糖类抗原72-4(CA72-4)是目前临床上应用较多的1种肿瘤标志物，最早用于胃癌和卵巢癌的辅助诊断和病情监测，可单独或联合其他肿瘤标志物用于结直肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤的诊断和随访监测。然而，在临床实践中，CA72-4诊断恶性肿瘤的灵敏度和特异度均偏低，其水平在胃肠息肉、2型糖尿病、结缔组织病等良性疾病，以及服用秋水仙碱、灵芝孢子等药物时也可升高，可能对临床决策产生误导。因此，应重新认识CA72-4的应用价值，以更好地指导临床决策和肿瘤筛查。

目的:利用高分辨气相色谱-四级杆-静电轨道阱质谱法(GC-Q-Exactive-MS)定性分析灵芝孢子油的化学成分.方法:采用GC-Q-Exactive-MS,在电子轰击(EI)源下获取化合物的全扫描质谱数据,通过总结脂肪酸类、萜类、甾醇类及醛类化学成分的质谱裂解规律,并检索NIST、MassBank、HMDB、PubChem在线数据库及查阅相关文献,对灵芝孢子油的各类化学成分进行鉴定.结果:从灵芝孢子油中共鉴定了 22 个化学成分,包括 3 个脂肪酸类、4 个萜类、4 个甾醇类、4 个醛类及 7 个其他类化合物.结论:研究结果为灵芝孢子油质量控制和中药弱极性化学成分定性分析提供了参考.

目的 研究灵芝孢子粉对去卵巢骨质疏松大鼠的治疗作用.方法 随机取39只SD雌性大鼠进行去卵巢手术建立骨质疏松模型,剩余20只进行假手术.饲养16周建模成功后随机从假手术大鼠中取10只设为空白组(C组),随机取30只去势大鼠分为模型组(M组)、灵芝孢子粉低浓度组(BL组,400 mg/kg)和灵芝孢子粉高浓度组(BH组,1 600 mg/kg),每日1次灌胃治疗,持续10周.比较各组大鼠的体重变化、脏器指数、股骨骨密度、骨小梁微观结构变化、骨小梁参数、骨生物力学性能、血清中骨代谢物水平.结果 各组大鼠体重变化差异无统计学意义(P＞0.05),肝、脾和胸腺的脏器指数差异无统计学意义(P＞0.05),与C组相比,M组大鼠的子宫系数显著降低(P＜0.01),而BL组与BH组大鼠的子宫系数显著高于M组(P＜0.05).与M组相比,BL组与BH组大鼠的股骨骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、最大载荷、弯曲强度、弹性模量和血清中雌二醇水平(E2)均显著提升(P＜0.05);而骨小梁分离度(Tb.Sp)、血清中骨钙素(OC)、骨碱性磷酸酶(BALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)水平均显著降低(P＜0.01).Micro-CT骨微结构图像显示M组大鼠骨小梁减少而稀疏,而BL组与BH组大鼠骨小梁增多而致密.结论 灵芝孢子粉对去卵巢大鼠的骨质疏松有一定治疗作用,推测其通过改善内分泌功能提升雌激素水平,以此平衡骨吸收与骨形成,从而改善骨质量、提升骨强度、提高骨密度.

为准确测定灵芝孢子粉产品的酸价,阐明影响酸价的关键因素,本试验建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测器(high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)分析方法测定孢子油中游离脂肪酸的含量.通过优化色谱条件,建立了亚油酸、棕榈酸和油酸的HPLC的定量测定方法.该方法精密度、重复性和稳定性好,可用于灵芝孢子粉、孢子油及其相关产品中亚油酸、棕榈酸和油酸成分的定量测定.与国标化学法测定的结果比较,两种方法的匹配度较好,HPLC-ELSD 法灵敏度高,可以测定不同脂肪酸的含量.通过比较分析发现,贮存时间对破壁灵芝孢子粉脂肪酸影响最大,同时产地和采收时间也影响酸价的大小.对 8 种不同品牌市售灵芝孢子油产品的脂肪酸含量测定,发现脂肪酸含量相差较大,其中含量最高的为(99.81±10.21)mg/g,最低的为(1.90±0.12)mg/g.因此新建立的HPLC-ELSD法可精确定量灵芝孢子粉中游离脂肪酸,为市场上灵芝孢子类产品的质量控制提供科学依据.

