报告1例新生儿播散性幼年性黄色肉芽肿(JXG).患儿女性,出生 1h,出生可见全身散在卵圆形红斑及结节.皮肤科检查:颜面、颈部、躯干等多处可见暗红色斑块及结节,结节高出皮肤表面,境界清楚,质韧,可活动,表面轻度橘皮样改变.皮损组织病理检查:皮肤及皮下组织,真皮内组织细胞弥漫增生浸润,由卵圆形-短梭形细胞组成.免疫组织化学染色:巨噬细胞CD68、巨噬细胞CD163 和溶菌酶(Lysozyme)均阳性,树突细胞CD1α和天冬氨酸蛋白酶S-100 蛋白均阴性.诊断:播散性JXG.未予特殊治疗,目前仍在随访中.

目的:探讨宫颈孤立性髓系肉瘤的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法:收集2015—2021年南京医科大学第一附属医院病理科诊断的宫颈孤立性髓系肉瘤3例，观察组织病理学形态、免疫组织化学特征，并复习相关文献。结果:3例女性患者，年龄分别为68、44、66岁。临床表现均为阴道不规则出血。肉眼于颈管见浅绿色病灶（例2）。镜下肿瘤呈弥漫性浸润性生长，细胞间黏附性差，部分呈单行线状排列，肿瘤细胞形态单一，小至中等大小，胞质稀少，核染色质细腻，部分细胞核折叠、扭曲，核分裂象少见，例2、例3肿瘤细胞间可见散在分布的不成熟嗜酸性粒细胞。免疫组织化学肿瘤细胞均阳性表达髓过氧化物酶、CD43、溶菌酶、CD117、CD99。例1、例3分别于确诊后25个月、5个月死亡，例2确诊后随访20个月，一般情况尚可。结论:宫颈孤立性髓系肉瘤罕见，需结合组织形态、免疫组织化学、骨髓及外周血情况综合诊断。

目的:探讨戈谢病临床病理学特点。方法:收集戈谢病1型3例病例进行组织学、免疫组织化学、超微结构及临床病理分析，其中1例进行全外显子测序。结果:患者3例，例1男性，例2和例3均为女性，年龄分别为42、23和26岁。组织学观察，在脾窦、肝窦和骨组织中充满戈谢细胞，呈簇状或片状聚集，组织结构破坏。戈谢细胞体积大，有1个或多个小而深染、偏位的胞核，胞质丰富，呈纤维状或“皱纹纸”状。电镜观察，胞质内有大量特征性的膜结合管状结构的溶酶体包涵体。免疫组织化学显示，戈谢细胞均呈CD68、CD163、CD4、CD11c、CD31、CD45、HLA-DR、溶菌酶和波形蛋白阳性。Ki-67阳性指数<1%。例3进行全外显子测序，发现有复合杂合性GBA c.1226A>G，p.N409S和c.115+1G>A剪接突变。结论:戈谢病病理形态结合免疫组织化学及超微结构，有助于诊断，最终还需基因检测确诊。

目的:探讨基于定量蛋白质组学串联质谱标签（TMT）技术筛选糖尿病足皮肤抗菌肽的可行性和价值。方法:收集2017年4月至2018年12月在东南大学附属中大医院行清创手术的糖尿病足患者的下肢溃疡周围皮肤全层和同期行其他手术非糖尿病患者的下肢皮肤全层标本各3例患者标本。利用TMT技术分别对上述标本进行蛋白组学分析，筛选出发生显著变化的差异蛋白。搜索UniProt-GOA数据库对鉴定到的差异蛋白生物学作用阐释。以鉴定到的蛋白为背景，利用Fisher精确检验法评价差异表达蛋白。利用InterPro数据库分析差异表达蛋白功能结构域的富集情况。结果:共发现133个差异蛋白，其中表达上调和下调的蛋白分别为101个和32个。基因本体（GO）富集分析表明，在蛋白生物学过程中最显著富集的过程为对细菌的防御过程，其次为抗菌体液反应过程。共有19个蛋白涉及对细菌的防御反应过程，其中18个蛋白发生了上调，1个蛋白发生了下调。差异蛋白上调倍数达4倍以上的共有8个，分别为蛋白为溶菌酶C、中性粒细胞弹性蛋白酶、杀菌渗透性增加蛋白、乳铁蛋白、膜相关磷脂酶A2、肽聚糖识别蛋白1、免疫球蛋白J链和蛋白S100-A12。共有8个蛋白涉及抗菌体液反应过程，其中7个蛋白与对细菌的防御反应中涉及的蛋白重叠。通过蛋白互作分析显示，差异表达的抗菌反应蛋白形成了一个包含14个节点和34条边的复杂调控网络，平均节点度为4.86，聚类系数为0.652。结论:通过TMT标记蛋白组学技术发现，参与对细菌的防御反应及抗菌体液免疫反应的差异蛋白，如溶菌酶C、中性粒细胞弹性蛋白酶、杀菌渗透性增加蛋白、乳铁蛋白、膜相关磷脂酶A2、肽聚糖识别蛋白1、免疫球蛋白J链和蛋白S100-A12，有望成为治疗糖尿病足感染的新靶点。

