积方差贡献率为78.143％,PCA结果与CA结果基本一致;PLS-DA结果显示色谱峰11、2、6(异槲皮苷)、3(秦皮乙素)和5号峰可作为不同生长期毛菊苣药材质量的差异标志物.样品展开斑点和TLC-生物自显影说明花前期和开花期药材相比成熟期药材具有良好的抗氧化活性作用.结论 利用建立的指纹图谱可为毛菊苣地上部位药材规范化种植以及质量评价提供实验依据.

探究在四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导建立的大鼠慢性肝损伤模型中,毛菊苣正丁醇部位(Cichorium glan-dulosum n-butanol extraction site,CGE)对疾病的缓解作用及机制.通过皮下注射CCl4 橄榄油溶液构建慢性肝损伤模型,CGE治疗 4 周后,检测大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotrans-ferase,ALT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;并对肝组织进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)和马松(Masson)染色观察大鼠肝脏组织结构;采用qPCR、Western blot检测大鼠肝组织和肝星状细胞-T6(hepatic stellate-T6,HSC-T6)中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/细胞信号传导分子(small mothers against decapentaplegic,Smad)、Toll样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)的表达,评价CGE对HSC活化的抑制作用.结果显示,CGE能够明显减少CCl4 诱发的慢性肝损伤大鼠血清AST、ALT、AKP、HYP水平,并影响相关炎症指标IL-4、IL-6、TNF-α和MDA水平,对SOD活性无影响,可延缓肝损伤进程,缓解肝脏胶原沉积及炎症浸润,对大鼠慢性肝损伤缓解作用显著.CGE可以抑制肝脏组织中α-SMA、TLR4 蛋白的表达,体外逆转HSC-T6 中增加的TGF-β1/Smad、Fn和TLR4 相关表达.上述结果表明,CGE可通过抑制HSC活化发挥对大鼠肝保护作用,缓解CCl4 诱导的大鼠慢性肝损伤,同时改善大鼠肝组织炎症反应及轻微肝纤维化,其药效机制可能与TGF-β1/Smad和TLR4 相关表达有关.

目的 研究毛菊苣正丁醇萃取部位(Cichorium glandu-losum N-butanol extraction site,CGE)对大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的保护作用并测定其主要有效成分母菊素的含量.方法 采用HPLC法测定CGE中母菊素的含量及方法学考察;大鼠随机分为正常组,模型组,CGE低、中、高剂量组,姜黄素组,除正常组大鼠背部sc生理盐水外,其余各组大鼠按体质量剂量sc 40％CCl4橄榄油溶液建立HF模型,每周2次,连续12周,于第5周起,对相应给药组的大鼠在每日同一时间ig相应剂量的药物.12周后取肝脾组织及血清,检测肝脾指数及相关血清指标;观察肝脏病理组织学变化;采用免疫组化染色法和Western blot法考察肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7及α-SMA的蛋白表达.结果 母菊素在CGE中的含量为7.69％;模型组大鼠肝功能严重受损,出现炎症细胞浸润及纤维蛋白,提示HF模型建立成功;与模型组比较,各给药组可明显降低肝脾指数及血清中的AST、ALT、LDH、γ-GT、AKP和MDA水平,明显改善肝组织病理损伤程度,能够有效抑制HF大鼠肝组织的TGF-β1、Smad3、α-SMA的蛋白表达,上调Smad7蛋白表达.结论 CGE主要成分是母菊素,CGE对CCl4诱导的大鼠HF具有保护作用,其作用机制可能与阻断TGF-β1/Smads信号转导通路有关.

目的 建立维吾尔药毛菊苣及其易混品菊苣的位点特异性PCR鉴别方法.方法 采集不同地理区域的毛菊苣及其易混品,提取样品基因组总DNA.通过对其叶绿体rbcL基因片段进行扩增、测序,进行多重序列比对后根据其变异位点设计位点特异性鉴别引物,对其反应条件进行优化,确定检出限,建立位点特异性PCR鉴别方法.结果 建立的位点特异性PCR鉴别体系优化结果为30 μL反应体系包含Taq酶0.25 U、10×buffer 2.5 μL、dNTP 2.0 μL、正、反向引物各0.5 μL、总DNA 2 μL、ddH2O 22.25μL.适宜的扩增条件为94℃预变性3 min;94℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸1min,32个循坏;最后72℃延伸7min.对20份毛菊苣与菊苣药材进行扩增,其中毛菊苣能够扩增出约230 bp目的片段条带,而菊苣样品则不能扩增出明显的目的条带.结论 建立并优化了毛菊苣及其易混品菊苣位点特异性PCR鉴别技术,能够准确而可靠的达到2种药材的有效鉴别.

目的 研究毛菊苣总倍半萜有效部位、脂质体和磁性纳米脂质体在小鼠体内的组织分布和靶向效果.方法 采用高效液相色谱法,以山莴苣素的含量为评价指标,研究毛菊苣总倍半萜有效部位溶液组、脂质体溶液组和磁性纳米脂质体溶液组(加磁场)在小鼠体内不同组织器官的药物浓度;并以AUC0-12h、平均滞留时间(MRT)和靶向效率(TE)、相对靶向效率(RTE)、靶向指数(TI)为指标评价不同剂型的靶向作用.结果 尾静脉注射给药10 min后,磁性纳米脂质体组在心、肝、脾、肺、肾脏组织中山莴苣素浓度较有效部位组、脂质体组显著提高;在动物的肝部体外施加磁场,磁性纳米脂质体组肝部位的AUC0-12 h明显高于其他部位,MRT明显的延长,差异具有显著性(P＜0.01);TE仅在肝部有增加,且TI大于10.结论 在外加磁场的作用下,毛菊苣总倍半萜磁性纳米脂质体可改变药物在动物体内的分布,延长药物的作用时间,提高药物在肝部位的特异性和靶向性.

