目的:分析微小核糖核酸(mi RNA)let-7c通过靶定细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抑制肝癌细胞增殖的临床意义，并探讨其对肝癌细胞增殖的影响以及靶基因。方法:选取人低转移肝癌细胞-97L(MHCC-97L)、人高转移肝癌细胞(HCCLM3)、人肝癌组织(HepG2)、人肝癌细胞-7721(SMMC-7721)、人肝细胞LO2、小鼠抗人细胞周期蛋白依赖激酶抗体等进行细胞培养，利用Western blot检测转染后小鼠CDK6表达情况，转染48 h后应用细胞裂解液对三组蛋白进行提取，将材料分为观察组、对照组、空白组，观察组转染let-7c，对照组转染阴性对照miRNA，空白组未进行转染处理；应用二喹啉甲酸法对各孔细胞蛋白浓度进行测定。结果:let-7c对肝癌细胞HCCLM3增殖结果显示，于450 nm处观察组、对照组转染后24 h吸光度值差异无统计学意义( P>0.05)；转染48 h后观察组、对照组HCCLM3细胞中CDK6蛋白含量发生较大变化，观察组的CDK6蛋白表达量为(0.58±0.05)，均低于对照组的(0.81±0.08)与空白组(0.85±0.09)( t＝10.107、13.876，均 P<0.05)；转染后72 h，观察组细胞处于G1期比例为(56.21±3.25)%，明显高于对照组的(45.21±1.56)%与空白组的(46.24±1.98)%，差异均有统计学意义( t＝16.146、13.862，均 P＝0.000)。 结论:肝癌细胞中let-7c呈低表达，将let-7c上调可有效调控CDK6，从而抑制癌细胞生长，对肝癌细胞增殖具有明显的抑制作用。

目的:探讨微小 RNA（microRNA，miRNA）在子宫内膜异位症（endometriosis，EMS）患者异位内膜组织中的表达特征。方法:收集2018年4月至2019年10月期间于厦门大学附属第一医院妇产科就诊EMS 患者异位内膜组织和对照组在位内膜组织开展实验。利用Illumina平台的miRNA测序检测内膜组织中 miRNA的表达情况。通过生物信息学分析差异表达的miRNAs及其潜在靶基因在EMS发生、发展中的作用。结合文献挑选6个具有显著差异的miRNAs（miR-98-5p、let-7c-5p、miR-495-3p、miR-200b-3p、miR-200c-3p、miR-148b-3p），应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）进行验证，并在构建miRNA-基因调控网络后初步验证其潜在靶基因。结果:测序结果显示，相比对照组，EMS患者异位内膜组织中有69个miRNAs出现差异表达（差异倍数>1.5， P<0.05），其中表达上调22个，表达下调47个。基因本体分析显示，差异表达的miRNAs所调控的靶基因在生物学过程中集中在与蛋白质修饰、发育调控、细胞代谢和形态结构等相关。KEGG pathway分析显示，靶基因富集于蛋白质功能、自噬、AGE-RAGE及MAPK信号通路中。qRT-PCR结果显示miR-98-5p、let-7c-5p、miR-200b-3p、miR-200c-3p的表达情况与测序结果一致。miRNA-基因共表达网络显示 miRNAs与所预测的靶基因间的相互关系。miRNAs潜在靶基因的qRT-PCR验证结果显示，miR-200b-3p、miR-200c-3p与 ZEB2呈负相关，miR-98-5p与 PGRMC1呈负相关，miR-98-5p、let-7c-5p与 ADIPOR2呈正相关。 结论:miR-98-5p、let-7c-5p、miR-200b-3p和miR-200c-3p在EMS患者异位内膜组织中存在显著差异表达，可能参与EMS的发生、发展。