目的:构建髓系细胞特异性Clcn7-G763R突变的骨硬化小鼠模型，并进行表型研究。方法:构建条件性敲入Clcn7基因p.G763R错义突变小鼠，并与溶菌酶M启动子-重组酶转基因小鼠(LysM cre)交配繁殖，最终获取髓系细胞特异性Clcn7-G763R突变的骨硬化小鼠。利用Micro CT分析不同基因型小鼠骨微细结构的差异，利用HE染色观察骨组织形态学改变。诱导原代破骨细胞，通过实时荧光定量PCR技术检测破骨细胞分化和成熟相关基因表达水平。利用骨吸收陷窝实验观察破骨细胞功能。结果:4周龄时纯合突变小鼠体重较野生型小鼠减轻[(12.000±1.666)g对(15.630±2.314)g， P＝0.021]，股骨长度较野生型缩短[(1.160±0.096)cm对(1.300±0.082)cm， P＝0.037)]。Micro CT发现纯合突变小鼠骨密度在4周龄时较野生型小鼠显著增加[(0.753±0.002)g/cm 3对(0.143±0.034)g/cm 2， P＝0.003]，而杂合突变小鼠骨密度在8周龄时增加明显[(0.236±0.021)g/cm 3对(0.180±0.020)g/cm 3， P＝0.030]。HE染色发现纯合突变小鼠骨髓腔消失，松质骨骨小梁数量显著增多，软骨肥大区增宽；杂合突变小鼠骨小梁较野生型小鼠增多。体外实验中，杂合突变小鼠破骨细胞数量较野生型无明显变化( P＝0.358)，但破骨细胞面积增大[(3.590×10 6±0.911×10 6)μm 2对(1.352×10 6±0.260×10 6)μm 2， P＝0.043]，骨吸收陷窝相关检测结果提示破骨细胞功能降低，而破骨细胞分化和成熟相关基因NFATc1、c-fos、Ctsk和Acp5表达水平均无显著变化。 结论:本研究成功构建髓系细胞特异性Clcn7-G763R突变的小鼠，突变型小鼠破骨细胞功能受损，骨量显著增加且股骨变短，为后续机制研究和治疗探索提供工具。

