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茱萸丸调控p53/SLC7A11信号通路介导氧化损伤及铁死亡减轻动脉粥样硬化
编辑人员丨1周前
旨在探讨茱萸丸对动脉粥样硬化(AS)的影响及可能的作用机制.采用高脂饲料喂养诱导小鼠AS模型,造模周期为12周.造模成功的50只载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠按照随机数字表法分为5组,即模型组,茱萸丸低、中、高剂量组,阿托伐他汀钙组,每组10只;C57BL/6J小鼠10只作为空白组.空白组及模型组给予等体积无菌蒸馏水灌胃,茱萸丸低、中、高剂量组给予130.54、261.08、522.16 mg·kg-1灌胃,阿托伐他汀钙组给予10.40 mg·kg-1灌胃,每日1次,共12周.给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠主动脉、肝脏、附睾脂肪的病理学变化,并计算主动脉斑块面积占比、附睾脂肪面积、非酒精性脂肪肝活动性积分(NAS);油红O染色、Masson染色观察主动脉脂质及胶原纤维沉积,并计算主动脉红染脂质面积占比、主动脉胶原沉积面积占比;比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、铁离子水平;免疫荧光法检测主动脉环氧合酶2(COX2)、铁蛋白重链1(FTH1)、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白水平;免疫组化法检测主动脉肿瘤蛋白53(p53)水平;蛋白免疫印迹法检测主动脉p53、SLC7A11蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测小鼠主动脉p53、SLC7A11、GPX4、FTH1、前列腺素G/H合酶2(PTGS2)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)mRNA表达水平.结果显示,与空白组比较,模型组小鼠主动脉斑块面积明显扩大,胶原纤维沉积增加,肝脏脂质沉积增加,脂滴变多,附睾脂肪细胞体积扩大;血清中铁离子、MDA含量升高,SOD、GSH-Px水平降低;p53、COX2蛋白表达升高;主动脉FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA表达降低;PTGS2、NOX1 mRNA表达升高.与模型组比较,茱萸丸低、中、高剂量组及阿托伐他汀钙组小鼠主动脉斑块面积明显缩小,胶原沉积减少,肝脏脂质沉积减少,脂滴变少,附睾脂肪细胞体积缩小;血清中铁离子、MDA含量降低,SOD、GSH-Px水平升高;p53、COX2蛋白表达降低;主动脉FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA表达升高;PTGS2、NOX1 mRNA表达降低.综上所述,茱萸丸对小鼠AS主动脉斑块具有较好的治疗作用,其机制可能与调控p53/SLC7A11信号通路介导的氧化损伤及抑制细胞铁死亡有关.
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编辑人员丨1周前
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微塑料暴露致小鼠皮质铁死亡的实验研究
编辑人员丨1周前
目的 通过建立微塑料暴露小鼠模型探讨微塑料暴露致皮质铁死亡的影响,以期为微塑料暴露致神经损伤的防治提供新的线索.方法 SPF级雄性C57小鼠40只按体重随机分为对照组、低微塑料组、中微塑料组、高微塑料组,每组10只.微塑料暴露组小鼠分别以25、50和100mg/kg纳米聚苯乙烯灌胃,连续染毒8周,对照组每天灌胃相同剂量纯水.染毒结束后,以新物体识别实验检验小鼠的神经行为变化;以HE染色观察小鼠皮质病理变化;以试剂盒检测小鼠皮质组织中二价铁(Fe2+)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量;以Western blot法检测小鼠皮质组织中二价金属铁离子转运体1(DMT1)、铁转运蛋白(ferroportin,FPN1)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TFR1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和溶质载体家族 7 成员 11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)蛋白的表达情况.结果 染毒期间,低微塑料、中微塑料与高微塑料组小鼠体重与对照组相比无显著差异.新物体识别实验结果显示,与对照组相比,中微塑料组和高微塑料组新物体识别指数显著下降(P<0.05).HE染色结果显示,与对照组相比,低微塑料组小鼠皮质中出现神经细胞深染,结构模糊,核固缩现象;中微塑料组及高微塑料组小鼠皮质及海马中神经细胞深染,结构模糊,核固缩现象进一步加剧.与对照组相比,各微塑料组小鼠脑皮质中铁含量和MDA含量显著升高(P<0.05),GSH含量在中微塑料组和高微塑料组中显著下降(P<0.05);同时,TFR1表达水平在各微塑料组小鼠脑皮质中均较对照组显著升高(P<0.05),中微塑料和高微塑料组小鼠脑皮质中FPN1表达水平显著降低(P<0.05),DMT1表达水平显著升高(P<0.05);此外,与对照组相比,GPX4与SLC7A11在中微塑料组与高微塑料组小鼠皮质中的表达水平显著降低(P<0.05).结论 微塑料暴露可引起小鼠新物体识别能力下降,其中微塑料引起皮质神经细胞铁稳态失调导致铁死亡是诱导神经损伤的机制之一.
