目的 探讨阴道微生态与人乳头瘤病毒(HPV)感染基因分型在子宫颈高危型HPV感染中的检测价值.方法 选取2021年5月至2023年5月中国人民解放军海军第九七一医院和青岛市市立医院东院区收治的276例子宫颈高危型HPV感染阳性患者作为观察组.选取同期进行体检且宫颈癌筛查及宫颈HPV筛查阴性的224例健康女性作为对照组.采集阴道分泌物进行阴道微生态检测,采用液态芯片技术分析HPV基因分型,比较HPV基因分型占比及阴道微生态分布情况.结果 观察组HPV基因分型占比前5 位分别为 HPV52(22.10％)、HPV16(15.22％)、HPV18(14.13％)、HPV33(9.06％)、HPV56(9.06％).与对照组比较,观察组细菌性阴道病(BV)阳性率、乳酸杆菌减少率更高,差异具有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,观察组pH及白细胞酯酶、唾液酸酶、脯氨酸氨基肽酶、凝固酶阳性率更高,差异具有统计学意义(P＜0.05);两组清洁度、过氧化氢酶、葡萄糖苷酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶阳性率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 宫颈高危型HPV感染分型以HPV52、HPV16、HPV18、HPV33、HPV56为主,宫颈高危型HPV感染阳性患者的pH及BV阳性、白细胞酯酶、唾液酸酶、脯氨酸氨基肽酶、凝固酶阳性率更高.

目的 探讨钠-葡萄糖协同转运蛋白 2 抑制剂联合葶苈子治疗对心力衰竭(心衰)合并肺部感染患者心功能、消化功能及肺功能的影响.方法 选取秭归县中医院 2017 年 8 月至 2019 年 3 月收治的 168 例心衰合并肺部感染患者作为研究对象.根据治疗方法不同将患者分为观察组和对照组,每组 84 例.对照组接受钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂联合头孢他啶治疗,观察组在对照组基础上接受葶苈子治疗,共治疗30 d.比较两组治疗前后营养状态指标[血清前白蛋白(PA)、白蛋白(ALB)、红细胞计数(RBC)、体质量指数(BMI)]、免疫功能指标[分化簇抗原(CD3、CD4、CD8)、免疫球蛋白(IgG、IgM)]、血清炎症因子[白细胞介素(IL-8、IL-10、IL-17)及肿瘤坏死因子(TNF-α)]、肠道菌群(肠球菌、大肠埃希菌、乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、消化球菌)、心肺功能指标[动脉血氧饱和度(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、心率、最大摄氧量(VO2max)、最大运动负荷(Wmax)、最大氧脉搏、无氧阈值(AT)、第 1 秒用力呼气容积/用力肺活量比值(FEV1/FVC)、FEV1 和每分最大通气量(MVV)].结果 两组治疗后PA、ALB、RBC、BMI、CD3、CD4、CD8、IgG、IgM、乳杆菌、双歧杆菌、PaO2、VO2max、Wmax、最大氧脉搏、AT、FEV1/FVC、FEV1、MVV均较治疗前明显升高,IL-8、IL-17、TNF-α、肠球菌、大肠埃希菌、PaCO2、心率水平均较治疗前明显降低,且观察组治疗后PA、ALB、RBC、BMI、CD3、IgG、IgM、IL-10、双歧杆菌、乳酸菌、PaO2、VO2max、Wmax、最大氧脉搏、AT、FEV1/FVC、FEV1、MVV水平均明显高于对照组[PA(mg/L):259.69±20.73 比 217.69±20.73,ALB(g/L):41.46±4.58 比 36.56±3.73,RBC(×1012/L):4.52±0.24 比 4.21±0.31,BMI(kg/m2):22.37±2.73 比 19.66±2.24,CD3:0.63±0.08 比0.56±0.08,IgG(g/L):21.85±3.68 比 15.72±4.36,IgM(g/L):4.68±1.68 比 3.73±1.67,IL-10(ng/L):65.28±7.23 比 50.23±6.14,双歧杆菌(CFU/kg):83.5±8.6 比 78.5±8.3,乳酸菌(CFU/kg):62.1±6.5 比 53.5±6.0,PaO2(mmHg,1 mmHg≈0.133 kPa):98.36±1.75 比 91.95±2.95,VO2max(L/min):1.71±0.35 比 1.22±0.39,Wmax(W):127.49±19.54 比 97.49±15.37,最大氧脉搏(L/次):11.27±2.42 比 9.46±2.79,AT:(50.49±7.48)%比(41.35±6.67)%,FEV1/FVC:(75.68±5.86)%比(65.48±8.54)%,FEV1:(82.44±5.73)%比(73.57±7.75)%,MVV(L/min):74.86±10.64 比 64.63±9.68,均P＜0.05],CD4、CD8、IL-8、IL-17、TNF-α、肠球菌、大肠埃希菌、PaCO2、心率水平均显著低于对照组[CD4:0.32±0.06 比 0.39±0.05,CD8:0.28±0.06 比 0.34±0.05,IL-8(ng/L):16.64±2.63 比 26.35±4.13,IL-17(ng/L):112.38±30.16 比 207.75±42.23,TNF-α(ng/L):45.27±10.23 比61.26±14.29,肠球菌(CFU/kg):63.6±5.6 比 69.5±6.8,大肠埃希菌(CFU/kg):65.8±6.4 比 70.5±7.0,PaCO2(mmHg):41.84±4.45 比 56.18±5.37,心率(次/min):75.96±11.57 比 91.75±12.68,均P＜0.05].结论 葶苈子联合钠-葡萄糖协同转运蛋白 2 抑制剂治疗心衰合并肺部感染,可有效改善患者心肺功能,降低炎症指标水平,提升患者的营养状态,纠正肠道菌群情况,对临床治疗有一定指导意义.

