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环磷酰胺对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤效应及机制
编辑人员丨4天前
目的 探讨环磷酰胺(CTX)及其活性代谢衍生物4-氢过氧环磷酰胺(4-HC)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤效应及其机制.方法 用CTX[0(细胞对照),0.01,0.1,1,5,10,20,40和80 mmol·L-1]和4-HC[0(细胞对照),0.01,0.1,1,5,10,20,40和80 μmol·L-1)]处理SH-SY5Y细胞48 h,应用IncuCyte ZOOM系统记录细胞形态变化和生长曲线;CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞LDH释放率.CTX(0,1,5,10和20 mmol·L-1)和4-HC(0,1,5,10和20 μmol·L-1)处理SH-SY5Y细胞48 h,用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色法检测细胞增殖;免疫荧光法检测DNA双链断裂标志物γ-H2AX的含量和线粒体膜电位变化.CTX(0,1,5和10 mmol·L-1)和4-HC(0,1,5和10 μmol·L-1)处理SH-SY5Y细胞48 h,SeaHorse XF检测细胞糖酵解及线粒体氧化磷酸化水平.结果 与细胞对照组相比,CTX组和4-HC组的细胞融合率曲线逐渐下降;细胞活力显著下降(P<0.01),半数抑制浓度(IC50)分别为4.44 mmol·L-1和4.78 μmol·L-1;LDH释放率显著增加(P<0.01);EdU+细胞百分比显著降低(P<0.01);γ-H2AX+细胞百分比显著升高(P<0.05);线粒体膜电位显著降低(P<0.05);CTX和4-HC处理导致最大糖酵解能力、酵解储备、最大呼吸速率和ATP产生速率显著降低(P<0.05).结论 CTX和4-HC对SH-SY5Y细胞具有细胞毒性作用,可降低细胞活力,破坏细胞膜结构,抑制细胞增殖,其机制可能与导致细胞DNA损伤、能量代谢紊乱和线粒体功能障碍密切相关.
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编辑人员丨4天前
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鞘氨醇激酶1在丙烯酰胺致神经细胞损伤的保护作用
编辑人员丨4天前
目的:研究鞘氨醇激酶1(SphK1)过表达在丙烯酰胺(ACR)致神经细胞损伤中的保护作用以及影响。方法:将纯度为99%的ACR用生长液制备成浓度为1.25、2.5 mmol/L溶液;将人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞分为对照组(NC组)、实验组和SphK1激活剂组。NC组加入(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐(PMA)溶液[SphK1特异性激活剂,二甲基亚砜(DMSO)配制,终浓度为100 nmol/L]。实验组给予终浓度分别为1.25和2.5 mmol/L的ACR溶液,染毒24 h。SphK1激活剂组在实验组染毒浓度的基础上,每个染毒浓度分别加入PMA溶液,其他处理与实验组一致。各组采用免疫印迹(Western blot)法检测SphK1蛋白的表达含量;CCK-8检测SH-SY5Y细胞的增殖活性;Hoechst33342法观察神经细胞形态学改变;流式细胞术分析细胞的凋亡。结果:与NC组比较,实验组和SphK1激活剂组细胞SphK1蛋白表达均降低,差异有统计学意义( P<0.05)。与实验组比较,SphK1激活剂组细胞在1.25和2.5 mmol/L浓度的SphK1蛋白表达均增高,差异均有统计学意义( P<0.05)。与NC组比较,实验组和2.5 mmol/L浓度SphK1激活剂组的细胞相对生长存活率均更低,差异有统计学意义( P<0.05)。与实验组比较,SphK1激活剂组细胞相对生长存活率均更高,差异有统计学意义( P<0.05)。随着染毒剂量的增加,实验组细胞在ACR 1.25 mmol/L浓度时呈现出早期凋亡、在ACR 2.5 mmol/L浓度时呈现出晚期凋亡的形态学特征。与NC组比较,实验组和SphK1激活剂组在ACR 2.5 mmol/L浓度时凋亡率差异均有统计学意义( P<0.05);与实验组比较,SphK1激活剂组在ACR 2.5 mmol/L浓度时细胞凋亡率更低,差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:SphK1过表达可以对丙烯酰胺引起的神经细胞损伤起到保护作用。
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编辑人员丨4天前
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miR-20a-5p对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y、SK-N-BE裸鼠移植瘤的影响
