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白细胞介素-22通过调节菌群和E-钙黏蛋白表达保护牙龈上皮屏障的研究
编辑人员丨4天前
目的:研究白细胞介素-22(IL-22)在牙周炎症环境下对牙龈上皮屏障的调控作用及其可能机制。方法:构建IL-22敲除小鼠,采用混合菌液口腔灌洗法构建牙周炎模型。收集同窝生野生型牙周炎组及IL-22敲除牙周炎组小鼠(每组7只)口腔菌斑并提取DNA,建立牙周炎相关风险微生物数据库“PD-RiskMicroDB”并结合16S rRNA测序结果,测定两组小鼠口腔菌群变化和微生物功能的关系。通过改良胰酶消化法培养牙龈上皮细胞(GEC),以100 μg/L IL-22、感染复数为100的牙龈卟啉单胞菌(Pg)分别或联合刺激GEC,实验分组为:对照组(细胞未加刺激)、IL-22组、Pg组及Pg+IL-22组,处理时间为3和12 h;采用细胞免疫荧光、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白质印迹法检测各组细胞3 h后上皮屏障蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;通过异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)介导的上皮细胞通透性实验明确各组GEC 3和12 h细胞通透性的变化。RT-qPCR检测同窝生野生型牙周炎组及IL-22敲除牙周炎组小鼠牙龈上皮E-cadherin表达水平。将15只C57BL/6野生型小鼠按随机数字表法随机分为对照组、牙周炎组和牙周炎+IL-22处理组,每组5只。RT-qPCR及免疫组织化学(IHC)染色法检测各组小鼠牙龈上皮E-cadherin的表达水平。结果:16S rRNA测序结果显示,与同窝生野生型牙周炎组小鼠相比,IL-22敲除牙周炎组小鼠口腔菌群组成发生改变,其中与牙周组织侵袭相关的菌属丰度显著增高(线性判别分析得分为2.22, P=0.009)。体外细胞实验显示,Pg感染GEC 3 h后,Pg组GEC的细胞连接中断,Pg组E-cadherin荧光强度较对照组减弱,E-cadherin的mRNA(0.69±0.12)和蛋白(0.60±0.12)表达水平均显著低于对照组(分别为1.00±0.00、1.04±0.08)( P=0.043, P=0.003);而Pg+IL-22组的E-cadherin荧光强度较Pg组稍增强,Pg+IL-22组E-cadherin的mRNA(1.16±0.10)和蛋白(0.98±0.07)表达水平均显著高于Pg组(分别为0.69±0.12、0.60±0.12)( P=0.005, P=0.007);上皮通透性实验结果显示,Pg处理GEC 3 h后,对照组、IL-22组、Pg组及Pg+IL-22组各组间总体比较上皮屏障通透性差异无统计学意义( F=0.20, P=0.893);处理12 h后,相较于对照组(1.00±0.00),Pg组GEC上皮屏障通透性(1.39±0.15)显著增加( P=0.027),而Pg+IL-22组上皮屏障通透性(1.02±0.18)显著低于Pg组( P=0.034);体内RT-qPCR结果显示,IL-22敲除牙周炎组小鼠牙龈上皮E-cadherin的mRNA表达水平(0.32±0.21)显著低于同窝生野生型牙周炎组(1.01±0.01)( t=5.70, P=0.005)。RT-qPCR及IHC染色结果显示,牙周炎组小鼠牙龈上皮组织E-cadherin的mRNA表达水平(0.40±0.07)和E-cadherin阳性表达吸光度值(0.02±0.00)均显著低于对照组(分别为1.00±0.00、0.04±0.01)( P=0.005, P=0.006);牙周炎+ IL-22处理组E-cadherin的mRNA表达水平(1.06±0.24)和E-cadherin阳性表达吸光度值(0.03±0.01)均显著高于牙周炎组( P=0.003, P=0.039)。 结论:IL-22可能通过调节口腔菌群的侵袭性以及宿主屏障蛋白表达,发挥其对炎症环境下牙龈上皮屏障的保护作用。
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编辑人员丨4天前
