目的 筛选中药黄芩中血管紧张素转换酶2(ACE2)和二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂.方法 以ACE2和DPP-4作为靶蛋白,利用受体配体亲和超滤和液质联用技术,对黄芩中与ACE2和DPP-4亲和的化合物进行筛选和分析,以筛选具有同时抑制ACE2和DPP-4的化合物.结果 从黄芩中筛选出了 5,7,2',6'-4羟基黄酮、5,7,2',5'-4羟基.8,6'-二甲氧基黄酮、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素-6-O-葡萄糖醛酸苷、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、白杨素、千层纸素A,可以同时亲和抑制ACE2和DPP-4,具有潜在的抗新型冠状病毒的作用.结论 从黄芩中筛选出与新型冠状病毒肺炎有关的靶蛋白抑制剂,具备潜在开发价值.

目的:以大肠埃希菌桶状蛋白组装复合物的核心组分BamA和BamD作为靶点，从甘草提取物中进行抗菌活性成分的筛选，以应对日益严峻的抗生素耐药问题。方法:使用亲和超滤联合高效液相色谱-质谱(high performance liquid chromatography-mass spectrometry，HPLC-MS)技术，从甘草提取物中筛选能够与BamA和BamD相互作用的化合物。用荧光定量PCR检测化合物处理后大肠埃希菌外膜蛋白 bamA和 bamD基因表达量的变化，并且利用离体重组系统检测化合物对于β桶状蛋白组装(β-barrel assembly machinery, BAM)复合物整合外膜蛋白功能的影响，最后利用SDS在细菌细胞内的积累情况检测化合物处理过后细菌细胞膜完整性变化。 结果:生物亲和超滤联合HPLC-MS筛选发现18β-甘草次酸可以与BamD发生相互作用，经18β-甘草次酸处理后，大肠埃希菌 bamA基因表达水平升高1.5倍， bamD基因表达水平升高2倍，但是，离体重组系统检测未观察到18β-甘草次酸对BAM复合物的插膜功能具有抑制效果，细胞膜完整性检测实验也未发现18β-甘草次酸对于大肠埃希菌细胞膜的破坏。 结论:以BamA和BamD蛋白作为靶点，建立了使用亲和超滤联合HPLC-MS进行天然产物筛选的方法。筛选得到18β-甘草次酸能够与BamD相互作用并能够影响大肠埃希菌外膜蛋白的表达，故本研究所建立的筛选和实验流程对于以外膜蛋白为靶点的、其他来源的新型抗菌药物的筛选具有良好的借鉴价值，且本研究也提示在筛选过程中，相关靶点的选择对成功筛选到相应的天然产物至关重要。

目的 构建唾液酸免疫球蛋白凝集素1(Siglec-1)原核表达载体,表达纯化Siglec-1重组蛋白,构建超滤亲和-液质联用技术(UF-LC-MS)筛选Siglec-1蛋白天然配体.方法 利用DNA重组技术构建Siglec-1重组蛋白原核表达载体,转化到BL21(DE3)感受态细胞中表达Siglec-1重组蛋白,通过Ni柱亲和色谱柱进行蛋白纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分析Siglec-1重组蛋白纯度.建立UF-LC-MS技术研究金银花、甘草、迷迭香、菊苣中6个主要组分绿原酸、迷迭香酸、阿魏酸、甘草酸、甘草次酸、菊苣酸对Siglec-1蛋白的亲和力,通过比较样品组和蛋白变性组超滤液中待测物的峰面积,计算各待测物特异结合率.结果 经双酶切及测序鉴定证明,重组表达质粒pET-22b-Siglec-1-His构建正确;纯化的人Siglec-1重组蛋白质量分数达90％以上;建立了UF-LC-MS筛选体系,筛选出甘草次酸可与Siglec-1蛋白特异性结合.结论 成功表达了高纯度、高产量的人Siglec-1重组蛋白,筛选出甘草次酸可与Siglec-1蛋白特异性结合.

目的 采用亲和超滤-液质联用技术筛选补骨脂Psoralea Fructus中治疗子宫内膜癌的潜在活性成分.方法 以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor erbB1,EGFR)为靶蛋白,将补骨脂水提液和EGFR蛋白液共同孵育,利用基于亲和超滤原理的超速离心法和解离剂对活性配体进行分离和筛选,借助超高效液相色谱-四级杆飞行质谱技术对与EGFR蛋白亲和的补骨脂化学成分进行鉴定,并通过计算结合变化率比较活性成分与蛋白之间的结合能力.结果 共筛选得到4 种与EGFR亲和的补骨脂活性成分,通过对结合变化率进行比较,发现psorachalcone A与EGFR蛋白结合变化率最大.结论 该研究为补骨脂防治子宫内膜癌的药效物质基础和作用机制研究提供了理论依据.