编辑人员丨4天前
目的:探讨miR-20a-5p对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y、SK-N-BE裸鼠移植瘤生长的影响及可能的调控机制。方法:将SK-N-BE细胞系和SH-SY5Y细胞系分别分为原细胞系组、阴性对照组及miR-20a-5p过表达组,即SK-N-BE组、SK-N-BE-miR-20a-5p-NC组、SK-N-BE-miR-20a-5p过表达组;SH-SY5Y组、SH-SY5Y-miR-20a-5p-NC组、SH-SY5Y-miR-20a-5p过表达组。将24只BALB/c裸鼠随机分为6组,将两种细胞系的不同分组分别接种在裸鼠右侧腋窝皮下。以SK-N-BE组、SH-SY5Y组瘤块尺寸达到100 mm 3时判定成瘤成功,待瘤块平均直径不超过15 mm时取血、处死裸鼠取其瘤体测量体积和质量。RT-qPCR检测各组中miR-20a-5p miRNA含量及NFKBIB、NF-κB mRNA含量。 结果:SK-N-BE、SH-SY5Y两个细胞系中,miR-20a-5p过表达组分别与原细胞系组相比,瘤体体积和质量均明显增加,差异有统计学意义( P<0.05);阴性对照组与原细胞系组相比,瘤体体积和质量差异无统计学意义( P>0.05)。RT-qPCR结果显示两个细胞系中,miR-20a-5p过表达组分别与原细胞系组相比,miR-20a-5p miRNA、NF-κB mRNA表达含量明显升高,NFKBIB mRNA表达含量降低,差异均有统计学意义( P<0.05);阴性对照组与原细胞系组相比,miR-20a-5p miRNA、NFKBIB、NF-κB mRNA含量差异无统计学意义( P>0.05)。Western blot结果显示两个细胞系中,miR-20a-5p过表达组分别与原细胞系组相比,NF-κB蛋白的相对表达量明显升高,NFKBIB蛋白的相对表达量降低,差异均有统计学意义( P<0.05);阴性对照组与原细胞系组相比,NF-κB、NFKBIB蛋白的相对表达量差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:miR-20a-5p可能通过抑制NFKBIB的表达来激活NF-κB通路从而促进SK-N-BE、SH-SY5Y细胞在裸鼠体内的生长,可作为治疗神经母细胞瘤潜在干预靶点。
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编辑人员丨4天前
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沉默PHB减弱缺氧诱导的神经母细胞瘤自噬与增加顺铂化疗敏感性
编辑人员丨4天前
目的:探讨抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)对缺氧诱导的神经母细胞瘤自噬及顺铂化疗敏感性的影响。方法:体外培养SH-SY5Y和SK-N-SH细胞系,取对数期生长的细胞进行后续实验。分别转染sh-NC和sh-PHB到细胞中,采用RT-qPCR检测PHB的mRNA表达水平验证转染成功。缺氧处理后,分别用不同剂量(0、5 μM、10 μM、25 μM、50 μM和100 μM)的顺铂处理细胞。CCK-8试剂盒检测各组细胞活性;Western blot检测细胞中Beclin1、LCⅡ/LCⅠ、Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平。采用SPSS 22.0软件包进行单因素方差分析或Student's t检验分析。 结果:和对照组比较,RT-qPCR和Western blot检测结果显示缺氧组中SH-SY5Y和SK-N-SH细胞中PHB的表达水平显著上调。转染sh-PHB后,RT-qPCR结果证实sh-PHB组中PHB的mRNA表达水平显著下调。Western blot结果显示和control组比较,Hypoxia组Beclin1的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著上调,然而和Hypoxia+sh-NC组比较,Hypoxia+sh-PHB组中Beclin1的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著下降。此外,CCK-8结果显示和Hypoxia+sh-NC组比较,Hypoxia+sh-PHB组中顺铂处理后细胞活性明显下降,提示顺铂敏感性增加。流式细胞术检测结果显示,和Hypoxia+sh-NC+Cisplatin组比较,Hypoxia+sh-PHB+Cisplatin组中凋亡水平显著增加。Western blot结果表明,和Hypoxia+sh-NC+Cisplatin组比较,Hypoxia+sh-PHB+Cisplatin组中caspase-3和Bax蛋白表达水平显著上调,Bcl-2蛋白表达水平下降。结论:沉默PHB可以抑制缺氧诱导的神经母细胞瘤自噬,同时增加顺铂化疗敏感性
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编辑人员丨4天前
