目的:探讨长期节食状态下大鼠体内胆汁酸的变化及其机制。方法:20只健康雄性Wistar大鼠分为对照组和节食组，每组10只。对照组大鼠正常量饮食，节食组大鼠给予正常饮食量的50%饲养，12周后麻醉，采集各组大鼠血清、胆汁、肝脏和回肠组织样本，分离腹部脂肪称重，并计算腹部脂肪/体重比。计算胆汁流速。采用试剂盒和高效液相色谱串联质谱法测定各样本中总胆汁酸（TBA）及β-鼠胆酸（β-MCA）、牛磺β-鼠胆酸（Tβ-MCA）、胆酸（CA）、牛磺胆酸（TCA）、甘氨胆酸（GCA）、鹅去氧胆酸（CDCA）、甘氨鹅去氧胆酸（GCDCA）、去氧胆酸（DCA）、牛磺去氧胆酸（TDCA）、甘氨去氧胆酸（GDCA）、石胆酸（LCA）、甘氨石胆酸（GLCA）、牛磺猪去氧胆酸（THDCA）、牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）、甘氨熊去氧胆酸（GUDCA）的浓度，采用实时荧光定量聚合酶链反应测定肝脏和回肠组织法尼醇X受体（Fxr）“肠-肝轴”通路上胆汁酸相关核受体、代谢酶和转运体小异二聚体伴侣（ Shp） 、成纤维细胞生长因子15（ Fgf15） 、胆固醇7α-羟化酶（ Cyp7a1）、甾醇12α-羟化酶（ Cyp8b1） 、胆酸盐输出泵（ Bsep） 、多药耐药相关蛋白2（ Mrp2） 、Na +依赖性胆酸盐转运体（ Asbt）等的mRNA表达量。组间比较采用 t检验。 结果:与对照组相比，节食组大鼠体重与腹部脂肪/体重比均显著降低（ P<0.01）；血清TBA水平以及胆汁流速和胆汁酸经胆汁排泄量显著升高（ P<0.05）；肝组织中β-MCA、CA、GCA、CDCA、GCDCA、DCA、GDCA、LCA、GLCA、TUDCA和GUDCA的浓度显著升高（ P<0.05），而TCA、TDCA和THDCA的浓度显著降低（ P<0.05）；回肠组织中Tβ-MCA、TCA、DCA和TDCA浓度均显著降低（ P<0.05）；肝脏中次级胆汁酸和非结合型胆汁酸浓度明显增高（ P<0.05），回肠中结合型胆汁酸浓度显著降低（ P<0.05）。与对照组比较，节食组大鼠回肠和肝脏部位 Fgf15基因表达量均显著降低，回肠 Asbt基因表达量显著上调，肝脏中 Shp和 Cyp7a1的mRNA表达水平均显著上调，而 Cyp8b1的mRNA表达量显著降低（均 P<0.05）。 结论:节食大鼠饮食结构的改变促使体内胆汁酸呈现明显的特征性变化，究其机制可能与Fxr“肠-肝轴”的适应性调控有关。

目的 建立测定肝胆双清口服液中牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和特女贞苷含量的高效液相色谱法.方法 牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量测定,色谱柱为Agilent Extend-C18 柱(150 mm×4.6 mm,3.5 μm),流动相为 0.02 mol/L磷酸二氢钠溶液(用三乙胺调pH至 6.0)-乙腈(梯度洗脱),流速为 1 mL/min,检测波长为 205 nm,柱温为 40℃,进样量为 10μL;特女贞苷的含量测定,色谱柱为Thermo AcclaimTM 120A C18 柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为 1 mL/min,检测波长为 224 nm,柱温为 40℃,进样量为 10μL.结果 牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和特女贞苷的质量浓度分别在 0.040 0～1.000 5 mg/mL、0.031 0～0.776 0 mg/mL、0.029 3～0.731 5 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9,n=6);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于 2.0%(n=6);加样回收率分别为 98.49%,99.49%,99.78%,RSD分别为 3.04%,2.20%,1.15%(n=6).3批样品中3种成分的含量分别为0.3231～0.3258 mg/mL、0.2858～0.2876 mg/mL、0.2688～0.3055 mg/mL.结论 所建立的方法操作简便快速、重复性好、结果准确,可用于肝胆双清口服液中牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和特女贞苷的含量测定.