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编辑人员丨1周前
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右美托咪定对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其与铁死亡的关系
编辑人员丨1周前
目的:评价右美托咪定对肾癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其与铁死亡的关系。方法:实验一 取对数生长期的GRC-1细胞,采用随机数字表法分为5组( n=6):对照组(C组)和不同浓度右美托咪定组(D1组、D2组、D3组和D4组)。C组常规培养24 h;D1组、D2组、D3组和D4组分别加入右美托咪定0.1、1.0、10.0和100.0 μmol/L孵育24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力。实验二 取对数生长期的GRC-1细胞,采用随机数字表法分为3组( n=6):对照组(C组)、右美托咪定组(D组)和右美托咪定+Ferrostatin-1组(D+F组)。C组常规培养24 h;D组加入右美托咪定10 μmol/L孵育24 h;D+F组加入右美托咪定10 μmol/L,同时加入Ferrostatin-1 1 μmol/L,孵育24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和Fe 2+的含量,Western blot法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的表达。 结果:实验一 与C组比较,D3组和D4组细胞增殖率降低,迁移细胞数和侵袭细胞数减少( P<0.05),D1组和D2组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。实验二 与C组比较,D组细胞增殖率降低,迁移细胞数和侵袭细胞数减少,Fe 2+含量增加,GSH含量减少,GPX4和SLC7A11表达下调( P<0.05),MDA含量差异无统计学意义( P>0.05);与D组比较,D+F组细胞增殖率升高,迁移细胞数和侵袭细胞数增加,Fe 2+含量减少,GSH含量增加,GPX4和SLC7A11表达上调( P<0.05),MDA含量差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:右美托咪定可抑制肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与促进铁死亡有关。
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编辑人员丨1周前
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基于基因芯片数据的肾嫌色细胞癌生物信息学分析
编辑人员丨1周前
目的:利用生物信息学分析肾嫌色细胞癌基因表达谱芯片,寻找肾嫌色细胞癌发生的关键基因。方法:从GEO数据库下载肾嫌色细胞癌基因芯片数据GSE15641和GSE11151,利用R软件中的"affy"、"limma"等R软件包进行差异表达基因筛选,结合DAVID和STRING在线生物信息学工具对差异表达基因进行调控网络分析并构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,通过Cytoscape软件中的Cytohubba插件筛选Hub基因。结果:共筛选出肾嫌色细胞癌差异表达基因261个,包括194个表达下调基因,67个表达上调基因。对差异表达基因进行基因富集(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析以挖掘其生物学功能,其中GO富集分析中的生物学过程(BP)主要富集于细胞分泌、糖异生和细胞增殖调控;在细胞组成(CC)主要富集于细胞外泌体、细胞质膜及其组成部分;在分子功能(MF)主要富集于肝素结合,在KEGG通路分析中主要富集于代谢通路、抗体的生物合成、蛋白质消化吸收、肾素-血管紧张素系统等。利用在线生物信息学工具构建PPI网络,通过Cytoscape软件中的Cytohubba插件筛选前10位Hub基因,分别是胡椒酸和肌氨酸氧化酶(PIPOX)、羟基酸氧化酶2(HAO2)、犬尿氨酸-3-单加氧酶(KMO)、溶质转运家族2成员2(SLC2A2)、甲酰亚胺基转移酶环脱氨酶(FTCD)、血管生成素(ANG)、催化多肽-1(APOBEC1)互补因子(A1CF)、重组表达醛脱氢酶8A1(ALDH8A1)、维生素D结合蛋白(GC)、血浆富含组氨酸糖蛋白(HRG)。结论:利用生物信息学方法分析肾嫌色细胞癌的差异表达基因,可有效发掘这些差异表达基因的相互作用信息,为肾嫌色细胞癌的治疗提供新的思路。