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百草枯诱导多巴胺能神经元α-突触核蛋白的自噬性降解障碍机制
编辑人员丨4天前
目的:探讨百草枯(PQ)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)自噬水平的影响及诱导α-突触核蛋白(α-syn)异常聚集的机制。方法:以SH-SY5Y细胞作为多巴胺能神经元的体外模型,不同浓度PQ(0、18.75、37.5、75、150、300、600 μmol/L)处理细胞24 h,150 μmol/L PQ处理细胞不同时间(0、12、24、36、48、60、72、96 h),每组设5个复孔。CCK8法检测细胞相对存活率,确定剂量/时间-效应关系;不同浓度PQ (0、75、150、300、600 μmol/L)处理细胞24 h,150 μmol/L PQ处理细胞不同时间,检测细胞LDH活力;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞内自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)、自噬相关蛋白(Beclin1)、Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-激酶(Vps34)、泛素结合蛋白(p62)及α-syn表达水平;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测α-syn基因表达水平;免疫荧光法(Immunofluorescencetechnique,IF)检测α-syn表达水平;用自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA) 100 nmol/L预处理细胞6 h,Western blot检测处理前后细胞内自噬相关蛋白及α-syn的蛋白表达水平。结果:PQ染毒细胞24 h后,细胞相对存活率明显降低,差异有统计学意义( P<0.05)。与正常对照组比较,PQ呈剂量依赖性和时间依赖性抑制SH-SY5Y细胞的增殖活性( P<0.05);与正常对照组比较,染毒组细胞上清中LDH活力明显升高( P< 0.05);Western blot结果显示,与正常对照组比较,染毒组细胞内自噬相关蛋白比值(LC3II/LC3I)、Beclin1和Vps34蛋白表达水平明显下降( P<0.05),p62蛋白表达水平升高( P<0.05);细胞内α-syn蛋白和基因表达水平均明显升高( P<0.05);IF结果显示,经PQ处理后,细胞内α-syn荧光信号明显聚集于胞质,荧光强度增强( P<0.05 );Western blot结果显示,与染毒组比较,RAPA干预组的LC3II/LC3I、Beclin1和Vps34蛋白表达水平明显升高( P<0.05),α-syn蛋白表达水平明显下降( P<0.05)。 结论:PQ可能通过诱导SH-SY5Y细胞自噬功能障碍,引起细胞内α-syn的异常聚集。
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编辑人员丨4天前
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帕金森病及多系统萎缩患者血浆增强α-突触核蛋白聚集体细胞膜破坏能力的研究
编辑人员丨4天前
目的:通过观察帕金森病(PD)及多系统萎缩(MSA)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体对细胞膜的破坏能力,进一步明确α-Syn在PD及MSA病理机制中的作用。方法:收集桂林医学院附属医院神经内科自2018年1月至2022年1月确诊的5例PD患者、5例MSA患者外周血液样本,以及同时期5例健康体检人员外周血液样本;采用0.01 mol/L PBS溶解α-Syn后分别与PBS、健康人员、PD患者及MSA患者血浆在37 ℃条件下恒温振荡孵育4 d(依次命名为PBS组、HC组、PD组和MSA组)。以酸性磷脂1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(POPS)为原料,采用薄膜分散-超声法制备包裹钙黄绿素的小单室脂质体(SUVs),采用马尔文纳米粒度电位仪及透射电镜分析SUVs粒径大小及形态。采用各组不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μmol/L)的α-Syn聚集体分别处理SUVs及人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),通过测定透析后钙黄绿素相对释放量及细胞内钙黄绿素荧光值评估不同条件下形成的α-Syn聚集体对脂质体及细胞膜的破坏能力。结果:(1)各组α-Syn聚集体对SUVs的破坏作用:各组α-Syn聚集体诱导释放的钙黄绿素随着蛋白浓度的升高而增多。