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2011-2020年青海省鼠疫疫情监测结果分析
编辑人员丨2天前
目的:分析青海省鼠疫疫情监测结果,掌握青海省鼠疫流行态势,为今后的鼠疫防控工作提供科学依据。方法:收集2011-2020年青海省人间鼠疫疫情资料(来自青海省地方病预防控制所人间病例数据库)和动物间鼠疫疫情资料(来自青海省鼠疫监测数据和鼠疫疫源地调查数据),采用描述性流行病学方法进行分析,包括人间鼠疫疫情,动物间鼠疫疫情地区分布,宿主动物、病原学和血清学监测结果等。结果:2011-2020年,青海省发生人间鼠疫疫情1起,因剥食旱獭时不慎划伤右手中指感染,自死者的心、肝、肺、淋巴结穿刺液、气管分泌物和咽拭子样本中均分离出鼠疫耶尔森菌。共发生动物间鼠疫疫情16起,流行地区分布在海西州、玉树州和海北州,其中海西州动物间鼠疫流行最多,10年间共发生13起。宿主动物监测显示,主要宿主动物为喜马拉雅旱獭,其平均密度为0.07匹/hm 2。病原学监测显示,共分离出鼠疫耶尔森菌31株,其中海西州分离出27株;分离出鼠疫耶尔森菌的宿主动物以喜马拉雅旱獭为主,占总数的77.42%(24/31)。血清学监测显示,共检出鼠疫F1抗体阳性血清66份,其中犬阳性血清最多,为43份;喜马拉雅旱獭次之,为20份。 结论:2011-2020年青海省动物间鼠疫连年不断,局部地区呈活跃态势,鼠疫防控总体形势严峻。
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编辑人员丨2天前
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骨硬化蛋白在葡萄膜黑色素瘤发生和发展中的作用及其生物学机制
编辑人员丨2天前
目的:探讨骨硬化蛋白(SOST)和WNT/CTNNB1信号通路对人葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞细胞周期、迁移和侵袭的影响及其相关机制。方法:分别收集20例上皮细胞型UM组织和16例梭形细胞型UM组织进行免疫组织化学染色检测SOST、Wnt-1和Catenin beta-1蛋白含量。选择3株人UM组织来源的细胞系OCM-1(原发梭型)、Mum-2B(转移上皮型)和Mum-2C(转移梭型),分为空白对照组、空质粒组和SOST siRNA组,其中空白对照组不转染质粒、空质粒组用SOST阴性对照质粒转染,SOST siRNA组用含SOST siRNA转染。转染24 h后,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测SOST、CTNNB1、WNT蛋白家族1(WNT1)、CCND1、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9的mRNA和相应蛋白表达水平;采用Transwell方法测定转染后细胞的侵袭和迁移能力;采用流式细胞术检测转染后各组细胞周期分布。取BALB/c nude雌性小鼠9只采用随机数字表法随机分为OCM-1组、OCM-1空载体组和SOST shRNA组,分别接种未感染慢病毒的OCM-1、感染空载慢病毒的OCM-1以及感染SOST shRNA慢病毒的OCM-1,观察SOST沉默对小鼠原位成瘤的影响。通过免疫共沉淀实验探讨OCM-1细胞SOST与低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)-5/6蛋白相互作用。结果:免疫组织化学染色结果发现恶性程度较低的梭形细胞型UM组织中SOST表达水平高于上皮细胞型UM组织,Wnt-1和Catenin beta-1表达水平明显低于上皮细胞型UM组织,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,各细胞系中SOST siRNA组SOST mRNA相对表达量明显低于相应空质粒组,CCND1、WNT1及MMP9 mRNA相对表达量明显高于空质粒组,差异均有统计学意义(均 P<0.05);OCM-1和Mum-2C细胞系中,SOST siRNA组CTNNB1 mRNA相对表达量明显高于空质粒组,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。Western blot结果显示,SOST siRNA组SOST蛋白相对表达量低于空质粒组,Wnt-1、Catenin beta-1、cyclin-D1、MMP2、MMP9蛋白相对表达量高于空质粒组,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。Transwell实验结果显示,各细胞系中SOST siRNA组的细胞侵袭和迁移能力明显强于空白对照组和空质粒组,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。