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编辑人员丨1周前
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草酸钙结晶肾损伤小鼠肾脏转录组学和蛋白组学联合分析
编辑人员丨1周前
目的:了解草酸钙结晶肾损伤过程中肾组织基因及蛋白的动态变化,探讨草酸钙结晶肾损伤的可能机制。方法:采用10只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,适应性饲养1周,按随机数字表法将其分为对照组和草酸钙结晶肾损伤组(模型组),应用乙醛酸(50%,9 mmol/L)腹腔注射(100 mg·kg -1·d -1,持续5 d)建立草酸钙结晶肾损伤小鼠模型,对照组小鼠予等体积0.9%氯化钠溶液腹腔注射。使用HE染色、PAS染色、Masson染色及Von Kossa染色观察模型组小鼠是否造模成功。对小鼠肾组织进行转录组学和蛋白组学测序,根据差异基因和差异蛋白结果筛选与草酸钙结晶肾损伤有关的基因和蛋白并进行基因本体(gene ontology,GO)及京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析。采用主成分分析图、热图及火山图进行肾组织转录组学和蛋白组学分析。采用韦恩图分析差异基因和差异蛋白的重叠内容。 结果:模型组小鼠肾脏HE染色、PAS染色结果显示肾组织形态结构异常,Masson染色结果显示肾组织存在纤维化,Von Kossa染色结果显示皮髓交界处大量钙盐沉积,血肌酐、血尿素氮等肾损伤标志物显著升高,提示草酸钙结晶肾损伤小鼠模型构建成功。转录组学分析结果显示,相比对照组,模型组共存在2 815个显著差异基因,其中2 004个基因上调,811个基因下调;蛋白组学分析结果显示,模型组共存在1 197个差异蛋白,其中353个蛋白上调,844个蛋白下调。共有338个差异基因与差异蛋白相对应,其中324个差异基因与差异蛋白趋势一致。在表达上调及下调对应的差异基因和差异蛋白中均选取表达差异较大的5个差异分子,分别为血清淀粉样蛋白A1(SAA1)、微小染色体维持蛋白4(MCM4)、精氨酸酶2(ARG2)、S100钙结合蛋白A6(S100A6)、白细胞分化抗原14(CD14)、葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)、溶质转运家族22成员6(SLC22A6)、溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1A1(SLCO1A1)、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PEPCK1)和吲哚胺N-甲基转移酶(INMT)。GO分析表明2个组学相关的差异分子富集的共同通路主要涉及线粒体功能、多种能量代谢通路及免疫失调;而KEGG富集分析显示2个组学相关的差异分子主要的富集通路包括转运体异常、线粒体功能障碍、神经退行性病变、氨基酸代谢通路异常、氧化磷酸化等能量代谢通路异常等。结论:草酸钙结晶肾损伤小鼠肾脏基因和蛋白层面均发生明显变化。线粒体功能障碍、多种能量代谢通路异常及免疫失调可能作为重要机制参与草酸钙结晶肾损伤的发病。
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编辑人员丨1周前
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SLCO1B1和ApoE基因多态性检测与他汀类药物临床应用专家共识
编辑人员丨1周前
他汀类药物作为心血管疾病防治的主要药物,其有效性和毒性反应常存在个体差异,可能发生不同严重程度的他汀类药物相关肌病,常导致他汀类药物依从性较差甚至停药,进而导致心血管事件及死亡率的升高。他汀类药物相关的基因多态性是导致个体反应差异的重要原因,其中溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1(SLCO1B1)和载脂蛋白E(ApoE)基因多态性影响他汀类药物的安全性及有效性。SLCO1B1和ApoE基因多态性可通过实时荧光PCR、芯片杂交、测序、Sanger测序等不同方法进行检测。用药前检测SLCO1B1及ApoE基因多态性,将有助于实现他汀类药物的精准用药,提高调脂疗效,减少或避免药物不良反应的发生。中国中西医结合学会检验医学专业委员会、浙江省免疫学会临床免疫诊断专业委员会及浙江省药理学会治疗药物监测研究专业委员会组织专家对他汀类药物相关基因多态性检测与临床应用进行了讨论,并对一些关键问题给出了共识性观点,形成10条建议,以期为临床安全、合理使用他汀类药物提供指导。
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编辑人员丨1周前