目的:研究羔羊胃维生素B12胶囊原料药的药效物质基础。方法:用0.9%氯化钠溶液提取，通过饱和硫酸铵沉淀，采用二乙基氨乙基纤维素52和高压液相色谱(HPLC)方法分离、纯化凝乳酶和胃蛋白酶。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和液相色谱-串联质谱测定相对分子质量。用HPLC分析原料药的氨基酸组成和抗氧化活性。依次用水、磷酸盐缓冲液和碳酸氢钠完全提取原料药，并进行体外1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2，2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基消除活性测定。利用热水提法提取原料药中的糖蛋白，测定其对青春双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、粪肠球菌的促生长活性，分别用HPLC和气相色谱-质谱方法分析其氨基酸和单糖组成。结果:纯化得到2种不同离子强度的凝乳酶F6-2、F7-2和胃蛋白酶F7-1的酶活力分别为27 557.10、17 532.60和17 728.15 U/g；SDS-PAGE分析显示3种酶的相对分子质量相似，为35 000~40 000。原料中含有16种氨基酸，其中疏水性氨基酸占总氨基酸含量的33.03%。当样品浓度为5 g/L时，3种提取物的ABTS自由基清除活力分别为(37.80±0.45)%、(23.20±0.78)%、(62.80±0.74)%; DPPH自由基清除活力分别为(57.87±0.55)%、(5.03±0.25)%和(26.67±3.10)%。糖蛋白提取物对青春双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、粪肠球菌均有促生长作用，其中对德氏乳杆菌保加利亚亚种和粪肠球菌的促进作用差异均有统计学意义( P均<0.05)。糖蛋白的蛋白质链由15种氨基酸组成，多糖链由葡萄糖和乳糖2种单糖组成。 结论:利用多种色谱方法从羔羊胃原料药中分离、分析到至少2种凝乳酶和1种胃蛋白酶成分；原料药富含抗氧化活性成分；羔羊胃中糖蛋白成分具有体外促益生菌生长活性。

