目的:研究羔羊胃维生素B12胶囊原料药的药效物质基础。方法:用0.9%氯化钠溶液提取，通过饱和硫酸铵沉淀，采用二乙基氨乙基纤维素52和高压液相色谱(HPLC)方法分离、纯化凝乳酶和胃蛋白酶。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和液相色谱-串联质谱测定相对分子质量。用HPLC分析原料药的氨基酸组成和抗氧化活性。依次用水、磷酸盐缓冲液和碳酸氢钠完全提取原料药，并进行体外1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2，2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基消除活性测定。利用热水提法提取原料药中的糖蛋白，测定其对青春双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、粪肠球菌的促生长活性，分别用HPLC和气相色谱-质谱方法分析其氨基酸和单糖组成。结果:纯化得到2种不同离子强度的凝乳酶F6-2、F7-2和胃蛋白酶F7-1的酶活力分别为27 557.10、17 532.60和17 728.15 U/g；SDS-PAGE分析显示3种酶的相对分子质量相似，为35 000~40 000。原料中含有16种氨基酸，其中疏水性氨基酸占总氨基酸含量的33.03%。当样品浓度为5 g/L时，3种提取物的ABTS自由基清除活力分别为(37.80±0.45)%、(23.20±0.78)%、(62.80±0.74)%; DPPH自由基清除活力分别为(57.87±0.55)%、(5.03±0.25)%和(26.67±3.10)%。糖蛋白提取物对青春双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、粪肠球菌均有促生长作用，其中对德氏乳杆菌保加利亚亚种和粪肠球菌的促进作用差异均有统计学意义( P均<0.05)。糖蛋白的蛋白质链由15种氨基酸组成，多糖链由葡萄糖和乳糖2种单糖组成。 结论:利用多种色谱方法从羔羊胃原料药中分离、分析到至少2种凝乳酶和1种胃蛋白酶成分；原料药富含抗氧化活性成分；羔羊胃中糖蛋白成分具有体外促益生菌生长活性。

目的 对复合酶法与热水法提取海带褐藻糖胶的效率和提取物结构进行比较.方法 分别采用复合酶法与热水法提取海带褐藻糖胶;环境扫描电镜(ESEM)比较两种方法对海带细胞壁组织显微结构的影响;采用高效液相色谱(HPLC)分析两种方法提取物的单糖组成.结果 复合酶能温和高效地破碎海带的胞壁组织结构,使褐藻糖胶快速溶出,复合酶法与传统热水法比较有更高的褐藻糖胶得率和一次提取率,分别达2.36 %±0.15 %(以海带干重计)和84.89 %.结论 复合酶法提取海带褐藻糖胶效率较高,所制备的褐藻糖胶甘露糖和硫酸根含量较高.

采用酶法试剂盒检测法和苯胺蓝荧光检测法对不同结构多糖中β-葡聚糖含量进行测定,结果表明,两种方法对高纯度β-1,3/1,6-葡聚糖的含量检测均较为准确,但含有葡萄糖的杂多糖和多分支连接的β-葡聚糖均会对酶法试剂盒检测产生干扰,苯胺蓝荧光法检测β-1,3-葡聚糖专一性较好.通过比较不同灵芝提取物中β-1,3-葡聚糖的含量和得率可知,热水提取物和KOH提取物中β-1,3-葡聚糖的含量较高,分别为20.52％和45.86％,β-1,3-葡聚糖得率分别为0.27％和1.27％,占β-1,3-葡聚糖总提取得率的88％.HPSEC分析结果显示不同提取物中多糖的分子量分布不同,热水提取物中主要包含2个组分,分子量分别为2.835×106Da和9.587×104Da,KOH提取物中主要包含分子量分布在1×105-1×106Da范围内的3个组分.各提取物中多糖的单糖组成均以葡萄糖为主,水提多糖中含有少量半乳糖,酸碱提取多糖中含有少量木糖和甘露糖.本研究结果显示,分步提取中沸水和KOH碱溶液提取β-1,3-葡聚糖效率较高.

目的 从灵芝Ganoderma水提物中分离纯化活性多糖肽,对其进行结构研究,并作为对照品用于灵芝产品中多糖肽含量测定.方法 采用热水提取、膜超滤技术和凝胶过滤色谱等方法进行分离纯化,根据理化测定及波谱数据分析鉴定化合物结构.检测多糖肽含量采用高效液相色谱仪附紫外检测器,以水作为流动相,体积流量为1 mL/min.结果 灵芝多糖肽相对分子质量为5.0×104,质量分数97％以上,得率为0.49％,多糖含量达87.17％,单糖组成以葡萄糖为主和少量甘露糖组成的多糖,其物质的量比为31.85∶1.00,含有16种氨基酸,氨基酸总量为5.04％.依据甲基化、一维和二维核磁谱图,GL-PPSQ2结构重复单元为主链由→3)-β-D-Glcp-(1→构成,每4个→3)-β-D-G1cp-(1→在O-6位连接一个长支链,该支链由α-D-Glcp-(1→、→4,6)-β-D-Glcp-(1→、→4)-β-D-Glcp-(1→和→6)-β-D-Glcp-(1→依次相连构成.结论 通过膜技术和凝胶色谱分离纯化得到活性多糖肽,该方法简便、快速,为灵芝提取物及其产品中多糖肽质量控制提供了科学依据.