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miR-137通过靶向MCL1和谷氨酰胺转运SLC1A5调节肺癌细胞的铁死亡机制
编辑人员丨2024/3/30
目的 探讨 miR-137 通过靶向髓系白血病 1 蛋白(MCL1)和谷氨酰胺转运蛋白溶质载体家族 A1 成员(SLC1A)5 调节肺癌细胞铁死亡的机制.方法 非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549 从美国典型培养物保藏中心获得.培养基均补充有 10%胎牛血清(FBS),在 37℃的含 5%CO2 的潮湿空气中孵育.培养细胞以进行miR-137 载体转染,直至细胞融合度达到 70%~80%.将培养细胞分为对照组、miR-137 转染组和miR-137 沉默组.通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析细胞MCL1 和SLC1A5、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4 mRNA表达.通过双重荧光素酶报告基因测定miR-137 与MCL1 和SLC1A的靶向作用.通过铁测定试剂盒测量每个细胞系中的Fe2+浓度.通过线粒体超氧化物(MitoSOX)指示剂测量了细胞中MitoSOX的产生.通过相应试剂盒检测活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平.通过流式细胞仪检测细胞凋亡.通过Transwell法测定miR-137 对细胞迁移、侵袭的影响.结果 miR-137 沉默组较miR-137 转染组和对照组MCL1、GPX4 和SLC1A5 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-137 转染组较对照组MCL1、SLC1A5 和GPX4 mRNA表达显著降低(P<0.05).与对照组相比,miR-137 转染组显著降低了用Wt-SLC1A5 和Wt-MCL1 载体共转染的NSCLC细胞中的荧光素酶活性(P<0.05),而Mut-SLC1A5 和Mut-MCL1 模拟共转染荧光素酶活性酶无显著变化(P>0.05).miR-137 沉默组较miR-137转染组和对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著降低,线粒体相对膜电位显著升高(P<0.05),miR-137 转染组较对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著升高,线粒体相对膜电位显著降低(P<0.05).miR-137 沉默组较miR-137 转染组和对照组ROS和MDA浓度显著降低,GSH浓度显著升高(P<0.05),miR-137 转染组较对照组ROS和MDA浓度显著升高,GSH浓度显著降低(P<0.05).24、48 和 72 h时,miR-137 转染组较miR-137 沉默组和对照组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),72 h时miR-137 沉默组较对照组细胞凋亡率显著降低(P<0.05).miR-137 沉默组较 miR-137 转染组和对照组细胞迁移、侵袭数量显著增多(P<0.05),miR-137 转染组较对照组细胞迁移、侵袭数量显著减少(P<0.05).结论 miR-137 可以靶向调控SLC1A5 和MCL1,诱导肺癌细胞铁死亡,从而促进细胞凋亡.
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编辑人员丨2024/3/30
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钠离子牛磺胆酸共转运多肽缺陷病及其对母胎影响的研究进展
编辑人员丨2024/1/20
钠离子牛磺胆酸共转运多肽(sodium-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)缺陷病是一种溶质载体家族 10 成员 1(solute carrier family 10 member 1,SLC10A1)双等位基因突变引起的胆汁酸代谢障碍性疾病,分布具有区域和种族差异,其中SLC10A1 c.800C>T(p.Ser267Phe)是我国的高频突变.NTCP缺陷病患儿主要表现为病理性黄疸,少部分有生长、运动和神经系统发育迟缓的表现,成年患者临床症状和体征不明显,生化检查提示血清总胆汁酸水平升高、部分伴有转氨酶和25-羟维生素D3 水平降低.NTCP缺陷病性高胆汁酸血症需与乙型肝炎病毒感染、丁型肝炎病毒感染、自身免疫性肝炎及妊娠期肝内胆汁淤积症等鉴别,妊娠合并NTCP缺陷病性高胆汁酸血症对母胎的影响迄今少有相关报道.综述NTCP缺陷病的分子遗传机制、临床表现、实验室检查、诊断、治疗及其对母胎的影响,为该病患者的明确诊断和正确干预提供依据.
