目的:基于合成工艺梳理帕瑞昔布钠原料药生产过程中可能产生的有关物质,评估其致突变性和致癌性,确定杂质类别,为药物生产工艺的优化以及终产品的质量控制提供依据.方法:帕瑞昔布钠中51个有关物质的遗传毒性通过数据库及2种(定量)构效关系[(quantitative)structure-activity relationship,(Q)SAR]预测软件进行评估,根据风险评估结果对有关物质的遗传毒性进行分类,并根据ICH M7指导原则制定相应的可接受限度.结果:梳理出的51个有关物质中,综合评估结果为阳性有9个,需要按遗传毒性杂质控制;综合评估结果为阴性的有37个,按非遗传毒性杂质控制;还有5个预测结果模棱两可,不确定是否为遗传毒性物质.结论:为了保证药物质量与安全,经(Q)SAR评估为阳性的有关物质其最高限度不得超过18ppm,同时提示应针对帕瑞昔布钠中具有警示结构的9个潜在遗传毒性杂质建立科学、合理的质量控制方法.

目的 对新型抗结核分枝杆菌药普托马尼各合成路线涉及的3个共性工艺杂质:(S)-叔丁基二甲基硅烷缩水甘油醚(杂质Ⅰ)、(S)-丁酸缩水甘油酯(杂质Ⅱ)、4-三氟甲氧基溴苄(杂质Ⅲ)进行遗传毒性评价并建立相应的质量控制方法.方法 分别采用基于专家规则和统计学原理的2种互补的(定量)构效关系[(Q)SAR]模型(Derek和Sarah)对普托马尼中3个工艺杂质的遗传毒性进行评价和分类;根据评价结果建立气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)法,采用分时段多反应监测(MRM)模式同时对这3个工艺杂质进行测定,并阐述这3个工艺杂质在EI源下的质谱裂解规律.结果 杂质Ⅰ和杂质Ⅲ Derek评估结果均为阳性,Sarah评估结果分别为模棱两可和阴性,依据ICH M7指南分类为3类致突变杂质;杂质Ⅱ Derek评估结果为阳性,Sarah结果显示有明确的Ames阳性实验结果,为2类已知致突变杂质.3个工艺杂质均需按照毒理学关注阈值(TTC)进行控制,建立的GC-MS/MS法经验证3个杂质可有效分离,线性关系良好,方法定量限均低于拟定限度的15％,平均回收率(m=9)分别为105.5％、104.4％和108.5％,重复性RSD(n=6)分别为2.2％、5.8％和2.2％.3批样品均检出杂质Ⅲ.结论 建立的GC-MS/MS法操作简单,专属性强,灵敏度高,可用于普托马尼中3个潜在致突变杂质的测定.由于杂质Ⅱ也是恶唑烷类抗菌药如利奈唑胺、咔哒唑胺、泰地唑胺等的共性工艺杂质,因此本研究也为其他恶唑烷类抗菌药中杂质Ⅱ的质量控制提供了参考.

目的:建立同时测定奥拉西坦原料药中潜在遗传毒性杂质氯乙酸甲酯和(R,S)4-氯-3-羟基丁酸乙酯的方法.方法:采用GC-MS法,使用乙酸乙酯进行提取.色谱柱为VF-1701 ms毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),柱温采用程序升温,进样口温度为220℃,柱流量为1.0 ml·min-1,吹扫流量为5.0 ml·min-1,进样方式为分流进样,分流比为5:1,载气为高纯氦气,检测器为MS检测器,离子源温度为230℃,接口温度为230℃,溶剂延迟时间为4 min,离子化模式为电子轰击离子化模式,扫描(检测)方式为选择性离子检测,电子能量为70 eV,进样量为1.0μl.结果:2种杂质成分之间的分离度符合要求,浓度线性范围均为50～400 ng·ml-1(r≥0.9995),加样回收率分别为89.7％～96.3％(RSD=2.3％,n=9)、91.0％～105.3％(RSD=4.4％,n=9).结论:该方法简便、准确、灵敏、迅速,可用于奥拉西坦原料药中2种潜在遗传毒性杂质的测定.