目的 采用超滤亲和-液质联用(Ultra-filtration affinity-liquid chromatography-mass spectrometry,UF-LC-MS)和分子对接技术筛选毛菊苣Cichorium glandulosum根中α-葡萄糖苷酶抑制剂.方法 通过超滤亲和-液质联用技术筛选并鉴定毛菊苣根中的α-葡萄糖苷酶抑制剂,发现有4个组分对α-葡萄糖苷酶的活性具有抑制作用,进一步采用分子对接技术对这4个化合物进行验证.结果 发现2个化合物对α-葡萄糖苷酶具有较高的抑制作用,其中黄芩苷、山莴苣苦素在0.1～2.0 mg/mL呈良好的量效关系.结论 为利用UF-LC-MS和分子对接技术筛选天然产物中α-葡萄糖苷酶抑制剂提供了参考,也为后续研究毛菊苣降糖功效提供了基础.

目的 建立HPLC法同时测定毛菊苣根和种子中秦皮甲素、绿原酸、秦皮乙素、咖啡酸、芦丁、菊苣酸和槲皮苷7种化学成分的含量.以7种化合物的含量为考察指标,优化毛菊苣的提取工艺参数.方法 采用Supersil ODS-B色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈(A)-2 mL· L-1甲酸水溶液(B),梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;检测波长为330 nm;柱温为30℃.在单因素实验基础上,以7种化合物的含量之和为指标,分别采用单因素考察和L9 (34)正交实验法优化提取次数、甲醇体积分数、提取时间和提取温度等提取工艺参数.结果 秦皮甲素、绿原酸、秦皮乙素、咖啡酸、芦丁、菊苣酸和槲皮苷质量浓度分别在0.010 0～0.2000,0.0200～0.4000,0.0150～0.3000,0.0040～0.0800,0.0175～0.3500,0.0500～1.0000和0.075 0～1.500 0 mg·mL-1范围内线性关系良好,相关系数为0.999 6～0.999 9,平均加样回收率为95.0％～102.1％,平均RSD值均小于3.5％.最佳提取条件为料液比1∶25,甲醇体积分数为85％,温度为40℃,超声提取2次,每次20 min.结论 该含量测定方法结果准确,重复性良好,提取工艺简便可行,可为毛菊苣多指标成分的质量控制和药材质量评价提供依据.毛菊苣种子中7种化合物的总含量高于毛菊苣根中的总含量,其中绿原酸和槲皮苷含量较高.

毛菊苣在维吾尔族民间被用于治疗非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)和2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus),但其治疗2型糖尿病伴随非酒精性脂肪肝(T2DM-NAFLD)的作用机制尚不明确.本研究通过动物实验对毛菊苣提取物治疗T2DM-NAFLD的作用进行研究(本动物实验经石河子大学医学院第一附属医院实验动物伦理审查委员会批准);运用系统药理学筛选并预测毛菊苣治疗T2DM-NAFLD的靶点、通路和疾病,构建和分析化合物-靶点-通路和化合物-靶点-疾病关系网络.动物实验表明,毛菊苣提取物可改善T2DM-NAFLD大鼠的血糖血脂水平,增加糖耐量并减轻肝损伤.通过系统药理学筛选得到毛菊苣中29个可能的活性成分、198个靶点,其中涉及T2DM的靶点106个,涉及NAFLD的靶点88个,T2DM和NAFLD共有的靶点56个,这些靶点主要参与代谢通路、钙信号通路、PI3K/Akt信号通路、cAMP通路、MAPK通路等,与胰岛素抵抗和炎症有关.毛菊苣可能是治疗T2DM-NAFLD的候选草药,本工作为研究多靶点植物药治疗多种疾病提供了系统药理学角度的参考.

目的 研究新疆和田地区不同来源毛菊苣药材(根、种子)的质量.方法 取新疆和田地区不同来源毛菊苣根(10批)和种子(12批),采用原子荧光法测定Se和As的含量,采用原子吸收分光光度法测定Fe、Ca、Mn、Mg、Cu、Al、Cd和Pb的含量.按《中国药典》(2015年版)方法测定总灰分、酸不溶性灰分、水分、醇溶性浸出物和水溶性浸出物.采用Matlab2018B软件对上述15个指标的测定数据进行灰色关联度分析(grey relational analysis,GRA).结果 新疆和田地区不同来源毛菊苣根(10批)和种子(12批)之间无机元素含量差异较大,含量最高的为钙,含量最低的为硒;且种子中微量元素(Fe、Ca、Mn、Mg、Se)含量高于根,重金属及有害元素(Cu、Al、Cd、As、Pb)含量低于根.总灰分、酸不溶性灰分、水分、醇溶性浸出物和水溶性浸出物均符合《中国药典》(2015版)标准.GRA灰色关联度结果显示新疆和田地区毛菊苣药材根的质量优于种子,但种子的质量更加稳定.结论 本研究为毛菊苣药材的质量评价提供科学依据.