患者男，86岁，因背部结节伴疼痛1个月就诊。患者1个月前无明显诱因背部出现结节，初起为鸡蛋黄大小，表面微红，有触痛，后皮损逐渐增大。患者自行口服头孢氨苄和甲硝唑并外用聚维酮碘溶液、酒精，效果欠佳，红肿加重，疼痛加剧。患者有糖尿病病史半年，未规律控制；脑梗死病史4年，现左侧肢体活动不利；有青霉素过敏史。体检：生命体征平稳，左侧肢体活动受限，肌力3级，浅表淋巴结未触及肿大。皮肤科检查：右背上部见1个长径约5 cm红色结节，表面微隆起，散在脓疱及结痂，边界欠清；皮损中央质软，触痛明显，挤压后有黄白色、脓性及血性分泌物溢出，未见"硫磺样颗粒"（图1A）。实验室检查：中性粒细胞百分比81.3%（参考值：40% ~ 75%，下同），C反应蛋白40.04 mg/L（0 ~ 5 mg/L），血白蛋白34.4 g/L（40 ~ 55 g/L），血糖9.54 mmol/L（3.9 ~ 6.1 mmol/L）。抽取脓液送细菌分离培养，3 d后在哥伦比亚血平板（法国梅里埃公司）上培养出奶油色菌落，其他微生物未生长。细菌涂片示革兰阳性杆菌。生化鉴定：耐氧试验阳性，过氧化氢酶试验阴性，脲酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，七叶苷水解试验阳性，葡萄糖苷酶阳性，半乳糖苷酶阳性，β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶阴性，不产生色素，发酵麦芽糖，不发酵甘露醇，协同凝集试验阴性。基质辅助激光解吸-飞行时间质谱仪（法国梅里埃公司）初步鉴定为欧洲放线菌。16S rRNA基因测序和比对结果显示，与欧洲放线菌（AF355191.1）的同源性为99.35%。根据CLSI的M45标准行药物敏感性试验（e-test条法），对克林霉素、阿莫西林克拉维酸钾、头孢曲松敏感，对克拉霉素耐药。

目的 研究淫羊藿总黄酮(total flavonoids of epimedium,TFE)对长双歧杆菌生长代谢的调控影响与长双歧杆菌发酵液的抗炎活性.方法 葡萄糖缺乏的MRS培养基中分别加入浓度为0.5％、1.0％、2.0％的淫羊藿总黄酮作为培养基,设置2.0％葡萄糖和2.0％低聚果糖培养基作为对照,测定发酵后长双歧杆菌的活菌数(CFU)、吸光度值等指标,以明确淫羊藿总黄酮对长双歧杆菌生长的影响,并使用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)测定发酵液的体外抗氧化活性.以LPS诱导的RAW264.7为炎症模型,评价培养前后发酵液对造模前后相关炎症因子水平以确定抗炎作用.结果 TFE能够显著促进长双歧杆菌的增殖,5mg/mL、0.5 mg/mL、0.05mg/mL TFE的促生长率分别为59％、23％、20％,24h生长曲线也表明TFE的促增殖作用.胃肠道耐受性能研究发现,在长双歧杆菌生长环境中添加2％TFE能够提高菌株在0.3％胆盐(t=6.008,P＜0.01)、人工胃液(t=4.371,P＜0.05)和pH值为3的酸性环境(t=9.645,P＜0.001)中的稳定性,并提高了菌株在含有氯四环素、克林霉素、卡那霉素、甲硝唑、万古霉素的培养基中的生长浓度和体外抗氧化能力(t=15.141,P＜0.001).此外,添加TFE的长双歧杆菌发酵液可降低LPS诱导下的巨噬细胞表达促炎因子 TNF-α(t=4.655,P＜0.01)、IL-1β(t=7.775,P＜0.01)和 IL-6(t=7.775,P＜0.01)的水平,进而改善LPS诱导的炎症反应.结论 淫羊藿总黄酮可促进长双歧杆菌的生长与菌株稳定性,并增强长双歧杆菌的抗炎活性,有成为新型中药来源益生元的潜力.