目的 对匙萼金丝桃 (Hypericum uralum) 化学成分进行分离鉴定;对部分成分的镇痛与β-羟高铁血红素形成抑制活性进行测试.方法 利用硅胶、Sephadex LH-20等材料柱色谱和现代波谱技术对匙萼金丝桃体积分数95％乙醇提取物乙酸乙酯部分化学成分进行分离和结构鉴定;采用小鼠乙酸扭体法、热水甩尾法和β-羟高铁血红素形成抑制实验对部分单体化合物进行生物活性测试.结果 从匙萼金丝桃体积分数95％乙醇提取物乙酸乙酯部位中分离得到13个化合物, 分别鉴定为 (-)-圣草素 (1), 3, 4, 5-三羟基 (口山) 酮 (2), 1, 7-二羟基 (口山) 酮 (3), 4-羟基-2, 3-二甲氧基 (口山) 酮 (4), toxyloxanthone B (5), 1, 3, 6, 7-四羟基酮 (6), 2, 3-二甲氧基 (口山) 酮 (7), 1, 5, 6-三羟基-3-甲氧基 (口山) 酮 (8), hyperielliptone HD (9), 3, 3', 4, 4'-四羟基联苯 (10), 莽草酸 (11), 槲皮素-3-O-(4″-甲氧基)-α-L-鼠李糖 (12) 和原花青素A-2 (13) .镇痛活性测试结果表明, 化合物3和12具有一定的外周镇痛活性;同时, 化合物1表现出较强的β-羟高铁血红素形成抑制活性.结论 化合物1～13均为首次从该植物中分离得到;匙萼金丝桃镇痛与抗疟活性具有相应物质基础.

目的 探究五味子提取物对人皮肤细胞氧化损伤的保护作用,开发其在皮肤抗氧化方面的应用.方法 分别采用热水蒸煮和水蒸气蒸馏的方法进行脱色和除味;另外,采用叔丁基过氧化氢(tBHP)诱导的HaCaT细胞氧化应激模型评价五味子提取物对人皮肤细胞氧化损伤的保护作用,采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡率,2,7-二氯荧光黄双乙酸盐法检测细胞内活性氧的水平.结果 采用优化后的提取工艺得到了气味变淡且颜色明显变浅的五味子提取物;用北五味子提取物预处理HaCaT细胞6 h后,可有效降低tBHP引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,降低细胞内ROS水平.结论 优化后的乙醇提取工艺显著改善了五味子提取物的颜色和气味,并保持了提取物的抗氧化活性,因而有望成为一种应对皮肤氧化损伤的外用保护剂.

目的:研究人参在水煎煮过程中人参皂苷化学结构的转化.方法:在室温条件下用水超声提取人参和回流提取人参,分别得到两种提取物.然后,通过UFLC-MS/MS和与对照品比较分析及鉴定人参皂苷,比较两个提取物人参皂苷的差别.结果:热水回流提取人参,可以得到多种稀有人参皂苷.结论:通过煎煮转化,极性人参皂苷可产生稀有人参皂苷.

目的 探讨高丽参热水提取物预处理对N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞parthanatos的影响及其机制.方法 将SH-SY5Y细胞分为空白组、MNNG诱导组及高丽参热水提取物预处理组,空白组细胞不给予任何处理,MNNG诱导组给与MNNG 250μmol/L刺激1 h或4 h,高丽参热水提取物预处理组在给与MNNG诱导前先给与高丽参热水提取物1 mg/mL预处理.以CCK-8和细胞流式技术检测细胞存活率,Western blot检测PAR蛋白,免疫荧光检测AIF核质分布,细胞流式技术检测细胞活性氧的表达.结果 与空白组比较,SH-SY5Y细胞的存活率随着MNNG刺激的浓度和时间的增加而逐渐降低(P<0.05);MNNG刺激SH-SY5Y后多聚PAR蛋白表达增加(P<0.05);高丽参热水提取物预处理可以抑制MNNG诱导的SH-SY5Y死亡,并且降低了MNNG诱导的AIF的表达和入核(P<0.05);MNNG刺激后活性氧的表达增加,而高丽参热水提取物预处理后,活性氧的表达显著降低(P<0.05).结论 高丽参热水提取物预处理SH-SY5Y细胞可以降低活性氧的产生并降低了MNNG诱导的parthanatos的发生.