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清let-7、微小RNA-26b(miR-26b)表达水平及与胰岛素抵抗(IR)的关系。方法:选取2018年3月至2019年3月本院内分泌科收治的60例初诊T2DM患者作为T2DM组，及同期本院70例健康体检者作为对照组。收集两组受试者临床资料，使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定血清let-7、miR-26b表达水平；观察T2DM患者血清let-7、miR-26b表达水平及其与其他临床指标相关性，并采用ROC曲线分析血清let-7、miR-26b表达水平对T2DM患者发生IR的预测价值。结果:T2DM组患者总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均显著高于对照组( P<0.05)，胰岛素敏感性指数(ISI)、稳态模型评估的胰岛素β细胞功能指数(HOMA-β)均明显低于对照组( P<0.05)。T2DM组患者血清let-7、miR-26b表达水平均明显低于对照组( P<0.05)。T2DM组患者血清let-7、miR-26b表达水平与TC、TG、HbA1c、FPG、FINS及HOMA-IR均呈负相关( P<0.05)，与ISI、HOMA-β均呈正相关( P<0.05)。ISI、HOMA-IR及血清let-7、miR-26b表达水平均是影响T2DM患者发生IR的独立危险因子( P<0.05)。血清let-7表达水平预测T2DM患者发生IR的曲线下面积(AUC)为0.858，最佳截断值为0.73，灵敏度和特异度分别为77.50%、80.00%；血清miR-26b表达水平预测T2DM患者发生IR的AUC为0.908，最佳截断值为0.60，灵敏度为80.00%，特异度高达92.50%。 结论:T2DM患者血清let-7、miR-26b表达水平均显著下调，两者可能共同参与IR发生、发展，对T2DM患者发生IR均具有一定预测价值，且miR-26b预测效果更优。

目的:探讨c-Myc调控的微小RNA(miRNA，miR)表达及其在三阴性乳腺癌(TNBC)转移中的作用机制。方法:采用慢病毒构建c-Myc低表达的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231，分为c-Myc沉默组、阴性对照组和空白对照组，分别对不同MDA-MB-231细胞进行miRNA测序，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)验证具有显著差异的hsa-let-7a、hsa-let-7c、hsa-let-7d、hsa-miR-34c和hsa-miR-98在细胞中的表达，及20例三阴性乳腺癌组织和癌旁组织中c-Myc和hsa-let-7a的表达水平。采用方差分析、Sidak方法比较多组差异分析。结果:与对照组比较，c-Myc沉默组中有126个miRNA存在显著差异，其中84个显著上调，42个显著下调。RT-qPCR验证发现与对照组比较(1.007±0.128，1.003±0.084，1.008±0.138，1.013±0.184，1.009±0.148)，在c-Myc沉默组中，hsa-miR-34c(0.693±0.167， F＝6.825， P<0.05)、hsa-miR-98下调(0.737±0.145， F＝5.260， P<0.05)，hsa-let-7a(1.474±0.349， F＝7.081， P<0.05)、hsa-let-7c(1.630±0.485， F＝7.387， P<0.05)、hsa-let-7d上调(2.104±0.636， F＝11.370， P<0.05)。 结论:c-Myc调控let-7a、let-7c、let-7d、miR-34c和miR-98影响三阴性乳腺癌侵袭转移。