流式细胞术显示SOST siRNA组G1期细胞比例以及G1/S期比值均明显低于空白对照组和空质粒组,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。OCM-1组、OCM-1空载体组和SOST shRNA组眼球体积分别为(42.7±4.6)、(49.0±22.9)和(135.2±32.7)mm 3,总体比较差异有统计学意义( F=19.963, P<0.01),其中SOST shRNA组小鼠眼球较OCM-1组和OCM-1空载体组大,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。免疫共沉淀结果显示,SOST可分别与LRP-5和LRP-6相互结合发生相互作用。 结论:沉默SOST可促进UM细胞的侵袭和迁移,并使其处于分裂期的比例升高,可以促进肿瘤在裸鼠眼内的生长。SOST可能是通过与膜上受体LRP-5/LRP-6相互作用进而调节WNT/CTNNB1信号通路来发挥这一功能。
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编辑人员丨2天前
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沈阳地区一起人副流感病毒3型引起的急性呼吸道感染暴发病原分子流行病学研究
编辑人员丨2天前
目的:明确沈阳地区一起小学急性呼吸道感染疫情暴发的病原及其基因进化特征。方法:采集2020年12月末沈阳地区某小学暴发疫情中的患病学生咽拭子标本17份,采用TaqMan低密度阵列分析技术(TaqMan low-density arrays,TLDA)进行常见呼吸道病原检测,并对副流感病毒3型阳性标本采用巢式RT-PCR方法核酸扩增、序列测定和系统进化分析。结果:TLDA检测确定10份标本为副流感病毒3型核酸阳性,同时伴有条件致病菌感染,扩增HN基因获得7条完整序列。序列系统进化分析表明本研究7个毒株均处于C3a.1进化分支,其核苷酸同源性为99.9%,与原型株Wash/47885/57核苷酸同源性为94.6%,与进化距离最近的浙江株ZJ/11-s-165/KP690785/CHN/11为99.5%。结论:引起沈阳地区该起急性呼吸道感染暴发疫情的病原为副流感病毒3型,为我国东北地区首次报道,其处于C3a.1进化分支。
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编辑人员丨2天前
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外泌体微小RNA-let-7c靶向结合AGO1调控多发性骨髓瘤血管生成
编辑人员丨2天前
目的:探究多发性骨髓瘤外泌体中微小RNA(miR)-let-7c对血管内皮细胞生物学功能的影响及机制。方法:从多发性骨髓瘤初治患者的骨髓活检标本中原代培养出骨髓瘤内皮细胞,慢病毒感染后建立miR-let-7c过表达或抑制内皮细胞稳染株,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell迁移实验及小管形成实验检测感染后内皮细胞的生物学行为改变,并采用生物学信息技术预测miR-let-7c与argonaute1(AGO1)蛋白的靶向调控区,双荧光素酶报告基因实验论证两者之间的靶向调控作用。构建多发性骨髓瘤移植瘤小鼠模型,采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组移植瘤组织中miR-let-7c的表达水平,免疫组织化学标记内皮细胞表面CD31来计算各组肿瘤微血管密度(MVD);采用蛋白印迹法检测各组移植瘤组织中缺氧诱导因子1α (HIF-1α)、AGO1及血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达;采用qRT-PCR检测各组移植瘤组织中HIF-1α、AGO1及VEGF的mRNA表达。两组均数间用独立样本t检验,两组以上均数的比较用方差分析。结果:用CCK-8试剂盒检测发现,接种后2 d LV3-miR-let-7c mimics组细胞增殖能力较NC组出现明显增强( t=25.185, P<0.05),而LV3-miR-let-7c inhibitor组细胞增殖能力较NC组明显减慢( t=8.708, P<0.05)。通过Transwell迁移实验证实,Mimics组细胞迁移能力较NC组明显增强( t=30.261, P<0.001),Inhibitor组则较对照组明显下降( t=9.459, P<0.01),小管形成实验结果显示,Mimics组细胞体外成管长度较NC组明显增强[(17.861±0.550) mm比(13.632±0.500) mm, t=5.685, P<0.01],而Inhibitor组体外成管长度则较NC组明显下降[(7.180±0.144) mm比(13.632±0.500) mm, t=12.514, P<0.001]。