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编辑人员丨2024/1/20
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河北地区汉族心脑血管病患者ApoE和SLCO1B1基因多态性分析
编辑人员丨2023/8/5
目的 分析河北地区汉族人群中心脑血管病患者ApoE和SLCO1B1基因多态性分布情况.方法 以2018年6月至2019年10月于河北医科大学第一医院神经内科和心内科就诊的4193例心脑血管病患者为研究对象,利用聚合酶链反应(PCR)-荧光探针技术定性检测其外周全血基因组中ApoE和SLCO1B1基因多态性分布情况,分析基因多态性分布特点,比较不同性别之间基因型分布差异.结果 4193例河北地区汉族心脑血管病患者的ApoE以及SLCO1B1基因多态性位点突变频率观察值符合Hardy-Weinberg遗传平衡;男女之间ApoE基因单核苷酸多态性位点388T>C、526C>T,以及SLCO1B1基因单核苷酸多态性位点388A>G、521T>C分布差异无统计学意义(P>0.05).在ApoE基因的6种表型中,ε3/ε3所占比例最大,为68.57%(2875/4193);其他表型ε3/e4、e2/ε3、ε2/ε4、e4/ε4、ε2/ε2占比依次为15.48%(649/4193)、12.81%(537/4193)、1.69%(71/4193)、0.98%(41/4193)和0.48%(20/4193);不同性别之间ApoE基因表型分布差异无统计学意义(P=0.223).SLCO1B1基因的7种表型中,*1b/*1b、*1a/*1b的占比较大,分别为39.57%(1659/4193)和31.05%(1302/4193),其他表型*1b/*15、*1a/*1a、*1a/*15、*15/*15、*1a/*5占比依次为14.31%(600/4193)、7.20%(302/4193)、6.42%(269/4193)、1.43%(60/4193)和0.02%(1/4193);不同性别之间SLCO1B1基因表型分布差异无统计学意义(P=0.078).结论 河北地区汉族人群中心脑血管病患者ApoE和SLCO1B1基因多态性分布不均匀,且ApoE和SLCO1B1基因多态性分布与性别无关.
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编辑人员丨2023/8/5
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FTH1、SLC2A4基因多态性与妊娠糖尿病相关性研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨孕妇铁蛋白(FTH1)和溶质转运家族2成员4(SLC2A4)基因单核苷酸多态性(SNP)与妊娠糖尿病(GDM)遗传易感性的关系.方法 收集在我院定期产检的GDM组孕妇(206例)和对照组孕妇(197例)的临床资料及实验室指标.应用高通量测序技术检测两组孕妇FTH1基因的11个SNP及SLC2A4基因的10个SNP的分布情况.结果 GDM组孕妇的孕前BMI,妊娠10~15周时空腹血糖、糖化血红蛋白、铁蛋白、血红蛋白水平均高于正常对照组孕妇(P<0.05).FTH1基因的11个SNP位点和SLC2A4基因的9个SNP位点,在GDM组与正常对照组间基因型一致均未发现突变位点.SLC2A4基因rs5435位点存在CC、CT、TT三种基因型分布,两组孕妇该位点基因型、等位基因频率的分布,差异无统计学意义(P>0.05).两组孕妇孕10~15周铁蛋白水平在rs5435位点的各基因型之间差异无统计学意义(P>0.05).妊娠达24~28周时,TT型孕妇空腹血糖和糖化血红蛋白水平均高于CC型孕妇,差异有统计学意义(P<0.05).在GDM组中CC型孕妇妊娠10~15周血红蛋白浓度高于CT型孕妇(P<0.05).结论 在本研究人群中未发现FTH1基因多态性与铁蛋白水平、GDM发病的相关性.但rs5435的CC基因型与GDM组孕妇高血红蛋白浓度有关,TT基因型与妊娠24~28周空腹血糖和糖化血红蛋白水平增高有关.
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编辑人员丨2023/8/5