目的 探讨外周血胆汁酸对精神分裂症患者认知功能的影响.方法 用靶向代谢组学分析23例精神分裂症患者(精神分裂症组)和23例健康志愿者(健康对照组)血清中初级和次级胆汁酸代谢物水平.采用MATRICS公认认知成套测验量表(MCCB)测试所有被试者5个维度的认知功能.结果 精神分裂症患者在信息处理速度、工作记忆、推理及问题解决能力、视觉学习能力等多个维度的认知功能均有受损.与健康对照组相比,精神分裂症组血清中胆酸(CA)和鹅去氧胆酸(CDCA)的含量显著降低,而甘氨胆酸(GCA)的含量显著升高,去氧胆酸(DCA)/CA的比值(3.04 vs.1.16)更高.校正了年龄、性别、身体质量指数后,信息处理速度、工作记忆、推理和问题解决和视觉学习能力与血清中牛磺胆酸(TCA)、GCA、甘氨鹅去氧胆酸(GCDCA)、CDCA等初级胆汁酸的含量呈显著负相关.结论 精神分裂症患者的胆汁酸谱出现明显紊乱,CA、CDCA等起神经保护作用的胆汁酸减少和具有细胞毒性的胆汁酸GCA增多可能造成精神分裂症患者认知水平下降.

目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)诱发小鼠胆汁淤积和肝损伤机制研究.方法 体内实验:将成年雌性ICR小鼠随机分为对照组(玉米油)、DEHP组(200 mg·kg-1·d-1),共灌胃4周,建立胆汁淤积模型.收集所有小鼠血液与肝组织,生化仪检测血清、肝脏总胆汁酸(TBA)水平,酶标仪检测ALP、GGT;HE染色观察肝组织病理变化;实时定量PCR检测肝脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;液相色谱-三重四级杆质谱仪(LC-MS/MS)检测小鼠肝脏胆汁酸谱.体外实验:培养小鼠肝细胞AML-12,使用DEHP(250 μmol/L)以及去氧胆酸(DCA)(125 μmol/L)和鹅去氧胆酸(CDCA)(125 μmol/L)处理细胞24 h,实时定量PCR检测细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平.计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 体内实验显示:与对照组相比,DEHP组小鼠肝体比,血清TBA、ALP、GGT及肝脏TBA均显著升高(t值分别为-4.396、-5.109、-8.504、-3.792和-7.974,P值均<0.05).与对照组相比,肝脏胆汁酸谱中胆酸(CA)、CDCA、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、DCA及熊去氧胆酸(UDCA)均显著升高(t值分别为-2.802、-3.177、-2.633、-2.874和-2.311,P值均<0.05).DEHP组小鼠肝脏HE染色显示为汇管区扩大、胆管变形、胆管周围伴有炎性细胞浸润,且肝脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平均显著升高(t值分别为-2.539、-2.823和-4.636,P值均<0.05).体外实验显示:0～1 000 μmol/L DEHP处理后肝细胞活力实际数值相差不超过15%,分别使用125、250以及500 μmol/L的DEHP刺激后,肝细胞的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平均明显升高(P值均<0.05).与单独使用DEHP刺激相比,CDCA联合DEHP刺激上调了细胞炎症因子IL-1β mRNA水平(P<0.01);DCA与DEHP联合刺激可显著增加细胞炎症因子IL-1β和IL-6的mRNA水平(P值均<0.01).结论 DEHP暴露导致小鼠胆汁淤积肝病的发生并诱发肝脏炎症,这可能与其促进有毒胆汁酸的产生进而加剧炎性因子分泌有关.

目的 建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)法同时测定牛黄上清片中牛磺胆酸、7-酮-3α,12-α-羟基胆烷酸、甘氨猪去氧胆酸、12-脱氢胆酸、甘氨胆酸、3-酮-7α,12α-二羟基-5β-胆烷酸、牛磺鹅去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、猪胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、猪去氧胆酸、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺石胆酸钠、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸的含量.方法 分析采用 Thermo Fisher Scientfic Bremen HYPERSIL GOLD色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9 μm);流动相0.1%甲酸-甲醇,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温 40℃;加热电喷雾离子源;负离子扫描;平行反应监测模式.再进行化学模式识别.结果 18 种胆汁酸在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率 96.73%～104.07%,RSD 2.10%～4.07%.不同厂家样品中各胆汁酸在种类和含量上存在一定差异.结论 该方法灵敏可靠,专属性好,可用于牛黄上清片的质量控制.