采用蛋白印迹法及qRT-PCR发现,Mimics组VEGF蛋白及mRNA相对水平较NC组明显增加(VEGF蛋白: t=12.720, P<0.001;mRNA: t=12.493, P<0.01),而AGO1蛋白及mRNA水平则较NC组降低(AGO1蛋白: t=6.544, P<0.001;mRNA: t=5.433, P<0.05),Inhibitor组中AGO1蛋白及mRNA水平明显升高(AGO1蛋白: t=7.251, P<0.01;mRNA: t=31.260, P<0.001),而VEGF蛋白及mRNA相对水平则明显降低(VEGF蛋白: t=6.286, P<0.05;mRNA: t=9.221, P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-let-7c mimics+ AGO1 WT组细胞中荧光素酶活性较LV3-NC+ AGO1 WT组明显降低(0.639±0.046比1.012±0.078, t=3.483, P<0.05)。体内实验中,外泌体组中MVD值较对照组明显增加[(11.6±2.51)个/每400倍视野比(5.4±1.67)个/每400倍视野, t=11.513, P<0.01]。外泌体组内HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白水平较对照组明显增加(HIF-1α: t=24.662、19.172, P<0.01;VEGF: t=19.830, P<0.01, t=7.762, P<0.01),而AGO1的mRNA及蛋白水平则相对降低( t=29.154、12.883, P<0.01)。 结论:骨髓间充质干细胞来源外泌体中miR-let-7c可靶向结合AGO1,促进多发性骨髓瘤血管生成。
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编辑人员丨2天前
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2014-2021年甘肃省玉门市喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地动物鼠疫流行病学分析
编辑人员丨2天前
目的:了解甘肃省玉门市喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地动物鼠疫流行规律,探讨当地鼠疫流行病学特点,为制订鼠疫防控政策提供科学依据。方法:收集2014-2021年甘肃省玉门市喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫监测数据,分析主要宿主密度、染蚤率、蚤指数、小型啮齿类鼠种及细菌学、血清学检测结果,通过Excel 2007软件进行数据结果统计,分析该自然疫源地鼠疫流行情况。结果:2014-2021年,玉门市喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地内旱獭平均密度为0.06只/hm 2;小型啮齿类鼠种调查共布鼠夹19 300个,捕获鼠209只,捕获率为1.08%,三趾跳鼠(59.81%,125/209)和五趾跳鼠(31.10%,65/209)为该地区主要小型啮齿类鼠种。共梳检旱獭877只,检出染蚤旱獭184只,总染蚤率为20.98%,总蚤指数为1.00,斧形盖蚤(52.69%,461/875)和谢氏山蚤(47.20%,413/875)为优势蚤种;旱獭洞干染蚤率为7.72%(173/2 241),蚤指数为0.20。疫源地内共分离鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)39株,其中以旱獭分离为主,共35株,媒介分离4株。共检测旱獭及牧羊犬血清913份,检出阳性血清34份,其中,牧羊犬血清阳性率为13.98%(33/236)。 结论:甘肃省玉门市喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫防控形势依然严峻,应继续加强鼠疫监测,全面落实各项综合防控措施,严防动物间鼠疫流行波及人群。
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编辑人员丨2天前
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2011-2018年甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫流行特征分析
编辑人员丨2天前