为了定量测定依卡倍特钠中潜在遗传毒性杂质依卡倍特磺酸乙酯(杂质Ⅰ),参考文献方法合成依卡倍特磺酸乙酯.采用高分辨质谱、结合二级质谱与核磁共振确定其相对分子质量及化学结构.采用Thermo C18色谱柱,以5 mmol/L乙酸铵溶液(甲酸调pH至3. 0)为流动相A;乙腈为流动相B,按照梯度:0 min 50%B,4 min 50%B,12 min 80%B,16 min 80%B,16. 1 min 50%B,20 min 50%B进行洗脱,柱温40 ℃;采用电喷雾负离子化-MS/MS选择反应监测.杂质Ⅰ的线性质量浓度范围为4～150 ng/mL,且线性关系良好(r＝0. 999);最低定量限为4 ng/mL;杂质Ⅰ的进样精密度、重复性和加标回收率良好,耐用性良好.方法操作简便,灵敏度高,可用于依卡倍特钠原料药中潜在遗传毒性杂质依卡倍特磺酸乙酯的含量测定.

目的:建立柱前衍生化HPLC法测定艾拉莫德中潜在遗传毒性杂质特戊酰氯残留量的方法.方法:用2-硝基苯肼对样品进行衍生化,HPLC-UV法进行测定:色谱柱DiamonsilTM C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.1％磷酸-乙腈(48:52)为流动相进行等度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为395 nm,柱温为30℃,进样量为20μl.结果:衍生化产物在4 h内稳定.特戊酰氯在150～1000 ng·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9986),检测限为50 ng·ml-1,平均加样回收率为95.86％(RSD=1.52％,n=9).结论:本法专属性好,灵敏度高,重复性好,可用于艾拉莫德原料药中特戊酰氯的残留量的测定.

目的 建立同时测定磷酸肌酸钠中3种潜在遗传毒性杂质磷酸三乙酯、肌酸磷酸二乙酯、肌酐磷酸二乙酯含量的超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS).方法 采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪,色谱柱ACQU-ITY UPLC BEH C18(2.1 mm×10 cm;1.7μm);流动相为0.1％甲酸水溶液-甲醇(6040);流速为0.25 mL·min-1;柱温为30℃;进样量为20μL;电喷雾离子源,正离子模式,多反应监测扫描方式采集数据.结果 磷酸三乙酯、肌酸磷酸二乙酯、肌酐磷酸二乙酯分别在0.5～135.6、4.1～103.9、0.8～125.6μg·L-1,峰面积与浓度呈良好线性关系;检测限分别为0.2、1.3、0.3μg·kg-1;定量限分别为0.6、4.1、0.9μg·kg-1;在高、中、低3个加标水平下,3种杂质的回收率为97.4％～103.8％,相对标准偏差为0.3％～2.8％.结论 该方法简便准确,可用于磷酸肌酸钠中磷酸三乙酯、肌酸磷酸二乙酯、肌酐磷酸二乙酯等杂质的检测.

目的 评价萘普生的杂质acetylnerolin(Ace)的遗传毒性.方法 采用基于定量构效关系的方法ADMET、Derek和Sarah,预测Ace的遗传毒性,利用体外染色体畸变和细菌反向突变(Ames)实验验证上述结果.在染色体畸变实验中,中国仓鼠肺(CHL)细胞与Ace 10,20,40 mg·L-1在有/无代谢活化系统混合液(S9 mix)的条件下,分别以甲基磺酸甲酯(MMS)20 mL·L-1及环磷酰胺(CP)12 mg·L-1作为阳性对照,孵育4h后,对每个畸变中期(包括断裂、交换、环状、分裂和多倍体)的染色体数目计数并记录,当畸变率<5％为阴性,>10％为阳性.在Ames实验中,用5种鼠伤寒沙门氏菌(TA97,TA98,TA100,TA102和TA1535)对Ace进行致突变评价.这5种菌种分别与Ace 5,25,125和625μg(每个平板)在有无S9 mix条件下孵育48～72 h.在不添加S9 mix的条件下,敌克松50μg(每个平板)作为TA97和TA98组的阳性对照;MMS 2.0μL(每个平板)作为TA100和TA102组的阳性对照;叠氮化钠1.5μg(每个平板)作为TA1535的阳性对照;在添加S9 mix的条件下,2-氨基芴100μg(每个平板)作为TA97,TA98和TA100的阳性对照;1,8-二羟基蒽醌100μg(每个平板)和CP 50μg(每个平板)分别作为TA102和TA1535的阳性对照,当菌落数≥2×阴性对照时,则认为该化合物具有致突变性,反之则为阴性.结果 Derek和Sarah软件预测NPX杂质不具有遗传毒性,但ADMET数据显示Ace可诱发染色体畸变.在染色体畸变实验中,Ace 40 mg·L-1致畸变率>5％,但<10％;Ace<20 mg·L-1时致畸变率<5％,提示Ace可能诱发染色体畸变,这与ADMET结果一致;Ames试验结果表明,与阴性对照组相比,5种菌种每个平板给药Ace 5～625μg后,各组的细菌数量没有显著增加,提示Ace无致突变性,这与ADMET结果相反.结论 Ace有潜在的致染色体畸变性,对于长期服用萘普生的患者,为保障用药安全,建议将Ace的含量从普通杂质的0.15％降至0.015％.

