目的:探讨去泛素化酶USP7/USP47特异性小分子抑制剂(Cat. No. 1247825-37-1)对Flt3-ITD突变及非突变急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用ATP法检测1247825-37-1对Flt3-ITD突变AML细胞系MOLM13和MV4-11，以及Flt3-ITD非突变AML细胞系THP-1的影响；检测1247825-37-1对患者原代Flt3-ITD突变及非突变AML细胞增殖活性的影响；流式细胞术检测不同浓度1247825-37-1对Flt3-ITD突变及非突变AML细胞系凋亡的影响。结果:与对照组相比，1247825-37-1对Flt3-ITD突变及非突变的AML细胞系MOLM13、MV4-11以及THP-1均具有显著的增殖抑制作用( P<0.000 1)；1247825-37-1对于Flt3-ITD突变及非突变的AML患者原代细胞同样具有显著的增殖抑制作用，但对于Flt3-ITD非突变的原代细胞的抑制作用更强；1247825-37-1对AML细胞系的增殖抑制作用具有剂量依赖性，低剂量(2、4 μmol/L)的1247825-37-1就能发挥作用；1247825-37-1能诱导上述AML细胞系发生凋亡，且具有显著的剂量依赖效应。 结论:USP7/USP47抑制剂1247825-37-1能够显著抑制Flt3-ITD突变及非突变AML细胞的增殖。

目的:探讨自噬抑制剂Spautin-1对小鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后焦虑样行为的影响及其机制。方法:36只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术组、TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组，每组12只。后2组小鼠采用改良的Feeney自由落体硬膜外撞击法建立TBI模型。造模后10 min，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠侧脑室注射2 μL Spautin-1溶液(10 mmol/L)，另外2组注射等量溶剂。造模后1、7、14 d采用神经系统症状评分(NSS)评估小鼠的运动、感觉和反射功能。造模后15、16 d分别采用旷场实验、高架十字迷宫实验评估小鼠的焦虑样行为。造模后16 d采用尼氏染色检测小鼠杏仁核区尼氏小体的数量，免疫荧光染色检测小鼠杏仁核区神经元特异性核蛋白(NeuN)阳性细胞数、白细胞介素(IL)-18及IL-1β阳性星形胶质细胞数，Western blotting实验检测小鼠杏仁核区自噬、焦亡相关蛋白的表达。结果:(1)造模后1、7 d，与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠的NSS评分增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)造模后15、16 d，与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠旷场实验的跨格次数、中央区停留时间百分比下降，高架十字迷宫实验的进入开放臂次数(OE)百分比、开放臂停留时间(OT)百分比下降；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠的跨格次数、中央区停留时间百分比、OE百分比、OT百分比升高，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区尼氏小体、NeuN阳性细胞数减少；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区尼氏小体、NeuN阳性细胞数增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。(4)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区IL-1β、IL-18阳性星形胶质细胞百分比增加；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区IL-1β、IL-18阳性星形胶质细胞百分比减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。(5)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、成孔蛋白D-N末端片段(GSDMD-N)、泛素特异性肽酶(USP)13及B淋巴细胞瘤-2相互作用蛋白(Beclin1)的表达上调，微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ值升高；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区NLRP3、活化Caspase-1、GSDMD-N、USP13、Beclin1蛋白的表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:自噬抑制剂Spautin-1能够改善小鼠TBI后的焦虑样行为，其机制可能与抑制小鼠杏仁核区星形胶质细胞的自噬依赖性焦亡相关。

目的 探究泛素特异性蛋白酶7(USP7)抑制剂FT671在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的H9c2细胞肥大中的作用和潜在机制.方法 将H9c2细胞随机分为四组:对照组、FT671组、AngⅡ组、FT671+Ang Ⅱ组.利用α-actinin细胞免疫荧光染色检测心肌细胞表面积;Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)以及NADPH氧化酶4(Nox4)的蛋白表达水平;RT-PCR检测ANP、BNP、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、IL-6、MCP-1、TNF-α的mRNA表达;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;细胞计数试剂8(CCK8)实验检测各组细胞活力;活性氧(ROS)染色检测细胞内氧化损伤水平.结果 与对照组相比,AngⅡ组USP7蛋白表达明显增加,而使用FT671后,USP7表达明显被抑制.与Ang Ⅱ组相比,FT671+Ang Ⅱ组心肌细胞面积减小;ANP、BNP、Bax的蛋白表达减少,ANP、BNP、β-MHC、Bax、IL-6、MCP-1以及TNF-α的mRNA表达减少;Bcl-2的蛋白和mRNA表达均增加.与AngⅡ组相比,FT671+Ang Ⅱ组TUNEL阳性细胞明显减少,心肌细胞活力增强,ROS生成减少,Nox4、NLRP3蛋白表达减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 FT671通过抑制Nox4/ROS/NLRP3炎症通路减轻AngⅡ诱导的心肌细胞中的氧化应激和炎症反应,从而减轻心肌细胞肥大.