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基于单细胞转录组测序对牙周炎小鼠脑膜生物学改变与认知障碍相关性的研究初探
编辑人员丨4天前
目的:运用单细胞转录组测序分析牙周炎小鼠脑膜的生物学改变,探讨牙周炎小鼠脑膜生物学改变与认知障碍的相关性。方法:将30只C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为2组(每组15只),在对照组小鼠上颌双颊侧局部涂抹不含牙龈卟啉单胞菌(Pg)的2%羧甲基纤维素(CMC),在实验组小鼠上颌双颊侧局部涂抹Pg W83和2%CMC的混合物,3次/周,持续16周。观察对照组和实验组小鼠上颌牙槽骨吸收情况、自主活动能力与认知功能的变化、大脑皮层中小胶质细胞和星形胶质细胞激活情况、检测小鼠脑膜和大脑内紧密连接蛋白Occludin mRNA表达情况。然后使用统一流形逼近与投影(UMAP)算法对单细胞转录组各细胞亚群数据进行降维整合处理。对内皮细胞差异基因进行基因本体(GO)和京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析,进一步采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证差异基因转录激活因子3(Atf3)、含载脂蛋白L域1(Apold1)的表达情况。结果:亚甲蓝染色实验显示,实验组小鼠上颌颊、腭侧釉质牙骨质界到牙槽嵴顶的距离[分别为(185.60±17.60)、(206.90±13.37)μm]均显著大于对照组[分别为(135.33±9.57)、(163.05±14.98)μm]( t=5.02, P=0.002; t=4.37, P=0.005)。旷场实验显示实验组小鼠的总路程和平均速度[(971.88±164.57)cm和(3.25±0.55)cm/s]与对照组[(914.24±278.81)cm和(3.05±0.93)cm/s]相比差异均无统计学意义( t=0.65, P=0.525; t=0.65, P=0.520)。新物体识别实验中实验组小鼠相对辨别指数[(48.02±16.92)%]显著低于对照组[(66.27±17.90)%]( t=2.40, P=0.027)。Y迷宫实验显示,实验组小鼠的自发交替率[(50.99±14.17)%]显著低于对照组[(63.56±11.88)%]( t=2.33, P=0.030)。免疫组化染色结果显示,实验组小鼠脑内小胶质细胞和星形胶质细胞被激活。RT-qPCR结果显示,实验组小鼠脑膜和大脑中紧密连接蛋白Occludin mRNA的表达(分别为0.61±0.10、0.64±0.20)均显著低于对照组(分别为1.02±0.25、1.04±0.31)( t=3.47, P=0.010; t=2.66, P=0.024)。单细胞转录组测序显示,脑膜存在11种细胞类型,包括内皮细胞、成纤维细胞、免疫细胞等,其中内皮细胞占比最大[对照组为26.47%(1 589/6 004),实验组为26.26%(807/3 073)],是脑膜中最主要的细胞类型;实验组小鼠脑膜组织中粒细胞比例[11.65%(358/3 073)]较对照组[5.56%(334/6 004)]增加。进一步聚类分析内皮细胞,GO富集分析显示差异基因与血管生成、细胞黏附、细胞凋亡等有关;KEGG分析显示差异基因与白细胞介素-17信号通路、松弛素信号通路等相关。RT-qPCR显示,实验组小鼠脑膜组织中Atf3和Apold1 mRNA表达(分别为0.42±0.24、0.54±0.27)均显著低于对照组(分别为1.03±0.26、1.02±0.23)( t=3.88, P=0.005; t=3.02, P=0.017)。 结论:Pg W83慢性感染的牙周炎小鼠认知能力下降,存在神经炎症,屏障功能改变;单细胞转录组测序发现脑膜组织存在免疫细胞浸润,Atf3和Apold1基因表达下调,提示脑膜免疫和屏障功能的改变在牙周炎导致的认知障碍中发挥作用。
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编辑人员丨4天前
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二酰甘油通过诱导中性粒细胞胞外捕获网抑制牙龈上皮角化屏障
编辑人员丨2周前