目的 探究灵芝孢子多糖对流感疫苗免疫小鼠的免疫效果及增效作用机制.方法 雌性BALB/c小鼠随机分为4组,即空白对照组、疫苗组、氢氧化铝佐剂组、灵芝孢子多糖组.除空白对照组外,各组小鼠分别于第0天、第14天以肌肉注射方式进行初次免疫和加强免疫,免疫剂量为流感疫苗血凝素15μg/只小鼠,氢氧化铝佐剂100μg/只小鼠,灵芝孢子多糖800 μg/只小鼠,给药体积0.2 mL,观察抗体效价、脏器指数、T细胞亚型、骨髓树突细胞表达、细胞因子水平等指标,评价灵芝孢子多糖对流感疫苗的免疫,并阐释其作用机制.结果 灵芝孢子多糖与流感疫苗共同免疫小鼠无过敏反应,状态良好.与疫苗组比,灵芝孢子多糖组在第2次免疫后14 d可显著增加血凝抑制抗体滴度(P＜0.05),且优于氢氧化铝佐剂;可促进脾脏T、B淋巴细胞增殖,提高CD4+T细胞含量,降低CD8+T细胞含量,显著提高CD25+T细胞含量(P＜0.01);显著增加小鼠骨髓树突细胞表面MHC Ⅱ分子水平(P＜0.001)、CD86+分子水平(P＜0.05)和CD80+分子水平;促进血清中IL-4、TNF-α等细胞因子表达(P＜0.01).结论 灵芝孢子多糖对流感疫苗免疫小鼠具有显著的佐剂效应,显著提高了抗体水平.灵芝孢子多糖通过诱导Th1/Th2型免疫应答,提高T、B细胞的增殖活性,影响T细胞亚群分布和促进DC细胞成熟并提高其抗原提呈能力等方面提高细胞免疫和体液免疫作用,发挥免疫佐剂效应.

灵芝孢子粉是灵芝的生殖细胞,包含灵芝所有的化学成分,主要含有灵芝三萜类、多糖类、甾体类、脂肪酸类和蛋白质类等多种化合物.灵芝孢子粉具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、保护心血管、保肝护肝等药理作用.《中国药典》2020年版对灵芝孢子粉的质量控制标准尚未明确规定,就灵芝孢子粉化学成分和药理作用研究进展进行综述,并基于质量标志物(qualitymarker,Q-Marker)理论,从植物亲缘性与特有性、有效性、可测性、临床应用、可入血成分等方面进行Q-Marker预测分析,初步推测多糖类、灵芝酸、甾醇类(麦角甾醇)、不饱和脂肪酸(油酸)等成分为其Q-Marker,为规范灵芝孢子粉质量研究和建立、完善灵芝孢子粉质量标准提供参考.

背景:男性生殖障碍作为糖尿病的常见并发症近年来受到越来越多的关注.灵芝孢子具有降糖、抗氧化、抗炎等功效,但其对于糖尿病睾丸组织的调控机制尚未完全阐明.目的:探讨灵芝孢子对糖尿病大鼠睾丸组织PTEN诱导激酶1/E3泛素蛋白连接酶通路及细胞凋亡的影响.方法:采用随机数字表法将40只雄性SD大鼠分为正常组、高脂高糖组、糖尿病组、灵芝孢子干预组,每组10只:高脂高糖组、糖尿病组、灵芝孢子干预组给予高脂高糖饮食至实验结束;高脂高糖饮食1个月后,糖尿病组、灵芝孢子干预组腹腔注射链脲佐菌素30 mg/kg建立2型糖尿病模型;造模成功后,灵芝孢子干预组灌胃给予灵芝孢子300 mg/(kg·d),其余3组灌胃给予等量生理盐水,持续给药12周.给药结束后,检测大鼠精子数量和形态、睾丸组织形态结构、血清睾酮和睾丸组织氧化应激水平,免疫组化分析PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、抗核孔蛋白表达,Western blotting检测睾丸组织中PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、抗核孔蛋白、程序性死亡受体1、微管相关蛋白轻链3 Ⅱ/Ⅰ、caspase3、剪切caspase3的蛋白表达.结果与结论:①与正常组和高脂高糖组相比,糖尿病组大鼠精子数量减少(P<0.01),精子畸形率增加(P<0.01),血清睾酮浓度降低(P<0.01);与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组大鼠精子数量增加(P<0.05),畸形率降低(P<0.01),血清睾酮浓度升高(P<0.01);②与正常组和高脂高糖组相比,糖尿病组大鼠睾丸组织中丙二醛水平升高(P<0.01),谷胱甘肽还氧化物酶和超氧化物歧化酶水平降低(P<0.01);与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组大鼠睾丸组织中丙二醛水平降低(P<0.01),谷胱甘肽还氧化物酶和超氧化物歧化酶水平升高(P<0.01);③免疫组化染色显示,与正常组和高脂高糖组对比,糖尿病组大鼠睾丸组织中PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶阳性表达减少,抗核孔蛋白阳性表达增加;与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组大鼠睾丸组织中PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶阳性表达增加,抗核孔蛋白阳性表达减少;④Western blotting检测显示,与正常组和高脂高糖组相比,糖尿病组PTEN诱导激酶 1、E3泛素蛋白连接酶、程序性死亡受体1蛋白表达及微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值降低(P<0.05或P<0.01),抗核孔蛋白、caspase3、剪切caspase3的蛋白表达升高(P<0.01);与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组PTEN诱导激酶 1、E3泛素蛋白连接酶、程序性死亡受体1蛋白表达及微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值升高(P<0.05或P<0.01),抗核孔蛋白、caspase3、剪切caspase3的蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01);⑤结果显示,灵芝孢子可能通过激活PTEN诱导激酶1/E3泛素蛋白连接酶信号通路增强睾丸组织自噬水平,减少组织细胞的凋亡,以此保护睾丸组织.

