目的:制备以嵌段聚合物聚乙二醇-聚己内酯(PEG-PCL)为外壳、全氟戊烷(PFP)为核心的超声响应型纳米液滴，探讨机械指数(MI)对纳米液滴超声造影成像特性的影响。方法:应用透析法制备PEG-PCL胶束，然后将胶束与PFP混合后超声乳化制备纳米液滴。测定纳米液滴的粒径和zeta电位，透射电镜下观察其形态，考察其在25 ℃和37 ℃下储存后的稳定性。应用超声诊断仪观察不同MI下纳米液滴的体外造影成像特性。结果:纳米液滴的粒径为(356.6±5.6)nm，zeta电位为-(7.30±0.14)mV，透射电镜下纳米液滴接近球形，有清晰的核壳结构。于25 ℃或37 ℃放置一段时间后，纳米液滴平均粒径变大，且分散度增加。体外造影成像结果显示37 ℃下纳米液滴在MI≥0.4时可产生回声增强，且MI越大，回声越强。结论:纳米液滴的造影成像特性与所采用的MI紧密相关，较高的MI可以使更多的纳米液滴发生相转变，产生较强的回声。此研究可以为纳米液滴在超声诊断及靶向治疗中的应用提供依据。

目的 制备包载三苯基膦-阿霉素(TPP-DOX,TD)和槲皮素(Que)的还原敏感性抗肿瘤耐药纳米混合胶束,并对其进行制剂学评价.方法 以还原敏感性聚合物材料聚乙二醇-脱氧胆酸-二硫键-聚天冬氨酸苄酯(mPEG-DCA-SS-PBLA,PDSP)和非还原敏感性聚合物材料聚乙二醇-脱氧胆酸-碳碳键-聚天冬氨酸苄酯(PDCP)为载体,通过溶剂挥发法分别包载TD和Que,制备还原敏感性纳米胶束PDSP@TD、PDSP@Que和非还原敏感性纳米胶束PDCP@TD、PDCP@Que.应用激光粒度仪分析各胶束粒径、聚合物分散性指数(PDI),Zeta电位仪分析其Zeta电位;HPLC法检测载药量、包封率;透射电镜法观察形态;进行各胶束储存稳定性、稀释稳定性、血浆稳定性、冻干粉复溶稳定性考察;考察10 μmol·L-1、10、20 mmol·L-1谷胱甘肽(GSH)对胶束粒径的影响;考察在含0、10 μmol·L-1、10 mmol·L-1、20 mmol·L-1 GSH的释放介质中各胶束体外释放行为.结果 制备的PDSP@TD、PDCP@TD胶束粒径约为180 nm,PDSP@Que、PDCP@Que胶束的粒径约为230 nm;胶束的Zeta电位均在-17.4 mV以下;4种胶束的载药量和包封率分别在6.3％和65.3％以上;4种胶束的形态均呈类球形,物理稳定性良好;在浓度为10、20mmol·L-1的GSH存在下,PDSP@TD和PDSP@Que粒径发生较为明显的变化;游离药物TD和Que在含有20 mmol·L-1 GSH的释放介质中48 h时的累积释放率均小于30％,PDCP@TD和PDCP@Que在所有介质中48 h内的累积释放率均在38％左右,PDSP@TD、PDSP@Que及混合胶束在20 mmol·L-1 GSH释放介质中48 h内累积释放率均在78％左右.结论 制备的还原敏感性纳米胶束具有良好的稳定性、肿瘤细胞内还原敏感性,可以用于后续体内外抗肿瘤耐药研究.