目的:分析分娩期抗生素预防性治疗对生殖道B族链球菌(GBS)定植孕妇妊娠结局及阴道菌群微生态的影响.方法:选择产检且分娩的孕妇160例为研究对象,GBS检查均为阳性,依随机分组法分为对照组和观察组,每组80例.对观察组分娩前至少4h给予抗生素预防治疗,对照组分娩前给予甲硝唑栓治疗,并记录观察组和对照组母婴结局以及阴道菌群微生态情况.结果:观察组不良结局总发生率低于对照组(P<0.05).治疗后观察组GBS、白细胞酯酶、唾液酸酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶、过氧化氢酶检出率较对照组低,阴道菌群密集Ⅱ～Ⅲ度、乳杆菌和清洁度Ⅰ～Ⅱ级检出率较对照组高(P<0.05～P<0.01).观察组孕妇的治疗总有效率为98.75％,高于对照组总有效率83.75％(P<0.01).结论:分娩期抗生素预防性治疗对GBS定植孕妇妊娠结局有良好的改善作用,可以改善阴道菌群微生态环境.

[背景]研究发现维生素 C(vitamin C,VC)对嗜酸乳杆菌 GIM1.208 β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BGL)具有明显激活作用.[目的]探究VC对BGL的影响特性以及二者互作关系.[方法]通过对硝基苯酚法、电化学法、Zeta电位法及核磁共振氢谱法研究VC对BGL的活性影响及互作特性.[结果]VC对BGL催化底物活性具有明显促效作用,Km=1.167 mmol/L,Vmax随着VC浓度增大而增大;VC浓度为 3.5%时酶活性达到最高;在VC浓度为 3.5%、温度低于 30℃时,酶活性受温度影响较小,VC对BGL具有良好的稳定作用,相对酶活保持在 90%以上.VC与BGL结合,两者存在弱静电作用且两者的相互作用使得VC的电氧化反应变得更加容易,同时推测VC分子中乙二醇支链片段与BGL之间存在氢键作用.[结论]VC对BGL具有明显激活作用,试验探究了两者作用力类型及作用位点,为BGL应用及天然酶激活剂的高效利用提供设计理论参考.

目的:建立结核杆菌侵染破骨细胞(osteoclasts,OC)模型,探讨结核杆菌侵染OC后对骨质破坏相关因子表达的影响.方法:采集健康志愿者的外周全血,分离出外周全血中的单核细胞(peripheral blood mononu-clear cells,PBMCs),利用核因子 κB 受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-KB ligand,RAN-KL)以及巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-colony stimulating factor,M-CSF)诱导使其成为OC,对细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色.将已经构建好的具有卡那霉素(Kana)抗性的H37Rv pMV261-GFP绿色荧光结核菌株进行复苏并加入10％的油酸、白蛋白、葡萄糖和过氧化氢酶添加剂(oleic albumin dextrose catalase,OADC)、7H9以及含卡那霉素的结核杆菌专用液体培养基进行培养,放置于37℃的恒温箱中培养至光密度(optical density,OD)值为600nm时的0.5左右备用;以单纯OC培养为空白对照组;用结核杆菌以不同转染复数(multiplicity of infection,MOI)侵染OC 24h,采用MTT比色法检测细胞存活率最高的MOI为后续实验MOI,使用H37Rv以此MOI侵染OC为实验组;荧光显微镜及结核杆菌抗酸染色分别观测实验MOI时结核杆菌转染情况.实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测非受体酪氨酸激酶(C-src)、蛋白激酶 K(cathepsin K,CK)、碳酸酐酶 2(carbonic anhydrase 2,CA2)、整合素-β3(integrin-β3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达情况;免疫组化(im-munohistochemistry)检测磷酸化酪氨酸激酶产物(P-src)、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的细胞表面蛋白表达情况;蛋白免疫印迹(western blot,WB)检测P-src、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的蛋白表达水平.结果:TRAP染色显示细胞培养15d后90％以上为OC,可以用于进行实验.荧光结核杆菌成功将其OD值培养为600nm时的0.5.MTT比色法结果显示:在MOI为20:1时细胞存活率最高(P＜0.05),此为实验组MOI;结核杆菌侵染OC后荧光显微镜显示:MOI为20:1时,绿色荧光标记的结核杆菌进入OC,说明成功转染OC;结核杆菌侵染OC后抗酸染色结果显示:MOI为20:1时,被染成红色的抗酸结核杆菌进入OC,说明结核杆菌H37Rv成功转染OC.qRT-PCR、细胞免疫组化、WB检测结果均显示:MMP-9、CK、C-src、CA2、Integrin-β3的表达实验组均高于空白对照组(P＜0.05).结论:结核分枝杆菌能够转染OC;与空白对照组相比,结核杆菌转染OC的实验组中5种具有骨质破坏作用因子均升高,提示结核骨质破坏可能与此相关,为骨结核疾病诊疗提供新的探索方向.