当α-Syn蛋白浓度为8 μmol/L时,PD组和MSA组诱导释放的钙黄绿素均明显多于PBS和HC组,MSA组诱导释放的钙黄绿素进一步多于PD组,差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)各组α-Syn聚集体对SH-SY5Y细胞膜的破坏作用:各组细胞内钙黄绿素荧光值随蛋白浓度的升高而降低。当α-Syn蛋白浓度为8 μmol/L时,PD组和MSA组细胞内钙黄绿素荧光值均显著低于PBS组和HC组,MSA组细胞内钙黄绿素荧光值进一步低于PD组,差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)各组α-Syn聚集体对SH-SY5Y细胞存活的影响:当α-Syn蛋白浓度为8 μmol/L时,各组SH-SY5Y细胞活力均明显下降,与PBS和HC组相比,PD组和MSA组细胞活力均显著下降,其中MSA组细胞活力又较PD组进一步下降,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:PD患者血浆和MSA患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体对细胞膜的破坏能力大于正常人群血浆,尤以MSA患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体为著。
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编辑人员丨4天前
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环状RNA circHIPK3在神经母细胞瘤进展中的作用
编辑人员丨4天前
目的:探讨环状RNA circHIPK3对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞中的表达及其在NB进度中的作用。方法:采用实时定量PCR(real time quantitative PCR,qRT-PCR)检测人NB细胞系SH-SY5Y、SK-N-SH和胚肾细胞系HEK-293中circHIPK3的表达,并选取circHIPK3表达量相对更高的NB细胞进行circHIPK3的功能实验。用干扰小RNA转染NB细胞,并分为circHIPK3敲降组(si-circHIPK3组)、阴性对照组(si-NC组)。通过CCK-8、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验检测circHIPK3对NB细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果:circHIPK3在人NB细胞系SH-SY5Y和SK-N-SH中的表达量分别为6.06±0.11和4.94±0.26,均显著高于正常人胚肾细胞HEK-293中的1.00±0.01,且差异均有统计学意义( P均<0.05)。最终选取SH-SY5Y进行后续试验。CCK-8实验结果显示,si-NC组0、24、48、72、96 h时OD值分别为0.33±0.01、0.55±0.01、0.76±0.01、1.22±0.02和1.55±0.02,si-circHIPK3组各相同时间点OD值分别为0.33±0.02、0.44±0.01、0.51±0.01、0.75±0.01和0.85±0.01,组间比较,除0 h时外,其余时间点差异均有统计学意义( P均<0.01)。平板克隆形成实验结果显示,si-NC组的细胞克隆数为(112.67±5.51)个,si-circHIPK3组为(55.33±4.16)个,组间比较,差异有统计学意义( P<0.05)。划痕实验结果显示,si-NC组伤口愈合率为(4.0±0.1)%,si-circHIPK3组为(54.0±0.2)%,组间比较,差异有统计学意义( P<0.05)。Transwell侵袭结果显示,si-NC组穿膜细胞数为(126.67±8.62)个,si-circHIPK3组为(72.00±6.56)个,组间比较,差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:circHIPK3在NB细胞中高表达,沉默circHIPK3可以抑制NB细胞的增殖、迁移和侵袭。
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编辑人员丨4天前
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叶酸和维生素B 12通过Bcl-2/Bax途径抑制砷诱导SH-SY5Y细胞凋亡
编辑人员丨4天前