目的:探讨二酰甘油(DG)诱导中性粒细胞胞外捕获网(NETs)生成和潜在的调控机制,评估NETs对牙龈上皮角化屏障的影响.方法:从MTBLS4684 数据库中获取牙周炎和健康受试者的脂质组学数据,对其进行标准化处理,分析两组中DG的含量差异.使用DG处理人外周血多形核中性粒细胞(PMNs)后,通过Western blot检测瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)表达,Sytox green染色检测胞外核酸变化,免疫荧光检测CitH3 表达及分布的变化.使用蛋白激酶C(PKC)抑制剂预处理PMNs后,再加入DG 刺激,通过 Western blot、Sytox green 染色和免疫荧光检测 NETs 形成.提取 NETs 刺激人牙龈角质形成细胞(HGKs),采用实时荧光定量PCR和Western blot检测兜甲蛋白(LOR)和紧密连接蛋白 2(CLDN2)的表达变化.通过免疫组化检测健康和牙周炎组牙龈上皮中LOR和CLDN2 的表达,并使用Western blot检测牙龈上皮中NETs标志物CitH3 和髓过氧化物酶(MPO)蛋白表达.结果:牙周炎患者牙龈上皮中多种 DG 含量增高.DG 刺激 PMNs 后,CitH3 蛋白表达增加(P<0.01),核酸释放到细胞外,CitH3 荧光表达增强并向细胞外分布;使用PKC抑制剂后,上述过程被有效抑制.NETs刺激HGKs细胞后,角化标志物LOR和屏障标志物CLDN2 基因和蛋白表达降低(P<0.05).牙周炎患者牙龈上皮中LOR和CLDN2表达降低,CitH3 和MPO蛋白表达增加(P<0.05).结论:DG通过激活PMNs中的PKC促进NETs形成和累积,进而破坏牙龈上皮的角化和屏障功能.
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编辑人员丨2周前
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功能性引导骨再生屏障膜的组织工程设计
编辑人员丨2024/1/13
引导骨再生(guided bone regeneration,GBR)术是一种被广泛应用于口腔种植和牙周临床的技术,其通过屏障膜的使用,在牙龈软组织与骨缺损之间建立生物屏障,阻挡上皮和成纤维细胞长入骨缺损区,为成骨细胞增殖、新骨形成提供一个相对封闭的环境,从而达到引导骨组织再生和定向修复的目的 [1].理想的引导骨再生屏障膜应具有良好的机械性能,包括良好的空间维持性能和临床可操作性,良好的生物性能如生物相容性、生物活性、组织选择性和抗菌性等,以适配复杂的口腔组织环境并促进新骨形成 [1].
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编辑人员丨2024/1/13
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伴放线聚集杆菌与人牙龈上皮细胞相互作用的研究进展
编辑人员丨2023/10/21
伴放线聚集杆菌是一种革兰氏阴性兼性厌氧菌,是牙周炎的主要致病菌之一,具有多种毒力因子,不仅能损害牙龈上皮细胞(HGECs)屏障结构,逃避宿主的免疫防御,还能向深层组织入侵,破坏牙周膜和牙槽骨.而伴放线聚集杆菌与HGECs的相互作用是细菌入侵牙周组织的第一步,也是菌体引起机体免疫反应的关键.本文就伴放线聚集杆菌在HGECs上的黏附与定植,与HGECs的相互作用两方面的研究作一综述.
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编辑人员丨2023/10/21
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下颌第二磨牙远中骨缺损致牙周牙髓联合病变1例
编辑人员丨2023/8/6
下颌第三磨牙近中阻生时,常因食物嵌塞、阻生第三磨牙拔除后致第二磨牙远中骨缺损.阻生第三磨牙拔牙创愈合后,第二磨牙远中仍有不同程度的牙槽骨吸收,容易继发龋损、牙齿松动、牙周病变等[1].第二磨牙经牙周治疗和单纯性生物膜覆盖后,其基骨再生效果也不显著[2].引导组织再生术(GTR)是在牙周手术中利用生物膜材料作为屏障,阻挡牙龈上皮和牙龈结缔组织在愈合过程中向根面生长,进而引导具有形成附着能力的牙周膜细胞优先向根面生长,从而在病变根面上形成新的牙骨质并有牙周膜纤维埋入,形成新附着性愈合.