目的:探究新生小鼠肠道类器官的发育成熟过程，为围产期胎儿/新生儿肠道上皮发育及相关疾病的研究提供新模型。方法:取3日龄C57BL/6小鼠肠道组织，利用标准条件培养肠道类器官，传代培养至第5代。利用倒置相差显微镜观察并记录各代肠道类器官形态变化。利用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫荧光技术检测各代肠道类器官中肠道干细胞及肠道上皮各类型分化细胞标志物的表达及组织细胞定位（选取的标志基因：肠道干细胞： Lgr5；胎儿期肠道祖细胞： Tpm2和 Gja1；肠道上皮细胞： Villin；帕内特细胞： Lyz1；杯状细胞： Muc2；内分泌细胞： Chga；选取的各细胞标志蛋白：肠上皮细胞：绒毛蛋白；杯状细胞：黏蛋白2；内分泌细胞：嗜铬粒蛋白A；帕内特细胞：溶菌酶）。采用单因素方差分析和Bonferroni检验进行统计学分析。 结果:新生小鼠肠道类器官中存在不成熟的球状体和具有隐窝-绒毛结构的成熟型类器官这2种类型。原代培养物中以球状体为主要形态，占（96.61±1.36）%；从原代至传代第2代间，类器官形态变化表现为球状体比例明显下降［第2代占比下降至（8.93±1.50）%］，且面积缩小（ F=12.88， P<0.001）；第2代至第5代类器官的形态以成熟类器官为主，占比从（91.07±1.50）%升至（95.56±2.14）%。肠道干细胞标志基因 Lgr5的表达在从原代传代到第2代之间降低（ F=76.75， P<0.001），第2代 Lgr5表达为原代的0.40±0.06，在第2代之后上升。胎儿期肠道祖细胞标志基因 Tpm2表达在传代中明显下降（原代1.00±0.11，第5代0.003±0.001， F=148.00， P<0.001）； Gja1的表达在原代（1.00±0.14）至第2代（0.06±0.04）间下降（ F=197.10， P<0.001），在第2代后保持稳定低表达（ F=2.20， P=0.13）。肠道上皮内各类型分化细胞（肠上皮细胞、杯状细胞、内分泌细胞和帕内特细胞）的标志基因表达在传代第2代之后呈现升高趋势（ Villin：第2代0.46±0.11，第5代1.02±0.05； Muc2：第2代0.68±0.29，第5代8.79±0.61； Chga：第2代2.53±0.16，第5代4.32±0.45； Lyz1：第2代0.98±0.21，第5代3.81±0.36； P值均<0.05）。免疫荧光染色结果显示，在原代及第5代培养物中，肠上皮细胞标志蛋白绒毛蛋白均沿肠道类器官绒毛侧分布。杯状细胞标志蛋白黏蛋白2及内分泌细胞标志蛋白嗜铬粒蛋白A在原代中表达很低，而到第5代中染色明显。在原代培养物中帕内特细胞标志蛋白溶菌酶弥散性均匀分布在类器官细胞内，而在第5代中可见高荧光强度点状表达。 结论:新生小鼠肠道类器官的连续培养可模拟未成熟肠道上皮的发育成熟过程。原代至传代第2代类器官也许可作为胎儿至新生儿期肠道上皮发育的研究模型，传代第2~5代类器官也许可作为新生儿期肠道疾病研究的新模型。

目的:建立正常小鼠小肠类器官体外培养体系并进行功能鉴定，为慢性肾脏病下肠道的物质转运提供体外研究工具。方法:分离提取C57BL/6J小鼠小肠隐窝，于体外三维培养体系中培养，倒置显微镜下观察小肠类器官的形成过程，苏木精-伊红染色观察小肠类器官的组织结构，免疫荧光鉴定小肠类器官的细胞构成，实时荧光定量PCR检测小肠类器官中物质吸收相关转运体的表达。结果:成功提取小肠隐窝，并顺利构建小肠及不同肠段类器官，所培养的类器官具有旺盛的增殖能力，传代后仍能维持增殖状态。免疫荧光结果显示小肠类器官表达黏蛋白2、嗜铬粒蛋白A、Oflm4及溶菌酶不同类型肠道细胞标志物。实时荧光定量PCR结果显示小肠类器官表达钙盐、磷酸盐、钠盐吸收相关转运体，且不同肠段类器官钠盐及磷酸盐吸收主要转运体mRNA表达水平与体内一致，符合小肠节段性吸收的特点。结论:成功构建小肠及不同肠段类器官，首次观察到类器官中物质吸收相关转运体的表达，为慢性肾脏病下开展肠道物质转运体外研究提供了稳定和便利的工具。