目的:探究牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对颞下颌关节骨关节炎(TMJ OA)的治疗作用.方法:将36只6周龄的雌性SD大鼠随机分为3组:对照组(CON)、单侧前牙反(牙合)组(UAC)、UAC伴TCDCA注射组(UAC+TCDCA).在UAC组和UAC+TCDCA全部大鼠中均建立UAC模型,分别在实验开始后8、12周(对照组、UAC组、UAC+TCDCA组)取材(n=6),作TMJ组织形态学检测.免疫组织化学检测CYP7A1、BAAT、TGR5在组织细胞中的表达.结果:(1)UAC组与对照组相比,在髁突软骨中细胞排列紊乱,细胞数量减少,软骨基质减少,厚度变薄;TCDCA注射组与同龄UAC组相比,细胞排列、软骨基质以及软骨厚度均有所改善(P＜0.05);(2)与对照组相比,各时间点髁突软骨中TCDCA特异性受体TGR5和合成的关键酶CYP7A1、BAAT阳性的细胞主要分布于前肥大层和肥大层,UAC组阳性细胞个数较对照组显著减少(P＜0.05).结论:TCDCA对TMJ OA退变具有明显的治疗作用.

目的 研究柴胡Bupleuri Radix不同极性部位对慢性不可预知应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型大鼠抑郁样行为干预作用和神经递质调节作用,筛选出最佳药效部位,并建立一种能够测定抑郁大鼠胆汁酸谱的方法.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、盐酸文拉法辛(35mg/kg)组、柴胡低极性部位(15g/kg)组、柴胡中极性部位(15 g/kg)和柴胡高极性部位(15g/kg)组,每组9只,造模28d同时给药,动态测定大鼠的体质量变化,通过糖水偏好实验和旷场实验检测行为学变化;采用UPLC-MS测定血清中色氨酸(tryptophane,Trp)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-hydroxyindoleacetic acid,5-HIAA)、去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)、多巴胺(dopamine,DA)、乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)、谷氨酸(glutamic acid,Glu)、酪氨酸(tyrosine,Tyr)含量;采用全自动生化分析仪测定γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和血清总胆红素(serum bilirubin,TBIL)含量;采用ELISA测定盲肠内容物中总胆汁酸(total bile acid,TBA)水平;采用UPLC-MS/MS拟靶向代谢组学建立36种胆汁酸的拟靶向相对定量方法,测定盲肠内容物胆汁酸谱,并对组间胆汁酸差异性进行分析.结果 柴胡不同极性部位组和盐酸文拉法辛组均可回调CUMS引起的大鼠体质量、糖水偏爱率、直立次数、水平穿越格数异常和血清中 Trp、5-HT、5-HIAA、NE、DA、Ach、GABA、Glu、Tyr 水平(P＜0.05、0.01、0.001),且柴胡低极性部位回调效果最好.同时柴胡低极性部位可显著回调大鼠血清γ-GT活性及血清TBIL、盲肠内容物TBA含量(P＜0.05、0.01);建立了 36种胆汁酸的拟靶向相对定量方法,所建立的方法具有良好的稳定性,胆汁酸谱分析表明,柴胡低极性部位可调节盲肠内容物胆汁酸谱,通过回调其中5种差异胆汁酸(牛磺熊去氧胆酸、熊去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺石胆酸)发挥药效作用.结论 柴胡低极性部位为抗抑郁最佳药效部位,同时能够调节胆汁酸谱的代谢紊乱,发挥肝保护作用.

目的 建立熊胆Fel Ursi粉不同极性部位的HPLC指纹图谱,比较不同提取部位化学成分之间的差异,为全面评价熊胆粉的质量评价提供参考.方法 将熊胆粉分别用醋酸乙酯、三氯甲烷、丙酮、无水乙醇、乙腈依次提取,浓缩干燥,用甲醇溶解,建立HPLC指纹图谱,并采用相似度评价系统软件进行数据分析.结果 10批熊胆粉醋酸乙酯部位共有模式共标记6个共有峰,三氯甲烷部位共有模式共标记8个共有峰,丙酮部位共有模式共标记8个共有峰,乙腈部位共有模式共标记10个共有峰,乙醇部位共有模式共标记16个共有峰,5种溶剂提取物均指认了 4个共有指纹峰(牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸).综合聚类分析和主成分分析(principal component analysis,PCA)结果,发现相同产地的熊胆粉,受不同厂家加工方法不同的影响,也存在一定的质量差异.通过正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA),发现牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、乙醇部位10号峰、乙腈部位1、2号峰可能是熊胆粉质量差异的主要标志性成分.结论 所建立的HPLC指纹图谱可以反映熊胆粉的化学成分分布,为熊胆粉的整体质量评价提供参考,并为熊胆粉谱效关系研究提供一定依据.