背景:富血小板血浆水凝胶由于生长因子的突发释放与伤口部位蛋白酶的快速清除,导致生长因子在伤口部位的停留时间较短,近年来研究者关注利用水凝胶材料包封富血小板血浆,以改善富血小板血浆水凝胶的不足.目的:制备自组装多肽-富血小板血浆水凝胶,探究其对富血小板血浆生物活性因子释放的影响.方法:采用固相合成法合成自组装多肽,以D-PBS配制成溶液.将不同体积的多肽溶液分别与富血小板血浆、氯化钙/凝血酶溶液混合制备水凝胶,使体系中多肽的最终质量分数分别为0.1%,0.3%,0.5%,观察成水凝胶状态,并体外检测富血小板血浆中生长因子释放情况.将质量分数1%多肽溶液与质量分数1%人血清白蛋白溶液混合激发多肽自组装,使多肽的最终质量分数分别为0.1%,0.3%,0.5%,观察液体流动状态,并检测自组装多肽的流变力学性能.通过扫描电镜与透射电镜观察多肽(质量分数分别为0.1%,0.001%)-人血清白蛋白溶液的微观结构.结果与结论:①不同体积多肽溶液与富血小板血浆均可形成水凝胶,与富血小板血浆水凝胶相比,0.1%,0.3%多肽-富血小板血浆凝胶可缓解表皮生长因子、血管内皮生长因子的突发释放,延长释放时间至48 h.②添加人血清白蛋白后,0.1%多肽组仍呈流动液体,0.3%多肽组呈半液体状态,0.5%多肽组激发自组装形成水凝胶,确定富血小板血浆中人血清白蛋白可激发多肽自组装;随着多肽质量分数的提高,自组装多肽的存储模量越高,越容易成胶.③透射电镜下可见,添加人血清白蛋白前,多肽纳米纤维较短且无序堆积;添加人血清白蛋白后,多肽纳米纤维明显变长,并且相互交联成束,形成致密的纤维网络结构.扫描电镜下可见,添加人血清白蛋白前,多肽呈无序堆积的片状结构;添加人血清白蛋白后,多肽自组装成相互交联且有序密集排列的多孔状结构.④结果显示,新型自组装多肽可由富血小板血浆激发自组装,根据人血清白蛋白与多肽的比例可精准调节自组装效果,且多肽对富血小板血浆生长因子有缓释作用,可作为一种新型的生物材料应用于组织修复.

目的 合成一种生物可降解与低细胞毒性的两亲性嵌段共聚物PLGA-b-(PEI-co-PEG),并研究其胶束化行为.方法 采用开环聚合法合成PLGA;使用低相对分子质量的聚乙烯亚胺(PEI1800)与聚乙二醇(PEG2000)相互交联合成水溶性PEI-co-PEG共聚物;采用脱水缩合法,合成PLGA-b-(PEI-co-PEG).根据PEI-co-PEG在37℃PBS中孵育不同时间的相对分子质量变化情况,评估其生物降解性.通过MTT法测定PLGA-b-(PEI-co-PEG)与PEI-co-PEG对MCF-7的细胞毒性.采用标准透析法制备电正性PLGA-b-(PEI-co-PEG)胶束,使用马尔文激光粒度分析仪测定其粒径分布与Zeta电位;采用简单混合法制备PLGA-b-(PEI-co-PEG)胶束/胰岛素复合物;使用透射电镜表征胶束及胶束/胰岛素复合物的形貌.采用荧光猝灭法,测定胶束/胰岛素复合物在不同浓度盐离子溶液中的稳定性.结果 成功合成了两亲性嵌段共聚物PLGA-b-(PEI-co-PEG).PEI-co-PEG在37℃PBS溶液中的降解半衰期约为48 h.PLGA-b-(PEI-co-PEG)与PEI-co-PEG对MCF-7的半数抑制浓度(IC50)分别为1375.7μg/mL与425.1μg/mL.PLGA-b-(PEI-co-PEG)胶束(粒径:99.5±2.61 nm,Zeta电位:52.9±2.38 mV)可与胰岛素形成纳米尺寸的胶束/胰岛素复合物;胶束/胰岛素复合物在150 mmol/L NaCl溶液中的解离率为27.6％.结论 PEI-co-PEG在体外条件下展现了较好的降解性.PLGA-b-(PEI-co-PEG)的细胞毒性显著低于PEI-co-PEG(P<0.05).PLGA-b-(PEI-co-PEG)胶束/胰岛素复合物在生理条件下具有良好的盐离子稳定性.