目的 研究硫氢化钠(NaHS)是否通过调节谷胱甘肽(GSH)的合成,降低活性氧自由基(ROS)产生,改善小鼠 2 型糖尿病心肌病(DCM).方法 将小鼠心房肌细胞系HL-1 分为对照组、高葡萄糖(HG:40 mmol/L)和棕榈酸(Pal:500 μmol/L)处理组;以及硫氢化钠(NaHS,100 μmol/L)、DL-炔丙基甘氨酸[PPG,胱硫醚 γ裂解酶(CSE)抑制剂,1 mmol/L]和 N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,ROS抑制剂,5 mmol/L)处理 72h组.Western blot检测CSE和谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达;二氢乙锭(DHE)和二氯氟甲烷(DCFH)检测ROS含量;免疫共沉淀检测核因子红细胞系2 相关因子2(Nrf2)泛素化水平及Nrf2 与肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)的相互作用.结果 与对照组比高糖高脂处理HL-1 细胞后CSE、溶质载体家族 7 成员 11(SLC7A11)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基C(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基M(GCLM)、谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达水平下降,而NaHS能恢复其表达.高糖高脂组ROS含量高于NaHS组.与NaSH组比高糖高脂条件下Murf1 与Nrf2 的相互作用增加,Nrf2 泛素化水平明显增加.结论 硫氢化钠减轻Nrf2 的泛素化,增加GSH合成关键酶的表达.

目的 探讨miR-939-5p对泛素特异肽酶22(USP22)基因表达的调控作用及对肝癌迁移和增殖的影响.方法 采用荧光定量PCR (qPCR)检测肝癌细胞株(HepG2、MHCC-97H、SMMC-7721、BEL-7404和Huh7)和正常肝细胞株LO2中miR-939-5p的表达.以表达量最低的肝癌细胞为实验对象,转染miR-939-5p(实验组)或miR-NC(对照组).qPCR检测miR-939-5p的转染效率.Transwell迁移实验和四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)增殖实验检测miR-939-5p对肝癌细胞迁移和增殖能力的变化.生物信息学软件预测miR-939-5p的靶基因.双荧光素酶报告基因验证miR-939-5p与靶基因的相互作用.qPCR和Western blotting检测高表达miR-939-5p后靶基因在mRNA和蛋白水平的表达.计量数据以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验.结果 肝癌细胞株中miR-939-5p的表达均明显低于正常肝细胞(P＜0.01),SMMC-7721细胞中miR-939-5p的表达最低(P＜0.01).miR-939-5p可有效转染进入SMMC-7721细胞内[(1.01±0.07)比(20.12±1.27),P＜0.01].高表达miR-939-5p可抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移能力(P＜0.01)和增殖能力(P＜0.05).USP22基因可能为miR-939-5p的靶基因.荧光素酶报告基因证实miR-939-5p能与USP22 mRNA的3'-UTR特异性结合(P＜0.01).高表达miR-939-5p后USP22在mRNA和蛋白水平上表达降低(P＜0.01).结论 miR-939-5p在肝癌细胞株中表达降低,可抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移和增殖能力,其分子机制为靶向干扰USP22基因的表达.

目的 探讨泛素特异性蛋白酶2(ubiquitin specific protease 2,USP2)在心肌肥厚发生和发展中的作用.方法 使用荧光定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot检测异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的小鼠心肌肥厚模型中USP2的表达改变;腺病毒介导的RNA干扰技术干扰乳大鼠心肌细胞USP2的表达.使用Image J软件分析USP2对心肌细胞大小的影响,qRT-PCR检测USP2对心肌肥厚相关基因心钠素(atriopeptin,ANP),肌球蛋白重链7(myosin heavy chain 7,MYH7)和脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)转录水平的影响.结果 ISO诱导的小鼠心脏组织中ANP、BNP及MYH7的表达上调,说明成功构建心肌肥厚小鼠模型.USP2的mRNA和蛋白在心肌肥厚的心脏组织中表达增加;干扰USP2可以降低乳大鼠心肌细胞的面积,并抑制ANP、BNP及MYH7的表达.结论 USP2可以促进心肌肥厚的发生和发展.