目的:了解PM 2.5对杭州市学龄儿童唾液溶菌酶含量的影响。 方法:按照整群随机抽样原则在杭州市下城区、西湖区、淳安县各一所小学的3~5年级班级中总共随机抽取2个班的正常健康学龄儿童作为调查对象，三校于2015年10月和2016年1月分别进行2次学生唾液溶菌酶含量检测及问卷调查。同时收集2015—2016年三校附近的环境空气质量资料，建立唾液溶菌酶含量增高的多元线性回归方程，分析PM 2.5对学龄儿童唾液溶菌酶含量的影响。 结果:共纳入学龄儿童248名，经2次测量杭州市西湖区、下城区和淳安县儿童平均唾液溶菌酶含量分别为（566.55±157.56），（577.92±159.39）和（627.41±204.42）μg/L，三个地区儿童唾液溶菌酶含量差异有统计学意义（ F=11.322， P<0.01)。西湖区和下城区PM 2.5平均浓度为80 μg/m 3和77 μg/m 3，属于高霾区，淳安县为53 μg/m 3，属于低霾区。分析显示，多元线性回归方程有统计学意义（ F=6.360， P<0.01)，低霾区学生唾液溶菌酶含量增高量较高霾区学生更大，开窗通风频次越少唾液溶菌酶含量增高量越大。 结论:PM 2.5对学龄儿童唾液溶菌酶含量有影响，雾霾对学龄儿童唾液溶菌酶含量存在负效应。

目的:分析盲肠结扎穿孔术（CLP）诱导的脓毒症对肠上皮细胞增殖和分化的影响。方法:①动物实验：将16只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组）和CLP致脓毒症模型组（CLP组），每组8只。术后5 d取空肠组织，用聚合酶链反应（PCR）检测富亮氨酸重复序列G蛋白耦联受体5（LGR5）和肠型碱性磷酸酶（IAP）的转录表达水平；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测LGR5的翻译水平；用免疫组化法分析增殖细胞核抗原（Ki67）的表达；用改良钙钴染色法和比色法检测组织IAP水平；免疫荧光法检测肠道潘氏细胞标记分子溶菌酶1（LYZ1）和杯状细胞标记分子黏蛋白2（MUC2）的表达。②细胞实验：取对数生长期的大鼠小肠隐窝细胞（IEC6细胞），并分为空白对照组和脂多糖（LPS）组（LPS 5 μg/mL）。24 h后分别用PCR和Western blotting检测LGR5的转录和翻译水平；用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）染色检测IEC6细胞增殖情况；分别用PCR和比色法检测IAP的转录和翻译水平。结果:①动物实验：免疫组化结果显示，CLP组小鼠空肠组织Ki67染色阳性率低于Sham组〔（41.7±2.5）%比（48.7±1.4）%， P＝0.01〕。PCR和Western blotting结果显示，CLP组与Sham组小鼠空肠组织LGR5表达差异均无统计学意义（Lgr5 mRNA：0.7±0.1比1.0±0.2， P＝0.11；LGR5/β-actin：0.83±0.17比0.68±0.19， P＝0.24）；CLP组小鼠空肠组织IAP在转录水平（0.4±0.1比1.0±0.1， P<0.01）和蛋白水平（U/g：47.3±6.0比73.1±15.3， P<0.01）均低于Sham组。免疫荧光显示，CLP组小鼠空肠组织LYZ1、MUC2的表达水平均低于Sham组。②细胞实验：PCR和Western blotting结果显示，LPS组与空白对照组IEC6细胞LGR5表达水平差异无统计学意义（Lgr5 mRNA：0.9±0.1比1.0±0.2， P＝0.33；LGR5/β-actin：0.71±0.18比0.69±0.04， P＝0.81）。LPS组IEC6细胞增殖率低于空白对照组，但差异无统计学意义〔EdU阳性率：（40.5±3.8）%比（46.5±3.6）%， P＝0.11〕。LPS组IAP转录水平（0.5±0.1比1.0±0.2， P<0.01）和蛋白水平（U/g：15.0±4.0比41.2±10.4， P<0.01）均低于空白对照组。 结论:CLP诱发的脓毒症可抑制肠上皮细胞的增殖和分化，损伤肠上皮自我更新的能力。