目的:采用自主合成新材料VES-g-PLL制备姜黄素纳米胶束(CUR-NMs)并评价其质量,结合丝素水凝胶制备成CUR-NMs丝素凝胶,为治疗银屑病的姜黄素药物新制剂开发提供参考.方法:应用注入法制备包载姜黄素的VES-g-PLL纳米胶束,测定其微观形态、粒径、Zeta电位、包封率、载药量及释放度等质量评价指标后与丝素蛋白溶液混合超声处理形成CUR-NMs丝素凝胶.通过扫描电镜、HPLC及激光共聚焦显微镜测定CUR-NMs丝素凝胶的微观形态、体外药物释放度及皮肤渗透性.结果:载药纳米胶束呈标准的椭球形、分散均匀、粘连少;粒径为(31.14±7.86)nm、Zeta为(16.70±1.45)mV,包封率高达(82.21％±4.32％).CUR-NMs丝素凝胶的微观形态为3D网状结果,CUR-NMs以絮状物形式黏附于凝胶3D结构表面,体外药物释放度实验结果显示78 h后CUR-NMs药物累计释放约49％,而CUR-NMs丝素凝胶的药物累计释放约为30％;同时在体皮肤渗透试验显示相比于姜黄素溶液凝胶,应用CUR-NMs丝素凝胶能够显著增加药物的透皮渗透性能.结论:应用新材料VES-g-PLL制备的载药纳米胶束结合丝素凝胶能够实现难溶性药物姜黄素的缓释及透皮吸收,有望成为治疗银屑病等慢性皮肤炎症疾病的一种新方法.

目的:制备荷载雷公藤红素的甘氨脱氧胆酸钠/DSPE-mPEG 2000仿生混合胶束(C-mM),评价其体内外抗前列腺肿瘤作用.方法:采用“溶解-滴注-透析”法制备仿生胶束,以载体摩尔比例(甘氨脱氧胆酸钠/DSPE-mPEG 2000)、投药量、纯水用量及透析时间为考察因素优化其制备工艺,以形态学、粒径、Zeta电位、稳定性和包封率为指标表征其理化性质;体外以PC-3(人源前列腺肿瘤)细胞为模型,采用MTT法和AnnexinV-PE/7-AAD试剂盒分别考察C-mM抗增殖和促凋亡作用;体内通过皮下接种PC-3细胞建立异位前列腺肿瘤裸鼠模型,检测C-mM的抑瘤率、荷瘤小鼠的瘤重、体质量、肝脾功能、生存时间等指标.结果:C-mM的最佳工艺为:甘氨脱氧胆酸钠与DSPE-mPEG 2000的摩尔比值为3∶1,投药量7.5 mg(相对应的DSPE-mPEG 2000为2.5 mg),纯水用量10 mL,透析时间6h.C-mM呈球状,粒径为(100.10±4.38)nm,Zeta电位为-(17.92±2.43)mV,包封率为(79.46±2.7)％,且具有较好的稳定性.C-mM对PC-3细胞的IC50和凋亡诱导率分别为(5.32±0.46) μg/mL和(70.42±5.66)％,均显著优于雷公藤红素(P＜0.01).经C-mM灌胃治疗14 d后,裸鼠的肿瘤抑瘤率为(75.00±6.26)％,中位生存时间为43d,体质量、肝脾指数等均未出现明显异常.结论:C-mM体内外均有显著地抗前列腺肿瘤作用,且未见明显的毒副作用,有望作为口服纳米载药系统用于前列腺肿瘤的治疗.