目的:探讨雄激素受体(AR)在非小细胞肺癌(NSCLC)中促进肺癌细胞A549及H1533细胞侵袭的具体机制。方法:通过在A549及H1533细胞中过表达或敲低AR，采用Transwell方法观察AR对A549及H1533细胞侵袭的影响；筛查NSCLC中与侵袭密切相关的基因，寻找可以被AR调控的下游基因，采用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)来验证该靶基因与AR的调控关系，采用Transwell方法来验证其对细胞侵袭的影响；通过生信分析寻找靶基因跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)的调控微小RNA(miRNA)，采用qPCR和Western blot方法来验证该miRNA与TMPRSS2的调控关系，采用Transwell方法来验证其对细胞侵袭的影响；最后通过裸鼠在体成瘤实验观察上述基因对肿瘤细胞侵袭的影响，并采用 t检验比较各组间差异。 结果:过表达AR增加了肺癌细胞(H1355-oeAR和A549-oeAR)的侵袭(0.75±0.08比1.84±0.25、0.54±0.04比1.39±0.30， t＝36.360、5.362， P<0.05)，敲低AR降低了肺癌细胞的侵袭(A549-shAR)(0.83±0.08比0.22±0.03、0.61±0.07比1.90±0.29， t＝45.178， P<0.01)。采用生信分析预测及qPCR验证发现TMPRSS2表达受AR调控(0.55±0.04比1.67±0.37、0.46±0.04比1.67±0.29， t＝23.152、43.228， P<0.01)。H1355-oeAR和A549-oeAR组TMPRSS2的表达(0.29±0.04比1.28±0.18、0.32±0.03比1.16±0.15， t＝7.152、4.298， P<0.05)显著高于对照组。敲低TMPRSS2部分降低H1355-oeAR和A549-oeAR组细胞侵袭(0.78±0.05比0.25±0.01、0.82±0.06比0.36±0.01， t＝6.358、14.298， P<0.05)，敲低TMPRSS2还可部分降低H1355-oeAR和A549-oeAR中AR水平(2.25±0.44比1.10±0.14、2.32±0.53比1.15±0.23， t＝8.258、12.538， P<0.05)；通过生信分析及验证实验发现let-7c-5p可以抑制TMPRSS2表达(1.27±0.11比0.48±0.08、1.35±0.33比0.56±0.08， t＝47.110， P<0.01)，过表达let-7c-5p可以部分逆转过表达AR所致的H1355和A549细胞的侵袭(1.77±0.34比0.94±0.10、2.35±0.33比1.10±0.11， t＝33.116、21.108， P<0.01)。也可以降低过表达AR所致的TMPRSS2蛋白表达(1.09±0.13比0.55±0.08、1.36±0.21比0.76±0.10， t＝3.760、10.105， P<0.05)；ChIP结果表明，let-7c-5p可以与H1355和A549细胞中TMPRSS2 3’启动子区域的AREs结合(0.23±0.02比1.32±0.20、0.34±0.03比1.10±0.10， t＝7.110、5.175， P<0.05)，双荧光素酶检测结果显示，let-7c-5p可以抑制野生型TMPRSS2 3’端非编码区(3’UTR)结构的荧光素酶表达，而不能抑制突变型TMPRSS2 3’UTR结构的荧光素酶表达(1.25±0.14比0.44±0.03、0.58±0.03比0.66±0.08， t＝12.510， P<0.05； t＝1.175， P>0.05)；通过IVIS对裸鼠肿瘤进行评估，发现oeAR＋luc组比Ctrl＋luc组发生更多的肿瘤细胞侵袭(0.33±0.04比0.78±0.08， t＝7.566， P<0.05)，而oeAR＋shTMPRSS2＋luc组较oeAR＋luc组侵袭降低(0.19±0.04比0.78±0.18， t＝8.56， P<0.05)。 结论:AR可以通过改变let-7c-5p/TMPRSS2信号通路来促进肺癌细胞A549及H1533侵袭。