灵芝是一味传统的中药材,具有很高的药用价值,多糖是其主要的活性成分之一,可从其子实体、孢子粉、发酵菌丝体和胞外液中获得.近年来,从灵芝菌丝体和胞外液中发现的多糖越来越得到研究者们的关注.本文从发酵培养基成分及发酵条件对灵芝胞内外多糖的影响、灵芝胞内外多糖的结构、灵芝胞内外多糖生物活性 3 个方面进行综述,为发酵来源灵芝多糖的开发利用提供科学理论依据.

目的 探讨去壁灵芝孢子粉水溶成分(A-GSP)在头颈鳞癌细胞中的生物学作用.方法 利用MTS法检测A-GSP在头颈鳞癌细胞系SCC15和SCC25中的细胞活力.采用平板克隆、划痕愈合实验和穿室实验探究A-GSP对头颈鳞癌细胞增殖、转移能力的影响.通过流式分析试剂盒检测A-GSP对头颈鳞癌细胞凋亡能力和细胞周期分布的影响.免疫蛋白印迹法检测A-GSP处理后上皮间质转化(EMT)分子和细胞周期蛋白的表达变化.结果 A-GSP作用后,头颈鳞癌细胞的增殖能力减弱(F=62.72,P＜0.000 1),转移能力下降(F=95.7,P＜0.000 1),细胞凋亡能力增加(F=87.65,P＜0.000 1),G2/M 期停滞(F=15.31,P＜0.01).此外,A-GSP处理导致上皮细胞标志物E-cadherin上调,间质细胞标志物Vimentin、N-cadherin、Snail、Slug下调,细胞周期激酶CDK1下调,P21和P27上调,但是,并未引起凋亡通路蛋白Caspase和Bax水平改变.结论 A-GSP通过诱导细胞周期G2/M期停滞和抑制EMT从而抑制头颈鳞癌细胞的增殖转移.

目的 探讨灵芝孢子对糖尿病(DM)大鼠心肌损伤的保护作用及对PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(parkin)信号通路的作用机制.方法 将40 只雄性SD大鼠随机分成对照(NC)组、高脂高糖饮食(HFD)组、DM组和灵芝孢子(GLS)组各10 只.12 w末,记录各组末次体质量及空腹血糖.麻醉处死大鼠后,采集心脏组织,计算心脏指数,并检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量.苏木素-伊红染色(HE)和马松(Masson)染色观察心脏病理学变化.Western印迹检测PINK1/parkin通路蛋白、自噬相关蛋白及凋亡相关蛋白,免疫组织化学技术验证PINK1、parkin的表达水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色评估细胞凋亡情况.结果 与NC组相比,HFD组体质量明显增加,DM组体质量明显减轻,血糖水平明显升高(P<0.05);HFD组和DM组心脏指数、MDA含量、PINK1、parkin、p-parkin、微管相关蛋白轻链(LC)3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2 同源结构域蛋白抗体(beclin)1、Bcl-2 相关X蛋白(Bax)/Bcl-2 蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率及血管周围胶原含量明显增加,SOD活性、p62 蛋白表达水平显著下降(均P<0.05).与DM组相比,HFD组和GLS组体质量、SOD活性、p62 蛋白表达水平明显增加,血糖水平、心脏指数、MDA含量、PINK1、parkin、p-parkin、LC3、beclin1、Bax/Bcl-2 蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率、血管周围胶原含量明显降低(均P<0.05).结论 灵芝孢子可减轻DM大鼠心肌损伤,改善纤维化程度,具有良好的抗氧化活性,可逆转心肌细胞过度自噬,抑制细胞凋亡,其保护作用可能与下调PINK1/parkin信号通路有关.