目的:探讨三氧化二砷(As 2O 3)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)凋亡及叶酸(FA)和维生素B 12(VB 12)的保护作用。 方法:体外培养SH-SY5Y细胞,采用成组设计分为6组:对照组(正常培养)、砷暴露组(10.00 μmol/L As 2O 3)、FA干预组(0.30 mmol/L FA + 10.00 μmol/L As 2O 3)、VB 12干预组(0.06 mmol/L VB 12 + 10.00 μmol/L As 2O 3)、联合干预组(0.30 mmol/L FA + 0.06 mmol/L VB 12 + 10.00 μmol/L As 2O 3)及试剂对照组(0.30 mmol/L FA + 0.06 mmol/L VB 12),各组细胞培养24 h( n = 3)。通过流式细胞仪测定各组细胞凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构变化;实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹分别检测细胞凋亡相关指标B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA和蛋白表达情况;发光法检测细胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3活性,并对以上指标进行统计分析。 结果:各组间细胞凋亡率比较,差异有统计学意义( F = 213.036, P < 0.05)。砷暴露组细胞凋亡率[(44.43 ± 3.54)%]高于对照、FA干预、VB 12干预、联合干预组[(1.80 ± 0.06)%、(14.37 ± 0.13)%、(19.10 ± 1.56)%、(17.11 ± 2.34)%, P均< 0.05]。透射电镜下可见砷暴露组SH-SY5Y细胞凋亡小体增多、线粒体肿胀变性、染色质凝集等,FA和VB 12单独及联合干预后细胞形态及细胞器改变明显改善。各组间细胞Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义( F = 5.178、7.169,6.142、9.194, P均< 0.05)。砷暴露组Bcl-2蛋白表达水平低于对照组( P < 0.05),Bax mRNA和蛋白表达水平均高于对照组( P均< 0.05);FA干预和联合干预组Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均高于砷暴露组( P均< 0.05),VB 12干预组Bcl-2 mRNA表达水平高于砷暴露组( P < 0.05);FA干预、VB 12干预和联合干预组Bax mRNA和蛋白表达水平均低于砷暴露组( P均< 0.05)。各组间细胞Caspase 3活性比较,差异有统计学意义( F = 84.604, P < 0.05)。砷暴露组细胞Caspase 3活性高于对照、FA干预、VB 12干预、联合干预组( P均< 0.05)。 结论:砷暴露可导致SH-SY5Y细胞凋亡及超微结构改变,FA和VB 12可能通过调控Bcl-2/Bax途径、降低Caspase 3活性抑制细胞凋亡,在分子水平上发挥对神经细胞的保护作用。
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编辑人员丨4天前
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miR-92a-3p靶向调控PTEN对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响
编辑人员丨4天前
目的:探讨微小RNA-92a-3p (micro RNA-92a-3p, miR-92a-3p)靶向调控PTEN对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用miR-92a-3p mimics及其抑制基因(inhibitor)分别转染至SH-SY5Y细胞,根据实验需要分为miR-92a-3p过表达组、NC过表达组、miR-92a-3p抑制组、NC抑制组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测转染后细胞内miR-92a-3p的表达水平;采用CCK-8检测实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测miR-92a-3p对细胞增殖、侵袭和迁移能力的变化;采用基因软件预测miR-92a-3p的靶基因并用双荧光素酶报告体系进行验证;最后采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测过表达miR-92a-3p和抑制miR-92a-3p后对PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的表达情况。结果:qRT-PCR结果显示miR-92a-3p过表达组的表达含量(65.73±20.07)比miR-92a-3p抑制组的表达含量(0.33±0.02)显著增高,且差异有统计学意义( t=5.64, P=0.005)。CCK-8检测实验显示,miR-92a-3p过表达组能促进SH-SY5Y细胞的增殖活性( P均<0.001 ),miR- 92a-3p抑制组则能有效抑制SH-SY5Y细胞的增殖活性( P=0.031, P=0.012, P<0.001, P<0.001)。细胞克隆形成实验结果显示,miR-92a-3p过表达组的细胞克隆数为(210±19)个,高于NC过表达组的细胞克隆数(144±5)个,组间比较差异有统计学意义( P=0.005);miR-92a-3p抑制组的细胞克隆数为(83±6)个,低于NC抑制组的细胞克隆数(137±13)个,组间比较差异有统计学意义( P=0.003)。