通过亲和超滤技术捕集藏药短管兔耳草总提取物中潜在的XOD抑制剂成分,随后运用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术快速鉴定捕集成分结构.应用Autodock 4.2分子对接软件研究捕集成分与XOD结合作用强弱与结合机制.结果共鉴定出17个化合物,其中黄酮类成分9个,酚酸类成分5个,三萜类成分3个.分子对接结果表明捕集成分均可与XOD自发结合,其结合方式主要以氢键、范德华力及疏水作用力为主.从结合能与打分函数看,所捕集成分均具有潜在的XOD抑制剂开发前景,其中黄酮类化合物木犀草素-3',7葡萄糖醛酸苷效果最优.研究结果表明联用亲和超滤、超高效液相色谱-质谱(UF-UPLC-MS)及分子对接技术可为天然产物中XOD抑制剂成分的解析提供有力工具.

目的 采用超滤亲和-液质联用(Ultra-filtration affinity-liquid chromatography-mass spectrometry,UF-LC-MS)和分子对接技术筛选毛菊苣Cichorium glandulosum根中α-葡萄糖苷酶抑制剂.方法 通过超滤亲和-液质联用技术筛选并鉴定毛菊苣根中的α-葡萄糖苷酶抑制剂,发现有4个组分对α-葡萄糖苷酶的活性具有抑制作用,进一步采用分子对接技术对这4个化合物进行验证.结果 发现2个化合物对α-葡萄糖苷酶具有较高的抑制作用,其中黄芩苷、山莴苣苦素在0.1～2.0 mg/mL呈良好的量效关系.结论 为利用UF-LC-MS和分子对接技术筛选天然产物中α-葡萄糖苷酶抑制剂提供了参考,也为后续研究毛菊苣降糖功效提供了基础.

液质联用技术将液相色谱的高分离能力与质谱的强大结构鉴定功能等优势结合,成为中药现代化研究中的强有力手段.中药药效物质基础研究是中药现代化研究的关键点之一.本文旨在总结概述近年来液质联用技术在中药化学成分、中药血清化学、中药代谢组学、中药指纹图谱、中药细胞膜色谱及亲和超滤质谱等方面得到的应用,为进一步扩大应用提供参考.

目的 建立从天然药物中快速发现乙酰胆碱酯酶抑制剂的有效方法,为中药及其活性成分治疗阿尔茨海默病提供支持.方法 通过Ellman比色法,对多种药用植物乙醇提取物的抗乙酰胆碱酯酶活性进行评价,筛选出活性较好的提取物样品,应用亲和超滤超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术分离鉴定其中的活性成分.结果 元胡、黄柏、钩藤、血三七具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.经过快速筛选,发现3-二氢异卡丹宾或者3-二氢卡丹宾、钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛或异柯诺辛可能为钩藤中的活性化合物.结论 采用亲和超滤UPLC-Q-TOF/MS联用技术从天然药物中快速筛选出乙酰胆碱酯酶抑制剂,方法可行、快速,能够为治疗阿尔茨海默病的新药开发提供先导化合物.

体内血清尿酸浓度长期过高时,可诱发痛风并引起一系列代谢性疾病.近20年来,由于生活水平的不断提高及饮食结构的改变,高尿酸血症及痛风的发病率不断增高.降低血清尿酸水平是高尿酸血症与痛风防治的首要方法,但目前临床应用的降尿酸西药均具有较严重的毒副作用.降尿酸中草药在长期的使用过程中安全有效,随着现代科学技术的迅速发展,应用及开发不同筛选方法从这些中草药中寻找高效、安全的药效物质已成为高尿酸血症及痛风防治药物研究的热点.本文对降尿酸中草药提取物、提取物部位及活性单体成分等药效物质筛选方法进行了综述,发现降尿酸药效物质筛选方法主要有体内法和体外法,体内法主要应用于筛选药材提取物降尿酸活性与机制,体外方法多用于单体活性成分筛选且以黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制剂筛选为主,分子对接联用同源建模及亲和超滤联用液质联用(AUF-LC-MS)技术已成为促尿酸排泄成分及XOD抑制剂筛选的新趋势,而体外细胞模型将为促尿酸排泄药中草药药效物质筛选开辟新途径.综述为高尿酸血症及痛风的中草药药药效物质筛选及药物开发提供了一定的参考依据.

利用超高效液相-质谱联用技术(UPLC-MS)对红三叶草乙醇提取物中化学成分进行分析鉴定,以环氧合酶-2作为生物靶分子,运用超滤质谱技术以“受体-配体”亲和及超滤法作为分析方法筛选具有酶抑制,共鉴定出7个活性化学成分,分别为大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、印度黄檀苷、芒柄花素、德鸢尾素、鹰嘴豆芽素A.利用半制备型高效液相色谱(Semi-preparative HPLC)和高速逆流色谱(High-speed counter-current chroma-tography,HSCCC)技术对环氧合酶-2抑制剂进行分离和纯化,7种成分纯化至＞80％,其中6种成分＞92％.结果 表明采用超滤质谱-半制备液相色谱-高速逆流色谱联用技术可以快速鉴定、筛选和纯化红三叶草中环氧合酶-2抑制剂.为天然药物的开发提供了理论基础和技术平台,可推广应用于其他酶抑制剂的鉴定和分离.