目的:探究多发性骨髓瘤外泌体中微小RNA(miR)-let-7c对血管内皮细胞生物学功能的影响及机制。方法:从多发性骨髓瘤初治患者的骨髓活检标本中原代培养出骨髓瘤内皮细胞，慢病毒感染后建立miR-let-7c过表达或抑制内皮细胞稳染株，使用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell迁移实验及小管形成实验检测感染后内皮细胞的生物学行为改变，并采用生物学信息技术预测miR-let-7c与argonaute1(AGO1)蛋白的靶向调控区，双荧光素酶报告基因实验论证两者之间的靶向调控作用。构建多发性骨髓瘤移植瘤小鼠模型，采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组移植瘤组织中miR-let-7c的表达水平，免疫组织化学标记内皮细胞表面CD31来计算各组肿瘤微血管密度(MVD)；采用蛋白印迹法检测各组移植瘤组织中缺氧诱导因子1α (HIF-1α)、AGO1及血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达；采用qRT-PCR检测各组移植瘤组织中HIF-1α、AGO1及VEGF的mRNA表达。两组均数间用独立样本t检验，两组以上均数的比较用方差分析。结果:用CCK-8试剂盒检测发现，接种后2 d LV3-miR-let-7c mimics组细胞增殖能力较NC组出现明显增强( t＝25.185， P<0.05)，而LV3-miR-let-7c inhibitor组细胞增殖能力较NC组明显减慢( t＝8.708， P<0.05)。通过Transwell迁移实验证实，Mimics组细胞迁移能力较NC组明显增强( t＝30.261， P<0.001)，Inhibitor组则较对照组明显下降( t＝9.459， P<0.01)，小管形成实验结果显示，Mimics组细胞体外成管长度较NC组明显增强[(17.861±0.550) mm比(13.632±0.500) mm， t＝5.685， P<0.01]，而Inhibitor组体外成管长度则较NC组明显下降[(7.180±0.144) mm比(13.632±0.500) mm， t＝12.514， P<0.001]。采用蛋白印迹法及qRT-PCR发现，Mimics组VEGF蛋白及mRNA相对水平较NC组明显增加(VEGF蛋白： t＝12.720， P<0.001；mRNA： t＝12.493， P<0.01)，而AGO1蛋白及mRNA水平则较NC组降低(AGO1蛋白： t＝6.544， P<0.001；mRNA： t＝5.433， P<0.05)，Inhibitor组中AGO1蛋白及mRNA水平明显升高(AGO1蛋白： t＝7.251， P<0.01；mRNA： t＝31.260， P<0.001)，而VEGF蛋白及mRNA相对水平则明显降低(VEGF蛋白： t＝6.286， P<0.05；mRNA： t＝9.221， P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示，miR-let-7c mimics＋ AGO1 WT组细胞中荧光素酶活性较LV3-NC＋ AGO1 WT组明显降低(0.639±0.046比1.012±0.078， t＝3.483， P<0.05)。体内实验中，外泌体组中MVD值较对照组明显增加[(11.6±2.51)个/每400倍视野比(5.4±1.67)个/每400倍视野， t＝11.513， P<0.01]。外泌体组内HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白水平较对照组明显增加(HIF-1α： t＝24.662、19.172， P<0.01；VEGF： t＝19.830， P<0.01， t＝7.762， P<0.01)，而AGO1的mRNA及蛋白水平则相对降低( t＝29.154、12.883， P<0.01)。 结论:骨髓间充质干细胞来源外泌体中miR-let-7c可靶向结合AGO1，促进多发性骨髓瘤血管生成。

目的:探究过量氟暴露对小鼠睾丸微小RNA（microRNA，miRNA）表达谱的影响，并探讨氟的生殖毒性机制。方法:24只8周龄C57BL/6J雄性小鼠，体重为（23 ± 1）g，按体重采用随机数字表法分为对照组[0 mg/L氟化钠（NaF）]和氟暴露组（50 mg/L NaF），每组12只，处理90 d后麻醉处死小鼠，采集精子检测其数量、活率、畸形率，并对睾丸组织进行HE染色；提取小鼠睾丸组织RNA，利用高通量测序技术检测氟对小鼠睾丸miRNA表达谱的影响，并进行差异表达miRNA筛选及其靶基因预测，同时进行功能注释和通路富集分析；利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证差异表达miRNA的表达量。结果:与对照组[精子数量：（11.30 ± 2.52）× 10 6/ml、活率：（90.07 ± 4.34）%、畸形率：（15.49 ± 3.25）%]相比，氟暴露组小鼠精子数量[（9.01 ± 2.25）× 10 6/ml]和活率[（84.34 ± 4.21）%]均下降（ P = 0.041、0.003），而畸形率[（22.36 ± 6.51）%]上升（ P = 0.003）；且HE染色显示，氟暴露组小鼠睾丸间质间距增大，生精小管管腔内精子数量减少，细胞排列紊乱。通过测序，发现氟暴露组小鼠睾丸中存在34个差异表达miRNA；经qRT-PCR验证，与对照组相比，氟暴露组小鼠睾丸mmu-miR-29b-1-5p（ P < 0.001）、mmu-miR-196a-5p（ P = 0.002）和mmu-miR-196b-5p（ P = 0.031）的表达量均显著上升；而mmu-let-7a-2-3p（ P < 0.001）和mmu-miR-466n-3p（ P = 0.018）的表达量均明显下降，与测序结果一致。通过对差异表达miRNA靶基因的KEGG富集，发现氟暴露可改变小鼠睾丸中轴突导向（axon guidance）信号通路、嗅觉传导（olfactory transduction）通路、神经活动配体-受体相互作用（neuroactive ligand-receptor interaction）通路和溶酶体（lysosome）信号通路等。 结论:氟暴露可能通过改变睾丸中miRNA的表达谱，以及通过介导转录后调节的信号通路进而诱导睾丸损伤。睾丸miRNA可能是氟生殖毒性的潜在生物标志物，可为氟中毒机制的探究提供新思路和观点。