目的 了解纳米脂肪混合颗粒脂肪移植在瘢痕性面部凹陷及萎缩治疗中的临床作用,探讨相关实验机制. 方法 (1)2012年1月-2018年4月,笔者单位收治符合入选标准的瘢痕性面部凹陷及萎缩畸形需行面部脂肪移植患者105例,对其病历资料进行回顾性分析.根据患者意愿,54例10～59岁患者(男12例、女42例)接受传统自体单纯腹部/大腿颗粒脂肪移植,纳入单纯移植组;另51例7 ～ 63岁患者(男14例、女37例)接受自体腹部/大腿纳米脂肪混合颗粒脂肪移植,纳入混合移植组.自制量表并根据手术前后照片资料,通过面部饱满度、对称度、瘢痕及并发症等情况评估患者术后3、6个月治疗满意度;术后6个月评估患者是否需行二次手术,计算二次手术率;于患者第2次手术时取其第1次手术移植的脂肪,扫描电子显微镜下观察脂肪细胞形态及微血管情况.(2)从1只4周龄雄性SD大鼠腹部脂肪分离培养脂肪源性干细胞(ADSC),取第5代细胞,培养14 d,观察细胞形态,免疫荧光法观察细胞波形蛋白和细胞角蛋白18的表达,行成骨、成脂诱导分化鉴定,流式细胞仪检测CD29、CD44阳性细胞率(样本数为3).取18只4周龄雄性SD大鼠,按随机数字表法分为ADSC移植组、单纯瘢痕组、空白对照组,每组6只.ADSC移植组、单纯瘢痕组大鼠均经背部皮下注射1 mL质量浓度为1 mg/mL的溶于磷酸盐缓冲液(PBS)中的博莱霉素溶液建立瘢痕模型,3h后ADSC移植组大鼠于前述注射部位注射1×106个悬于0.1 mL PBS中的ADSC,单纯瘢痕组大鼠注射0.1 mL PBS;空白对照组大鼠于前述2个时间点在相同部位分别注射相同剂量PBS.各组连续注射28 d后,取所有大鼠注射区域的全层皮肤组织,行Masson染色观察胶原纤维情况,免疫组织化学法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达并计数阳性细胞.对数据行Mann-WhitneyU检验、x2检验、单因素方差分析、LSD检验. 结果 (1)与术前比较,单纯移植组患者术后3个月面部饱满度、对称度更佳且瘢痕颜色更接近周围皮肤,该组患者术后6个月填充容积较术后3个月有所减少;与术前比较,混合移植组患者术后3、6个月面部饱满度、对称度更佳且瘢痕颜色、质地更接近周围皮肤,该组患者术后6个月填充容积未见较术后3个月明显减少的情况.单纯移植组患者在术后3个月内出现脂肪液化、皮下结节形成各1例.混合移植组患者术后3、6个月治疗满意度均明显高于单纯移植组(Z=-2.566、-3.084,P＜0.05或P＜0.01).术后6个月,混合移植组患者二次手术率为7.84％ (4/51),明显低于单纯移植组的22.22％ (12/54),x 2=4.199,P＜0.05.与单纯移植组比较,混合移植组行第2次手术患者第1次手术时受区移植脂肪细胞形态更加饱满、无塌陷于瘪,细胞紧密排列、间隙较小;细胞表面管状、条索状微血管结构更丰富,细胞间隙布满网状分布且长入脂肪组织中的微血管结构.(2)大鼠脂肪分离培养的第5代细胞贴壁生长,呈长梭形或纺锤形,呈鱼群样生长;高表达波形蛋白和细胞角蛋白18;经诱导具有成骨及成脂分化能力;CD29、CD44阳性表达率高于90.00％.细胞鉴定为ADSC.注射28 d后,空白对照组大鼠注射区皮肤组织真皮层胶原纤维细密排列;单纯瘢痕组大鼠注射区皮肤组织真皮层大量胶原纤维沉积,纤维束粗大、排列松散不齐,可见大量炎性浸润、大量散在的肌纤维交错分布;ADSC移植组大鼠注射区皮肤组织真皮层中胶原纤维较空白对照组增粗,排列尚整齐,可见少量肌纤维散布、少量炎性浸润.注射28 d后,ADSC移植组大鼠注射区皮肤组织中α-SMA主要表达于微血管中,其α-SMA和TGF-β1阳性细胞数分别为每20倍视野下(49±12)、(63±10)个,与空白对照组的每20倍视野下(35 ±16)、(44±17)个相近(P＞0.05),均明显少于单纯瘢痕组的每20倍视野下(135±13)、(121 ±23)个(P＜0.05). 结论 与单纯颗粒脂肪移植比较,纳米脂肪混合颗粒脂肪移植治疗瘢痕性面部凹陷及萎缩患者的填充饱满度更好,填充后效果维持更久,瘢痕质地改善更明显.大鼠瘢痕模型实验显示,其机制可能为ADSC抑制α-SMA和TGF-β1的表达,从而抑制瘢痕形成.