目的 探讨大剂量维生素C和维生素E对急性颅脑损伤病人神经损伤、神经营养及氧化应激的影响.方法 2018年1月至2018年11月前瞻性收集84例急性颅脑损伤并随机分为对照组(n=42,接受常规治疗)和观察组(n=42,接受大剂量维生素C和维生素E联合常规治疗).治疗前、治疗后4、7d,采用酶联免疫吸附法测定血清神经损伤指标[包括神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100蛋白、脑红蛋白(NGB)、泛素羧基末端水解酶Ll(UCH-L1))、神经营养指标[包括神经营养因子-α(NTF-α)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-Ⅰ),采用放射免疫沉淀法测定氧化应激指标[包括超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)].结果 治疗后4、7d,两组血清NSE、S100B、NGB、UCH-L1、MDA、AOPP含量均显著降低(P＜0.05),血清NTF-a、BDNF、NGF、IGF-I、SOD、GPx、CAT含量均显著增高(P＜0.05),而且,观察组均明显优于对照组(P＜0.05).结论 大剂量维生素C和维生素E治疗能够减轻急性颅脑损伤病人神经损伤程度、氧化应激反应并改善神经营养状态.

沉默信息调节因子 2 相关酶(silent mating type information regulator 2-related enzymes,Sirtuin)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)依赖性的去乙酰化酶.Sirt7是定位于核仁的Sirtuin蛋白家族成员,除了具有去乙酰化酶活性外,还具有腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)-核糖基转移酶、去琥珀酰化酶和去戊二酰化酶活性.Sirt7的作用底物包括组蛋白、DNA损伤修复相关因子、核仁小核糖核蛋白成分(核仁纤维蛋白、U3)、转录因子(GA结合蛋白β1(GA binding protein β1,GABPβ1)、叉头框蛋白O4、GATA4)、细胞周期蛋白依赖激酶9、组蛋白乙酰转移酶1、聚合酶相关因子53(polymerase associated factor 53,PAF53)、Ras相关核蛋白(Ras-related nuclear protein,Ran)、活化T细胞的核因子c1和p53等.另外,Sirt7还可以与损伤特异性 DNA 结合蛋白 1(damage-specific DNA binding protein 1,DDB1)/cullin 4/DDB1-cullin 4相关因子1、Suv39h1/Sirt1、Myc、核呼吸因子1和Elk4等作用,进而调节其功能,但作用机制尚不清楚.Sirt7的多种活性使其在维持基因组稳定、调节RNA转录、抵御应激反应、调控代谢及炎症等病理生理活动中发挥重要作用.本文将介绍Sirt7在调节以上病理/生理活动中的作用机制,以及腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5'-monophosphate activated protein kinase,AMPK)、蛋白质精氨酸甲基转移酶6、泛素特异性肽酶7等对Sirt7蛋白合成及活性的调节作用,并对目前Sirt7研究中存在的问题进行讨论.

目的:通过观察丹参多酚酸盐对膜性肾病(MN)大鼠肾组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、沉默信息调节因子(Sirt1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)蛋白的表达及细胞自噬和凋亡的情况,探讨其治疗MN的可能的分子机制.方法:80只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,盐酸贝那普利组(10 mg·kg-1),丹参多酚酸盐低、中、高剂量组(16.7、33.3、66.7mg·kg-1),通过尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法造模.造模成功后,各组按照相应比例剂量连续给药4周后留取24 h尿、血清和肾组织,尿液用于检测24 h尿蛋白定量(24 hUTP)、血清用于检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量.采用光镜、电镜、免疫荧光法观察肾脏病理学变化,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测大鼠肾组织磷酸化(p)-AMPK、AMPK、p-Sirt1、Sirt1、PGC-1α蛋白表达水平;免疫组化(IHC)检测大鼠肾组织自噬特异性基因-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、泛素结合蛋白(p62)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶(Caspase)-7蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h UTP、IL-6、TNF-α、CRP、MDA水平显著升高(P＜0.01),SOD和GSH-Px水平显著降低(P＜0.01),BUN、SCr变化差异无统计学意义;与模型组比较,丹参多酚酸盐低中高剂量组和贝那普利组大鼠24hUTP、IL-6、TNF-α、CRP、MDA水平显著降低(P＜0.01),SOD和GSH-Px水平显著升高(P＜0.01).在苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色、免疫荧光及电镜下观察可见模型组大鼠肾组织病理损伤明显,贝那普利和丹参多酚酸盐治疗后,肾组织细胞的病理损伤逐渐改善.与正常组比较,模型组大鼠肾脏p-AMPK/AMPK、p-Sirt1/Sirt1、PGC-1α、Bcl-2、Beclin-1、LC3II表达显著降低(P＜0.01),Bax、Caspase-7、p62的表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,贝那普利和丹参多酚酸盐治疗后大鼠肾脏 p-AMPK/AMPK、p-Sirt1/Sirt1、PGC-lα、Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ表达显著升高(P＜0.01),Bax、Caspase-7、p62的表达显著降低(P＜0.01).结论:丹参多酚酸盐对MN大鼠肾保护作用,这可能与激活AMPK/Sirt1/PGC-1α通路,上调自噬,减少凋亡有关.