目的 筛选卵巢功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者卵泡液外泌体差异表达微小核糖核酸(micro RNA,miRNA),探索其与DOR相关的潜在分子机制.方法 收集 2021 年 12 月～2022 年 3 月于柳州市人民医院生殖医学科辅助生殖助孕 18 例患者的卵泡液为研究样本,根据卵巢功能评估结果分为卵巢功能正常(Normal)组和卵巢功能减退(DOR)组.miRNA PCR阵列芯片法检测两组卵泡液外泌体miRNA的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证芯片结果,最后通过生物信息学分析差异表达miRNA的靶基因及其富集的相关生物学功能和分子通路.结果 DOR组筛选出 5 条差异表达miRNA:let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达下调,miR-483-3p表达上调;qRT-PCR验证结果显示与Normal组比较,DOR组let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达降低,miR-483-3p的表达升高,差异具有统计学意义(t=3.147,4.405,3.95,3.147,-3.198,均P＜0.05);差异表达miRNA的靶基因主要富集于p53 信号通路和FoxO信号通路,靶基因CDKN1A,RRM2,CCND1,SESN3,MDM4,BCL2L11,SMAD4,IGF1 及IGF1R参与p53 信号通路和FoxO信号通路,靶基因METTL3,METTL6 及METTL8 参与RNA m6A甲基化.结论 DOR患者卵泡液外泌体中的差异表达miRNA参与p53 和FoxO信号通路及RNA m6A甲基化的调控,是DOR发生机制和诊疗的潜在标靶.

微小RNA (microRNAs,miRNA)是一种短链的非编码RNA,它通过抑制RNA的翻译或促进RNA的降解调控多种细胞活动和机体的发育.机体主要通过转录和转录后两个层面对miRNA的表达进行调控,其中对miRNA转录水平的调控决定了miRNA表达的特异性,而目前我们对其转录后调控的机制还知之甚少.本研究旨在证实RNA结合蛋白HuR是否通过与pri-miRNA中富含AU的序列相结合调节miRNA的表达.利用生物信息学方法对pri-miRNA中的AUUUA模体进行筛查,发现在hsa-let-7c下游富含AUUUA模体,而hsa-miR-21则不具备这一模体.通过转染HuR质粒到HEK293T细胞构建过表达模型,然后用Westem blot和real-time PCR分别检测HuR蛋白和miRNAs表达水平.结果显示,过表达HuR能够促进成熟hsa-let-7c而非hsa-miR-21表达.而过表达缺失RNA识别模体3(RNA recognition motif,RRM3)的突变体HuR则不能促进hsa-let-7c的表达.以上结果提示RRM3是HuR介导成熟hsa-let-7c表达的关键序列,而HuR在调控miRNA生物合成中可能扮演了一种新的角色,即在转录后水平调节miRNA的表达.

目的 观察微小RNA let7c(miR-let7c)对小鼠精原细胞株GC-1spg中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)表达的调控作用.方法 构建过表达miR-let7c慢病毒、沉默表达miR-let7c慢病毒及空载体对照慢病毒,并用其感染GC-1spg细胞,分别为miR-let7c上调组、miR-let7c下调组和对照组.转染后72 h收集三组细胞,用荧光定量PCR法检测CDKN1A mRNA,用Western blotting法检测CDKN1A蛋白.结果 miR-let7c上调组、miR-let7c下调组、对照组CDKN1A mRNA相对表达量分别为0.0056 ±0.0009、0.0391 ±0.0067、0.0219 ±0.0018, CDKN1A蛋白相对表达量分别为0.0348 ±0.0026、0.8335 ±0.0532、0.2574 ±0.0709.与对照组比较,miR-let7c上调组CDKN1A mRNA和蛋白相对表达量低于miR-let7c下调组及对照组(P均<0.01),miR-let7c下调组CD-KN1A mRNA和蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.01).结论 miR-let7c可负向调控小鼠精原细胞株GC-1spg中CDKN1A mRNA和蛋白表达.