目的:制备熊果酸(UA)/Pluronic F127(PF127)/聚乙二醇维生素E琥珀酸酯(TPGS)-多柔比星(DOX)混合纳米胶束,并对其进行表征和体外释药特性研究.方法:采用薄膜水化法制备UA/PF127/TPGS纳米胶束;以UA包封率为指标,结合单因素试验结果,通过L9(34)正交试验设计对处方中的UA投药量、PF127与TPGS的摩尔比、水化温度、水化体积进行优化并验证.在琥珀酰化TPGS的基础上,合成TPGS-DOX,与UA/PF127/TPGS混合制备UA/PF127/TPGS-DOX混合纳米胶束,考察其外观、粒径、临界胶束浓度(PF127/TPGS),采用透析袋扩散法考察其体外释药行为.结果:UA/PF127/TPGS纳米胶束的最优制备工艺为UA投药量8 mg、PF127与TPGS的摩尔比3:7、水化温度50℃、水化体积4 mL,所得纳米胶束中UA的平均包封率为89.00％(RSD=0.43％,n=3).在此基础上所制UA/PF127/TPGS-DOX混合纳米胶束溶液澄清且带有乳光;呈类球形且大小均匀,平均粒径为(115.00±9.42)mm;PF127/TPGS(摩尔比3:7)的临界胶束浓度为0.0013％.该混合纳米胶束中UA、DOX的体外释放均较其原料药或对照品明显减缓,胶束中两种药物的释药过程均符合Weibull方程.结论:本研究成功制备了UA/PF127/TPGS-DOX混合纳米胶束,其粒径均匀且系统稳定性好,并具有较好的缓释效果.

黑色素瘤恶性程度高,且发病率逐年上升.本研究制备了一种能特异性靶向黑色素瘤的透明质酸纳米凝胶,将巯基化的透明质酸修饰于表面功能化的普朗尼克F127-TPGS混合胶束制备共价交联的纳米凝胶.通过测定粒径考察其体外稳定性;细胞毒性实验考察该载体材料对细胞的毒性作用;细胞摄取实验定量和定性考察B16F10黑色素瘤细胞对该纳米凝胶的摄取情况.结果 显示,本研究制备了一种30 nm左右的小粒径纳米凝胶,该纳米凝胶对小鼠3T3成纤维细胞与小鼠黑色素瘤B16F10细胞均无明显细胞毒性作用,与低表达CD44受体的3T3细胞相比,高表达CD44受体的B16F10细胞的摄取效率显著增加(P＜0.05).

目的 制备甘草酸(GL)-普朗尼克F127 (F127)/聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(TPGS)混合纳米胶束(MMs)(GL-F127/TPGS-MMs),以改善GL的口服吸收.方法 采用薄膜分散法制备GL-F127/TPGS-MMs,以胶束包封率、载药量为评价指标,单因素实验优化处方及工艺,包括F127与TPGS的比例、聚合物的质量浓度、GL的用量、水化温度、水化时间;采用透射电镜考察胶束形态;以吸收速率常数(Ka)和表观吸收系数(Papp)为评价指标,采用大鼠在体单向肠灌流法考察GL-F 127/TPGS-MMs的肠吸收特性.结果 优化得到处方和工艺为TPGS 180mg、 F127270mg、 GL70mg、水化温度50℃、水化时间3h.所制备GL-F127/TPGS-MMs澄明度好,平均粒径为(28.20±5.63)nm,多分散系数为0.20±0.06,Zeta电位为(-5.24±1.55)mV,包封率为(97.57±5.29)％,载药量为(13.13±0.71)％;胶束呈球形,可见明显的囊泡结构.与回肠段比较,GL在空肠段吸收较好,且差异有统计学意义(P＜0.05);与GL原料药比较,GL-F127/TPGS-MMs的肠吸收较好,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 所制备的GL-F127/TPGS-MMs显著地提高了GL的体内吸收.