微生物细胞在自然环境或工业应用中经常受到酸胁迫,严重制约细胞生长性能和产物合成效率.为了在各种酸性环境中生存,耐酸细菌发展出多种保护机制来维持细胞内pH稳态,如氢离子消耗、细胞膜保护、代谢修饰等.因此,深入研究耐酸机制、改进菌株耐酸能力对于利用微生物发酵合成高附加值产品具有重要意义.作为模式微生物,大肠杆菌耐酸机制的研究较为透彻,近年来其耐酸性改造也取得了重大进展.本文主要总结了大肠杆菌的氧化或葡萄糖抑制系统(acid resistance system 1,AR1)、谷氨酸依赖型耐酸系统(acid resistance system 2,AR2)、精氨酸依赖型耐酸系统(acid resistance system 3,AR3)、赖氨酸依赖型耐酸系统(acid resistance system 4,AR4)和鸟氨酸依赖型耐酸系统(acid resistance system 5,AR5)、细胞膜保护以及生物大分子修复等方面的耐酸机制,并概述了利用传统代谢工程、全局转录工程和适应性实验室进化等方法构建大肠杆菌耐酸菌株的研究进展,同时展望了大肠杆菌耐酸机制及其改造的后续研究方向.

目的 评估阴道微生态与人乳头瘤病毒(HPV)感染和宫颈病变发生的相关性.方法 选取薄层液基细胞学(TCT)初筛结果异常患者772例,按照病变的程度实行分级,并分析感染高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)情况.选取同期TCT初筛未见上皮内病变细胞和恶性细胞(NILM)且HPV分型为阴性的患者156例.将所有患者分为TCT异常HPV阳性患者、TCT异常HPV阴性患者、TCT正常HPV阴性患者,均行阴道微生态检查.评估阴道微生态状况与HR-HPV感染和宫颈病变之间的相关性.结果 772例TCT结果异常患者中HPV感染率为48.06％;其中多种型别感染占HPV感染者的22.37％;感染率较高的亚型依次为HPV52、HPV16、HPV58.772例患者中,高级别鳞状上皮内病变(HSIL)患者HPV感染率高于低级别鳞状上皮内病变(LSIL)患者和无明确诊断意义的不典型鳞状细胞(ASCUS)、不典型腺上皮细胞(AGC)患者,差异有统计学意义(P＜0.05).阴道微生态研究中,TCT异常HPV阳性患者唾液酸酐酶阳性率、白细胞酯酶阳性率、细菌性阴道病(BV)患病率与TCT异常HPV阴性患者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).TCT异常HPV阳性患者过氧化氢、唾液酸酐酶、白细胞酯酶、β-葡萄糖醛酸酶、凝固酶阳性率、BV、需氧菌性阴道炎(AV)、阴道混合感染患病率、阴道微生态失调比例、清洁度(Ⅲ～Ⅳ)占比、乳酸杆菌阳性率与TCT正常HPV阴性患者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).过氧化氢、唾液酸酐酶、白细胞酯酶阳性、BV、混合感染、阴道微生态失调、清洁度(Ⅲ～Ⅳ)是HR-HPV阳性和/或宫颈细胞学异常的危险因素(OR＞1,P＜0.05),乳酸杆菌阳性是HR-HPV阳性和/或宫颈细胞学异常的保护因素(OR＜1,P＜0.05).结论 阴道微生态与HR-HPV感染和宫颈病变有相关性,阴道微生态失衡更易导致HR-HPV感染,促进宫颈病变的发生发展.