确定2,6-二甲基苯胺为盐酸利多卡因注射液中遗传毒性杂质,N-氯乙酰-2,6-二甲基苯胺为潜在遗传毒性杂质,建立LC-MS/MS方法,用色谱柱Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5μm)对原料、自制制剂及原研制剂进行遗传毒性杂质研究.研究结果表明自制制剂中杂质2,6-二甲基苯胺与N-氯乙酰-2,6-二甲基苯胺除由原料引入外,可能分别由氧化条件或碱性条件下降解引入,为盐酸利多卡因注射液的遗传毒性风险评估和工艺优化提供参考与指导.

目的 首次建立了一种用于盐酸伊伐布雷定原料药中卤代烷烃类遗传毒性杂质测定的方法.方法 使用CAPCELL PAK MGⅡ C18(150 mm ×4.6 mm,3μm)色谱柱;以0.01 mol·L-1磷酸二氢钾(磷酸调节pH值至3.0)∶乙腈(V/V,70∶ 30)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长210 nm,柱温40℃.结果 在上述色谱条件下,盐酸伊伐布雷定中的2个卤代烷烃类遗传毒性杂质(化合物Ⅰ和Ⅱ)分离效果良好;化合物Ⅰ和Ⅱ的检测限分别为0.0016 mg·L-1和0.0101 mg·L-1(分别相当于主成分的0.0003％和0.002％,化合物Ⅰ和Ⅱ的限度之和为0.01％),它们的定量限分别为0.0054mg·L-11和0.0202 mg·L-1;化合物Ⅰ在0.0050 ～0.2017 mg·L-1内、化合物Ⅱ在0.0199 ～0.1991 mg·L-1内的峰面积与浓度呈线性关系(r分别为0.9998和0.9999);化合物Ⅰ和Ⅱ的平均回收率分别为106.1％和101.4％,RSD％分别为3.4％和3.9％(n=9);重复性结果显示,化合物Ⅰ和Ⅱ的6份加样回收溶液测定结果的RSD分别为5.0％和＜0.1％.空白溶剂和原料药基质对化合物Ⅰ和化合物Ⅱ的测定无干扰.结论 上述结果表明:所建的基因毒杂质检测方法的灵敏度高,准确可靠、专属性好,适宜于盐酸伊伐布雷定原料中卤代烷烃类遗传毒性杂质的测定.

目的 对色瑞替尼合成工艺中具有警示结构的潜在有关物质进行遗传毒性(致突变性)评价研究,为色瑞替尼有关物质的分类分级控制提供指导和依据.方法 分别采用基于专家规则和统计学原理的2种互补的(定量)构效关系[(Q)SAR]评价系统(Derek和Sarah)对色瑞替尼有关物质的遗传毒性进行初步预测和分类;对(Q) SAR预测结果为阳性的有关物质,开展Ames试验进一步验证.结果 杂质6(CAS:1032903-50-6)、杂质7(CAS:1032903-62-0)和杂质13(CAS:1032903-63-1)的Derek预测结果均为阳性,依据ICH M7指导原则的分类为第3类.在Ames试验中,在加代谢活化系统S9和不加S9的情况下,3个杂质(每皿22～1800 μg)回复突变的菌落数小于溶剂对照组的2倍,由此判定Ames试验提示的致突变性为阴性.结论 杂质6、杂质7和杂质13的致突变性均为阴性,可推翻基于结构的疑虑,依据ICH M7中的第5类即非突变性杂质进行控制.