目的:研究短时消毒对母乳中主要生物活性物质以及免疫细胞的影响。方法:收集2020年5月至2020年10月复旦大学附属儿科医院新生儿重症监护病房收治的早产儿母亲的新鲜母乳。将同一份母乳分为3份，按不同的处理方法分为未消毒组、巴氏消毒（62.5 ℃ 30 min）组和短时消毒［（62.5±0.5） ℃ 5 s］组。通过酶联免疫吸附法检测乳清中的分泌型免疫球蛋白A（secretory immunoglobulin A，sIgA）、乳铁蛋白（lactoferrin，LTF）、溶菌酶（lysozyme，LZM）以及胰岛素样生长因子结合蛋白-3（insulin-like growth factor binding protein-3，IGFBP-3）的含量；通过流式细胞术检测母乳中存活免疫细胞（白细胞、单核细胞、T细胞、B细胞）的数量及其百分比。应用弗里德曼双向秩方差分析（Friedman检验）、Bonferroni校正、配对样本 t检验或配对样本非参数检验等方法，对数据进行统计学分析。 结果:共收集53位母亲的新鲜母乳共87份 。（1）未消毒组sIgA、LTF、LZM的含量均高于短时消毒组［0.42 mg/ml（0.33～0.65 mg/ml）与0.40 mg/ml（0.28～0.62 mg/ml），（3.57±1.06）与（3.53±1.11） mg/ml，128.60 μg/ml（77.18～203.00 μg/ml）与121.70 μg/ml（68.66～188.20 μg/ml）］，而短时消毒组又高于巴氏消毒组［0.25 mg/ml（0.17～0.37 mg/ml）、（0.85±0.58） mg/ml和83.40 μg/ml（47.40～151.40 μg/ml）］（ P值均<0.05）。巴氏消毒组sIgA、LTF、LZM的保有率均低于短时消毒组［55.87%（46.01%～71.41%）与96.93%（83.03%～115.90%）；21.72%（12.54%～29.42%）与97.88%（88.98%～104.30%）；69.26%（49.42%～89.08%）与93.80%（74.85%～110.20%）； P值均<0.05］。3组IGFBP-3含量和保有率差异无统计学意义（ P值均>0.05）。（2）巴氏消毒组存活白细胞、单核细胞、T细胞和B细胞数量明显低于未消毒组［185.50个（87.00～356.50个）与1 271.00个（540.50～2 283.00个）；12.00个（6.00～16.75个）与266.00个（137.30～518.80个）；1.00个（0.00～2.00个）与47.50个（28.50～116.00个）；1.00个（0.00～1.75个）与21.00个（10.00～41.50个）； P值均<0.05］；巴氏消毒组存活白细胞占全部白细胞百分比，以及存活单核细胞、T细胞和B细胞占存活白细胞的百分比也明显低于未消毒组［24.80%（16.00%～36.80%）与74.20%（63.55%～86.45%），5.91%（4.09%～8.77%）与21.90%（17.40%～29.30%）；0.31%（0.00%～1.31%）与4.00%（2.69%～6.43%）；0.30%（0.00%～0.86%）与1.27%（0.57%～2.85%）； P值均<0.05］。短时消毒组与未消毒组相比，也呈现类似趋势（ P值均<0.05）。但短时消毒组母乳存活白细胞和单核细胞数量及其分别占全部白细胞和存活白细胞的百分比［白细胞：279.50个（116.80～548.50个），32.20%（20.70%～45.75%）；单核细胞：32.00个（21.00～83.75个），15.60%（11.10%～19.15%）］明显高于巴氏消毒组（ P值均>0.05）。（3）不论采用巴氏消毒还是短时消毒，母乳中存活的单核细胞、T细胞以及B细胞占相应亚群的百分比均低于未消毒组［2.94%（1.33%～7.14%）、9.72%（5.77%～16.00%）与52.60%（31.35%～68.75%）；0.00%（0.00%～1.61%）、0.49%（0.00%～2.53%）与28.10%（10.55%～57.00%）；0.00%（0.00%～0.83%）、0.24%（0.00%～2.47%）与13.80%（3.27%～41.00%）； P值均<0.05］，短时消毒组仅存活单核细胞所占百分比高于巴氏消毒组。 结论:短时消毒相较于巴氏消毒能够更好地保留母乳中的sIgA、LTF和LZM，同时可以较好地保留单核细胞的活性。