目的 探究千年草提取物的抗氧化活性及对人成纤维细胞胶原蛋白合成的影响及其抗衰老作用.方法 分别采用热水和乙醇提取千年草的籽、皮和茎,获得提取物冻干粉末.检测千年草的籽、皮和茎的热水提取物、乙醇提取物的1,1二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)清除活性、2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)清除活性.采用千年草提取物与人皮肤成纤维细胞共培养,采用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFHDA)荧光探针试剂盒检测千年草提取物对人皮肤成纤维细胞内活性氧(ROS)清除活性,检测千年草提取物对人皮肤成纤维细胞的增殖作用及对Ⅰ型胶原蛋白合成的影响.结果 千年草籽、皮、茎的热水提取物和乙醇提取物均具有DPPH、ABTS和细胞内ROS清除活性,随着浓度增加,清除率升高,千年草籽乙醇提取物的DPPH和ABTS清除能力最强,其IC50分别为(47.96±5.18)μg/ml、(33.48±3.25)μg/ml.10μg/ml以上浓度的千年草提取物对人皮肤成纤维细胞增殖均有一定的促进作用,千年草籽的乙醇提取物和热水提取物的促进作用最强.千年草提取物对人皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成具有促进作用,随浓度增加促进作用增强,其中,浓度为50μg/ml的千年草籽热水提取物促进作用越强.结论 千年草热水提取物和乙醇提取物均具有抗氧化活性、促进人皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成作用,其中千年草籽的活性最强,能促进细胞增殖,无明显细胞毒性.

目的:探讨金龙胆草醇提取物对慢性牙周炎常见致病菌牙龈卟啉单胞菌(Pg)、具核梭杆菌(Fn)的体外抑菌效果,观察金龙胆草醇提取物对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)诱导人牙龈成纤维细胞(HGF)炎症反应的影响.方法:以乙醇为提取剂,采用索式提取法、热水浴浸提法和超声辅助提取法对金龙胆草进行提取,冷冻干燥后计算提取率;使用滤纸片扩散法观察提取物对Pg、Fn的抑菌效果;采用细胞计数试剂-8(CCK-8)检测金龙胆草醇提取物和Pg-LPS、HGF共同培养24h、48 h对细胞增殖的影响;通过酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)分泌水平;应用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测HGF炎症模型中核因子-κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)蛋白表达水平,分析金龙胆草醇提取物对NF-κB信号通路的抑制情况.结果:3种提取方式的金龙胆草提取率比较,超声辅助提取法显著高于索式提取法和热水浴浸提法(P＜0.05).金龙胆草醇提取物对Pg、Fn的最小抑菌浓度分别为20 mg/mL和40 mg/mL,索式提取法的抑菌效果优于超声辅助提取法和热水浴浸提法.干预24、48 h后,10、20、50 μg/mL药液组HGF活性与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);100、200、500、1 000 μg/mL药液组HGF活性显著低于对照组(P＜0.05).干预12、24h后,Pg-LPS组HGF培养液上清液中TNF-α、IL-1β、PGE2水平均高于对照组(P＜0.05);干预 12、24h后,Pg-LPS+20 μg/mL药液组、Pg-LPS+50 μg/mL药液组TNF-α水平均低于Pg-LPS组(P＜0.05);干预 12 h后,Pg-LPS+10μg/mL药液组、Pg-LPS+20 μg/mL药液组、Pg-LPS+50 μg/mL药液组IL-1β水平均明显低于Pg-LPS组(P＜0.05);干预 12、24h后,Pg-LPS+10μg/mL药液组、Pg-LPS+20 μg/mL药液组、Pg-LPS+50 μg/mL药液组PGE2水平均低于Pg-LPS组(P＜0.05).干预12、24 h后,Pg-LPS组HGF中NF-κB、MMP-1蛋白相对表达量均高于对照组(P＜0.05);干预 12、24 h后,Pg-LPS+10 μg/mL药液组、Pg-LPS+20 μg/mL药液组、Pg-LPS+50 μg/mL药液组NF-κB、MMP-1 蛋白相对表达量均低于Pg-LPS组(P＜0.05).结论:金龙胆草醇提取物对Pg、Fn有一定的抑菌作用,索式提取法可提高抑菌效果;金龙胆草醇提取物可抑制Pg-LPS诱导HGF的TNF-α、IL-1β、PGE2分泌,阻断NF-KB信号通路的激活,这可能是其发挥抗炎作用的机制之一.