细胞划痕实验及细胞侵袭实验结果显示,miR-92a-3p过表达组细胞迁移愈合率为(90.37±0.67)%,高于miR-92a-3p抑制组(41.03±0.56)%,组间比较差异有统计学意义( P<0.001);miR-92a-3p过表达组细胞穿膜数量为(106.80±9.28)个,高于miR-92a-3p抑制组(33.40±7.56)个,组间比较差异有统计学意义( P<0.001)。qRT-PCR和蛋白质印迹法结果显示,与NC过表达组相比,miR-92a-3p过表达组PTEN的mRNA表达量(0.43±0.02)和蛋白水平明显降低,而PI3K mRNA表达量(2.00±0.10)、AKT mRNA表达量(1.41±0.19)和各自蛋白水平明显升高,且差异均有统计学意义( P<0.001、 P< 0.001和 P=0.028);miRNA-92a-3p抑制组可逆转上述作用,且差异均有统计学意义( P=0.043、 P= 0.046和 P<0.001)。 结论:PTEN基因是miR-92a-3p的靶基因,miR-92a-3p可能通过促进NB细胞增殖、促进NB细胞侵袭、促进NB细胞迁移和抑制PTEN mRNA表达引发PTEN蛋白水平的降低。
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编辑人员丨4天前
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SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/恢复模型中 Sestrin2基因过表达对线粒体分裂的调控研究
编辑人员丨4天前
目的:探讨人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/恢复(OGD/R)模型中应激诱导蛋白 Sestrin2基因过表达对线粒体分裂的调控作用及其机制。 方法:(1)将SH-SY5Y细胞分为正常对照组、OGD/R组、 Sestrin2过表达组及空载体组,后2组细胞预先采用慢病毒感染方法分别构建 Sestrin2过表达及空载体稳转细胞株,除正常对照组细胞外均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞的存活率,采用Western blotting实验检测各组细胞中Sestrin2、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胞浆Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)、胞核核因子E2相关因子2(Nrf2)的蛋白水平,采用透射电镜观察各组细胞中线粒体的超微结构,采用免疫荧光染色检测各组细胞中Nrf2的核移位情况。(2)将 Sestrin2过表达稳转SH-SY5Y细胞株分为 Sestrin2过表达组、鸦胆子苦醇+ Sestrin2过表达组、二甲基亚砜(DMSO)+ Sestrin2过表达组,后2组细胞在造模前分别给予Keap1/Nrf2通路抑制剂鸦胆子苦醇(终浓度100 nmol/L)或DMSO溶液(终体积分数0.1%)预处理4 h,然后各组细胞均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用Western blotting实验检测各组细胞中胞浆Keap1、胞核Nrf2、Drp1、Fis1的蛋白水平。 结果:(1)与OGD/R组相比, Sestrin2过表达组细胞的存活率明显升高(61.33%±1.15% vs. 81.00%±3.00%),Bcl-2/Bax值明显升高(0.467±0.006 vs. 0.880±0.010),Drp1、Fis1、胞浆Keap1蛋白水平明显降低(1.089±0.033 vs. 0.865±0.014;0.829±0.009 vs. 0.350±0.007;0.967±0.017 vs. 0.881±0.024),胞核Nrf2蛋白水平明显升高(0.627±0.025 vs. 0.957±0.015),差异均有统计学意义( P<0.05);并且, Sestrin2过表达组细胞的线粒体结构明显较OGD/R组更完整,Nrf2发生了明显的核移位。(2)与 Sestrin2过表达组相比,鸦胆子苦醇+ Sestrin2过表达组细胞胞核Nrf2的蛋白水平明显降低(0.920±0.013 vs. 0.627±0.035),Drp1、Fis1的蛋白水平明显升高(0.994±0.020 vs. 1.084±0.005;0.728±0.010 vs. 0.906±0.022),差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:Sestrin2基因过表达可下调胞浆Keap1蛋白水平、促进Nrf2核移位而激活Keap1/Nrf2通路,从而抑制线粒体分裂,减少细胞凋亡,减轻SH-SY5Y细胞的OGD/R损伤。
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编辑人员丨4天前