目的 探讨龙胆苦苷通过过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)通路对胆汁淤积性肝损伤的影响及作用机制.方法 ①48只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组、模型组[α-萘基异硫氰酸酯(ANIT),灌胃]、熊去氧胆酸组(200 mg/kg,灌胃)以及龙胆苦苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg,灌胃),每组8只.各组小鼠连续给予相应干预措施7 d.第5天给药6 h后,正常组灌胃给予空白橄榄油溶液,其余各组小鼠灌胃给予ANIT诱导胆汁淤积性肝损伤.给药结束后,观察小鼠体质量变化;记录肝脏质量,计算肝脏指数;检测小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBil)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测肝组织PPAR-α、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达;Western blot法检测小鼠肝脏中PPAR-α、细胞色素P4503A4(CYP3A4)、肉碱棕榈酰转移酶2(CPT2)以及组成型雄甾烷受体(CAR)蛋白表达.②采用L02人肝细胞进行体外实验,建立牛磺鹅去氧胆酸钠(TCDC)胆汁淤积性肝细胞损伤模型,采用10、50、100 μmol/L龙胆苦苷进行干预.测定细胞上清液中AST、ALT、TBA的含量;RT-qPCR法验证肝细胞中PPAR-α、NF-κB、TNF-α、IL-1β mRNA表达;Western blot法检测肝细胞中PPAR-α、CYP3A4、CPT2以及CAR蛋白表达.③另在TCDC胆汁淤积性肝细胞损伤模型基础上,采用PPAR-α激动剂(非诺贝特)和抑制剂(GW6471)进行PPAR-α拮抗实验.Western blot法检测肝细胞中PPAR-α、CYP3A4、CPT2、CAR蛋白表达.结果 ①龙胆苦苷可下调胆汁淤积性肝损伤小鼠血清中AST、ALT、TBA、TBil含量(P<0.05),并改善小鼠肝脏病变情况.②龙胆苦苷可上调胆汁淤积性肝损伤模型小鼠肝组织和模型细胞中PPAR-α mRNA水平,降低促炎细胞因子NF-κB、TNF-α、IL-1β的mRNA水平.③龙胆苦苷能上调胆汁淤积性肝损伤小鼠肝组织PPAR-α、CYP3A4、CPT2蛋白水平,降低CAR蛋白水平.④PPAR-α抑制剂可降低龙胆苦苷对胆汁淤积性肝损伤细胞中PPAR-α的上调作用,并进一步影响PPAR-α对于CYP3A4、CPT2、CAR蛋白的调控作用.结论 龙胆苦苷可通过上调PPAR-α蛋白调控胆汁酸相关蛋白CYP3A4、CPT2、CAR表达,进而降低NF-κB、TNF-α、IL-1β等促炎细胞因子水平,从而发挥抗胆汁淤积性肝损伤的作用.

目的 探讨二氢杨梅素通过肠道菌群影响胆汁酸代谢对肥胖小鼠的改善作用.方法 给予高脂饲料喂养建立小鼠肥胖模型,随机分为模型组和二氢杨梅素组(100 mg/kg),给药干预 28 d,期间维持高脂饲料喂养.给药结束后,测定各组小鼠体质量、进食量并称定腹股沟皮下脂肪(iWAT)、附睾脂肪(eWAT)和棕色脂肪(BAT)质量,免疫组化法检测iWAT和BAT中解偶联蛋白 1(UCP1)的表达,16S rDNA测序分析和胆汁酸靶向分析观察肠道微生物和胆汁酸谱的改变,RT-qPCR法检测胆汁酸合成相关基因的mRNA表达.结果 与模型组比较,二氢杨梅素组小鼠体质量增加量减少(P<0.01),iWAT和eWAT质量减轻(P<0.05,P<0.01),iWAT和BAT中UCP1 表达增加.模型组和二氢杨梅素组小鼠肠道菌群具有差异(P<0.05),其中与胆汁酸代谢相关的肠道菌群相对丰度发生改变(LDA score>2).与模型组比较,在粪便胆汁酸中,二氢杨梅素组结合型胆汁酸、牛磺-alpha-鼠胆酸(T-alpha-MCA)和牛磺-beta-鼠胆酸(T-beta-MCA)水平升高(P<0.05,P<0.01);在血清胆汁酸中,二氢杨梅素组血清总胆汁酸、胆酸(CA)、鹅去氧胆酸(CDCA)、牛磺胆酸(TCA)和牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)水平有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),次级胆汁酸水平降低(P<0.05);回肠组织Fxr、Fgf15 mRNA表达下调(P<0.05),肝组织Cyp7a1 mRNA表达上调(P<0.05).结论 二氢杨梅素可能通过重塑肠道微生物区系,减少与胆盐水解酶相关菌群的丰度,使结合型胆汁酸T-alpha-MCA和T-beta-MCA水平增加,抑制回肠FXR-FGF15 通路使CYP7A1 表达上调促进胆汁酸合成,进而改善肥胖.