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编辑人员丨2023/8/6
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影响角化龈再生的若干因素
编辑人员丨2023/8/6
种植义齿周围充足的角化牙龈与种植体周围软硬组织的长期稳定有着密切的关系,充足的角化牙龈不仅可以恢复原有的软组织解剖形态,同时也为种植义齿的红白美学打下了坚实的基础.角化牙龈由表面高度角化的复层鳞状上皮组成,这种结构相比于无角化上皮,有较好的机械强度,在外界的刺激下可以更好地保持其上皮袖口相对稳定的形态,形成了口腔内第一道软组织屏障.关于缺牙区角化龈消失或不足的病因及发病的机制,目前鲜见文献报道,为了掌握种植体周围角化龈增量的有效方法,本文讨论了影响角化龈宽度的若干重要因素.
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编辑人员丨2023/8/6
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IL-22在大鼠牙周炎发展中时序性表达的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探索大鼠牙周炎发展过程中IL-22(interleukin-22,IL-22)、IL-22受体1(interleukin-22 receptor 1,IL-22R1)和白介素-22结合蛋白(interleukin-22-binding protein,IL-22BP)的时序性表达的意义.方法 将SD大鼠均分为对照组(0周)、牙周炎1周组、牙周炎2周组、牙周炎3周组、牙周炎5周组,用高糖饮食+丝线结扎+接种牙龈卟啉单胞菌的方法造模,在各时间节点取相关组织,观察牙周组织病理改变和牙槽骨吸收情况,检测IL-22、IL-22R1、IL-22BP的含量及mRNA的表达量.结果 对照组牙周组织正常;在建模1周可以观察到上皮损伤和轻度炎性细胞浸润,在建模第3周组达到高峰期;建模第5周组炎症减轻,上皮细胞增生和屏障完整性的恢复,从而形成了牙周袋;与对照组比较,各牙周炎组大鼠牙槽骨吸收明显,根分叉逐渐暴露,腭侧多边形面积增加,上颌软组织中IL-22和IL-22R1含量及mRNA的相对表达量增加,IL-22BP含量及mR-NA的相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);随着造模时间的延长,牙槽骨吸收逐渐加重、腭侧多边形面积增加,差异有统计学意义(P<0.05);IL-22和IL-22R1含量及mRNA的相对表达量在第3周达到高峰,第5周有所降低,差异有统计学意义(P<0.05);IL-22BP含量及mRNA的相对表达量降低,在第3周达到低谷,第5周有所增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 IL-22、IL-22R1和IL-22BP与牙周炎的病情发展密切相关,调节IL-22、IL-22R1和IL-22BP的表达,可为牙周炎的诊疗带来新的思路.
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编辑人员丨2023/8/6
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种植体周结缔组织附着的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
种植体周围软组织封闭不仅依赖于上皮附着,更重要的是重建纤维结缔组织附着,以稳固地支撑上皮屏障从而预防种植体周围炎,维持种植义齿的长期成功率.理想的结缔组织附着对种植体颈部的设计具有重要意义.本文就种植体周结缔组织附着研究进展进行综述.
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编辑人员丨2023/8/5
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牙周炎症微环境对牙龈上皮屏障影响研究进展
编辑人员丨2023/8/5
牙周病是一种常见的慢性炎症性疾病,与牙周致病菌、黏膜和免疫宿主细胞之间复杂的相互作用有关.牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)在牙周病中被认为是重要的致病菌之一,与黏膜和免疫细胞相互作用,导致炎症细胞因子的产生.牙龈上皮是口腔微生物群的物理和免疫屏障,在牙周组织感染炎症后激活免疫反应中起着至关重要的作用.文章就牙龈上皮细胞在P.gingivalis刺激炎症细胞形成的炎症微环境中的生物学行为研究做一综述.
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编辑人员丨2023/8/5