目的:掌握甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫流行特征,为结合当地实际,创新开展鼠疫防控工作提供科学依据。方法:采用回顾性研究,收集2011-2018年甘肃省鼠疫自然疫源地监测数据(来源于甘肃省疾病预防控制中心疫情监测档案、网络直报信息)。采用描述性流行病学方法,分析2011-2018年甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地的鼠疫流行特征,包括宿主动物分布情况、鼠疫菌的病原学及血清学检测结果、人间鼠疫流行特征等。结果:2011-2018年,甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地总平均獭密度为0.21只/hm 2,其中天祝县平均獭密度最高,为0.58只/hm 2;嘉峪关市平均獭密度最低,为0.01只/hm 2。疫源地内共分离鼠疫菌381株,其中分离自人尸4株、宿主动物298株、染疫媒介79株;分离菌株前3位的县(市)依次为阿克塞县(38.85%,148株)、肃北县(31.50%,120株)、玉门市(16.27%,62株)。共检测旱獭血清6 860份、犬血清1 769份,F1抗体阳性率分别为2.70%(185/6 860)、8.42%(149/1 769);动物材料814份,F1抗原阳性率为4.30%(35/814)。共发生人间鼠疫4起,发病4人,死亡4人;其中3起发生在肃北县、1起在玉门市;发病月份分别为7、9、11、12月,主动接触牧羊犬等染疫动物是主要感染途径,外来放牧雇工为重点职业人群。 结论:甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地动物间疫情活跃,且各地区鼠疫疫情呈现不同流行状态;应采取因地制宜、分类指导的防控措施严防鼠疫的发生和传播。
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编辑人员丨2天前
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云南省临沧市新型冠状病毒奥密克戎变异株BN.1的全基因组特征和进化分析(2022年)
编辑人员丨2天前
目的:了解2022年云南省临沧市8例SARS-CoV-2感染者的病毒全基因组测序结果及进化情况。方法:2022年10月30日至11月4日采集临沧市8例SARS-CoV-2感染者的鼻咽拭子样本进行MiniSeq illumina二代测序获得病毒的全基因组序列。应用在线分析平台判断病毒的类型,利用分子进化遗传分析软件鉴别基因的变异位点,与参考基因组进行比对,构建生物进化树。结果:8份样本ORF1ab基因的Ct值为19.16~23.64,N基因为16.71~24.08。全基因组序列显示,基因测序准确度Q30为90.1%(>80%),簇密度为256 K/mm 2。与武汉参考株(GenBank登录号:MN908947.3)序列比较,共检测出1份95处核苷酸突变位点,6份94处核苷酸突变位点,1份93处核苷酸突变位点。病毒分型结果显示,所有样本均属于奥密克戎变异株BN.1进化分支。进化分析结果显示,8份样本差异数小于3,属于同一条传播链。 结论:此次疫情病例为同一传染源,首例病例发病前有边境地区(缅甸)活动史,再结合云南省发生BN.1变异株疫情的地区均处于与缅甸交接处和基因测序结果等情况,综合分析本次疫情为境外(缅甸)输入新的病毒感染的可能性较大。
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编辑人员丨2天前
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靶向EGFRvⅢ的CAR-NK细胞对胶质瘤细胞杀伤作用的体外实验研究
编辑人员丨2天前
目的:探索靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的嵌合抗原受体(CAR)修饰的人外周血来源自然杀伤(NK)细胞在脑胶质瘤细胞中的杀伤作用。方法:通过Ficoll密度梯度离心法获得人外周血来源的NK细胞并进行体外扩增培养,并通过慢病毒感染构建靶向EGFRvⅢ的CAR-NK细胞及U87-EGFRvⅢ稳转细胞株。根据不同效应细胞作用于不同靶细胞而将实验组分为NK+U87组、NK+U87-EGFRvⅢ组、CAR-NK+U87组、CAR-NK+U87-EGFRvⅢ组,通过实时无标记细胞分析(RTCA)及乳酸脱氢酶(LDH)释放实验评价CAR-NK细胞对胶质瘤细胞的杀伤作用,同时使用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B(GzmB)以及穿孔蛋白1(PRF1)在细胞培养上清中的分泌情况。结果:流式细胞分析显示分离、培养得到的人外周血来源NK细胞的纯度为97.6%,存活率为98.2%;成功构建第二代靶向EGFRvⅢ的CAR分子,并成功构建靶向EGFRvⅢ的CAR-NK细胞,流式分析显示阳性细胞率为69.6%。RTCA结果显示靶细胞的生长曲线随时间呈上升趋势,过表达EGFRvⅢ的U87细胞增殖速率要高于U87细胞;在加入效应细胞后,细胞指数呈现下降趋势,在相同效靶比(E ∶T)下,CAR-NK+U87-EGFRvⅢ组的细胞指数下降趋势快于NK+U87-EGFRvⅢ组,且快于CAR-NK+U87组。LDH释放实验进一步证明随着效靶比的增加,靶细胞的裂解率逐渐升高( FNK+U87=700.61、 FCAR-NK+U87=2 063.97、 FNK+U87-EGFRvⅢ=5 707.00、 FCAR-NK+U87-EGFRvⅢ=28 858.57,均 P<0.05);在E ∶T=2 ∶1及E ∶T=3 ∶1时,NK+U87-EGFRvⅢ组、CAR-NK+U87组的细胞裂解率均低于CAR-NK+U87-EGFRvⅢ组(均 P<0.05)。ELISA结果显示,TNF-α、IFN-γ、GzmB及PRF1的分泌量在相同组别内均随着效靶比的增加而增加(均 P<0.05);在相同效靶比下,除了在E ∶T=1 ∶1时,CAR-NK+U87-EGFRv Ⅲ组较CAR-NK+U87组GzmB分泌量的差异无统计学意义( P>0.05);CAR-NK+U87-EGFRvⅢ组分别与NK+U87-EGFRvⅢ组、CAR-NK+U87组相比,TNF-α、IFN-γ、GzmB、PRF1的分泌量均增高(均 P<0.05)。 结论:靶向EGFRvⅢ的CAR-NK细胞对EGFRvⅢ表达阳性的胶质瘤细胞具有较强的杀伤作用,其抗肿瘤能力优于NK细胞。
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编辑人员丨2天前
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湖南省2018年登革热本地暴发流行病学和病毒分子特征分析
编辑人员丨2天前
目的:对湖南省2018年登革热本地暴发疫情进行流行病学及病原学特征研究。方法:对报告的8例疑似登革热病例进行实验室诊断,对病例密切接触者搜索出的186例疑似登革热病例和发热病例开展病原学监测,应用C6/36细胞对病例急性期血清开展病毒分离,对15株登革病毒株E基因测序,分析病毒的血清型别和基因亚型,构建系统发生树,分析可能的传播来源。在疫点开展蚊媒密度应急监测和健康人群回顾性血清流行病学调查。结果:8例疑似病例血清标本,6例登革病毒核酸阳性,4例登革病毒NS1抗原阳性。186例疑似登革热病例,96例病原学检测结果阳性,分离到登革病毒株64株,经鉴定全部为登革病毒2型全球型,来源于广东和浙江省的可能性较大。应急蚊媒密度监测,疫点布雷图指数最高达65,具有极高的登革热传播风险。回顾性调查377名健康人群进行登革热抗体水平监测,IgG抗体阳性率为0.53%(2/377)。结论:现场流行病学调查和分子遗传分析提示,湖南省2018年本地暴发疫情由输入性病例引起,由单一的登革病毒2型全球型引起。
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编辑人员丨2天前
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特异性靶向PD-1分子的PD-15融合蛋白联合G15Ra-K562滋养细胞快速扩增NK/T细胞
编辑人员丨2天前
目的:探讨anti-PD-1(scFv)/hIL-15(简称PD-15)融合蛋白体外特异性结合PD-1的能力及联合GF-hIL-15Ra-K562(简称G15Ra-K562)滋养细胞对自然杀伤细胞(NK)/T细胞增殖能力的影响。方法:Overlap PCR构建G15Ra表达载体,电穿孔仪转染K562,极限稀释法获取G15Ra-K562滋养细胞单克隆株。酶切连接构建PD-15表达载体,Lipofectamine? 2000瞬时转染HEK293T细胞并获取包含PD-15融合蛋白的条件培养液。密度梯度离心获取人外周血单个核细胞,CFSE染色标记活跃增殖细胞。流式细胞术检测PD-15特异性结合PD-1的能力和对人外周血单个核细胞的增殖及不同淋巴亚群比例的影响。结果:成功构建高表达融合蛋白G15Ra的滋养细胞单克隆株G15Ra-K562。添加hIL-15能够将G15Ra-K562滋养细胞扩增人外周血淋巴细胞能力提升5倍以上( P<0.05)。PD-15融合蛋白具有PD-1特异性结合能力( P<0.001),联合G15Ra-K562滋养细胞能够在体外高效扩增人外周血来源的NK/T细胞( P<0.05),扩增得到的细胞产品中以NK、CD8 +T和CD4 +T细胞为主。 结论:PD-15融合蛋白能够特异性靶向PD-1分子且在联合G15Ra-K562滋养细胞后具有强的人外周血来源的NK/T细胞扩增能力,建立了分步、靶向递送IL-15/IL-15Ra复合物至PD-1 +细胞的细胞培养方案,为后续选择性扩增PD-1 +细胞提供实验资料。
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编辑人员丨2天前
