目的:探讨甘草查尔酮A（Lico A）对急性心肌梗死（AMI）模型小鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、心肌梗死（心梗）组和低、中、高剂量药物组以及核因子红系2-相关因子2（Nrf2）特异性抑制剂（ML385）组，每组5只。造模3 d测各组小鼠心功能后，取心肌组织进行苏木素伊红（HE）染色评估心肌组织坏死程度；免疫荧光法检测心肌组织活性氧（ROS）生成，酶标法检测心肌组织中谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MAD）含量，以及过氧化氢酶（CAT）活力；免疫印迹检测心肌组织中血红素加氧酶-1（HO-1）及Nrf2的表达，免疫组织化学方法进一步验证心肌组织中Nrf2的表达及定位情况。结果:与假手术组相比，手术组小鼠心肌组织坏死显著，但给予Lico A治疗后，各剂量组小鼠心肌组织坏死程度及梗死面积明显减小。检测心肌局部氧化应激情况显示，Lico A治疗后，心肌组织ROS水平较心梗手术组显著降低，GSH含量升高、CAT活力增加同时MAD含量降低（ P均<0.05）。免疫印迹分析显示，与假手术组相比，心梗组小鼠心肌组织总蛋白中HO-1和核蛋白中Nrf2表达轻度升高，而Lico A治疗组小鼠心肌组织总蛋白中HO-1及核蛋白中NRF2表达显著增高（ P<0.05）。免疫组化结果同样证明Lico A可促进Nrf2核转移（ P<0.05）。给予Nrf2特异性抑制剂ML385后，Lico A的上述保护作用被明显抑制。 结论:Lico A可通过激活Nrf2/HO-1通路来发挥抗氧化应激效应，从而有效地防止心梗后心肌的损伤。

目的:基于网络药理学和分子对接技术探讨麻杏石甘汤(MXSGD)对甲型流感的抗病毒作用与机制研究。方法:首先通过TCMSP、PubChem、Swiss Target Prediction数据库及文献筛选出MXSGD的活性成分和潜在靶点；采用GeneCards、OMIM筛选疾病相关靶点；通过UniProt数据库标准化靶蛋白基因名称，String数据库获取交集靶蛋白互作关系，运用Cytoscape 3.9.1软件可视化网络图和拓扑分析；David数据库对关键靶点进行GO和KEGG富集；采用分子对接技术对主要活性成分与核心靶点进行验证。结果:共筛出MXSGD的135个潜在化合物成分与250个对应靶点。经拓扑分析得到25个关键活性成分(包括槲皮素、甘草查尔酮A等)和66个关键靶点(涉及TNF、TP53、RELA及VEGFA等)与甲型流感密切相关。GO富集得到生物过程、细胞组成和分子功能分别406、32、60条信息；KEGG通路富集得到TNF、AGE-RAGE、IL-17信号通路等161条结果；分子对接显示槲皮素与TNF、TP53具有强烈结合活性，甘草查尔酮A与RELA、VEGFA具有较好结合活性。结论:MXSGD具有多成分、多靶点、多通路等抗甲型流感的特点，槲皮素和甘草查尔酮A可以通过作用于核心靶点TNF、TP53、RELA及VEGFA等发挥抗流感的作用。

目的:研究甘草查尔酮A对大鼠骨关节炎的作用及其与p38-MAPK炎症信号通路的关系。方法:将雄性Wistar 大鼠160只采用区组随机化方法随机分为空白-未干预组，空白-干预组，关节炎-未干预组，关节炎-干预组，每组40只。关节炎组大鼠以单侧膝关节前交叉韧带切断术处理，空白组大鼠仅做皮肤切开缝合；甘草查尔酮A干预组大鼠予以10 μmol/L 甘草查尔酮A 1 mL 关节腔内注射，干预实施8周。8周后番红染色各组大鼠的软骨，并进行光镜下骨关节炎软组织病理（OARSI）评分；将软骨培养在5% 胎牛血清低糖细胞培养基内48 h，用化学显色法测定培养基一氧化氮（NO）、前列腺素E 2（PGE 2）、硫酸化糖胺聚糖（sGAG）和二型胶原（Collagen Ⅱ）含量；以蛋白质印迹法检测大鼠软骨组织中p38、磷酸化的p38（p-p38）和基质金属蛋白酶（MMP）表达。 结果:甘草查尔酮A干预的大鼠骨关节炎进展缓慢，关节炎-干预组OARSI 评分为（3.8±1.7）分，低于关节炎-未干预组的（9.7±1.2）分，差异有统计学意义（ P=0.006）；关节炎-干预组NO释放量为（77.84±17.65）μmol/mg，PGE 2释放量为（6.78±1.76）ng/mg，sGAG丢失量为（89.78±9.76）μg/mg，Collagen Ⅱ丢失量为（1.78±0.76）μg/mg，分别显著低于关节炎-未干预组的（107.56±18.74）μmol/mg、（10.756±1.87）ng/mg、（125.75±8.87） μg/mg、（3.76±0.88）μg/mg，差异均有统计学意义（NO： P=0.002；PGE 2： P<0.001；sGAG： P<0.001；Collagen Ⅱ： P<0.001）。蛋白质印迹结果表明，关节炎-干预组p38相对表达量（3 454±421）、p-p38相对表达量（2072±175）、p-p38占总p38比值为（0.65±0.14）、MMP相对表达量（1 776±765），与关节炎-未干预组p38相对表达量（5 322±323）、p-p38相对表达量（4 257±184），p-p38占总p38比值（0.89±0.11）、MMP相对表达量（3 865±874）相比均减少，且差异有统计学意义（p38： P<0.001；p-p38： P<0.001；p-p38/p38： P=0.002；MMP： P=0.001）。 结论:甘草查尔酮A可以通过抑制炎性反应和和抑制软骨基质降解来延缓实验骨关节炎大鼠的骨关节炎进展，p38-MAPK信号通路可能参与了其中的调控过程。

目的 分析射干麻黄汤与定喘汤治疗支气管哮喘寒热证候的机制差异.方法 用中药系统药理学数据库与分析平台分别筛选射干麻黄汤与定喘汤中各组成药物的有效成分及作用靶点.通过基因与疾病关联数据库和人类基因信息数据库获取支气管哮喘对应的基因靶点,分别筛选射干麻黄汤与冷哮、定喘汤与热哮的核心作用靶点及成分,并用网络分析在线平台进行网络拓扑分析,通过在R软件中用"org.Hs.eg.db"软件包进行基因本体(GO)与京都基因组百科全书(KEGG)功能富集分析,预测其不同作用机制,并用Autodock Vina软件对核心活性成分和核心靶点进行分子对接技术分析验证.结果 射干麻黄汤药物活性成分130个,定喘汤药物活性成分236个,相同活性成分54个.在与支气管哮喘相关靶点中,射干麻黄汤有52个潜在治疗靶点,定喘汤有45个潜在靶点.GO与KEGG分析显示:射干麻黄汤与定喘汤在血小板活化、脂肪细胞因子信号通路、酒精性肝病、瞬时受体电位通道的炎症介质调节、炎症性肠病、心肌细胞中的肾上腺素能信号、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B等信号通路等存在差异.射干麻黄汤中核心化合物鸢尾甲黄素9CI、鸢尾甲黄素A与定喘汤中核心化合物花生四烯酸、甘草查尔酮A等存在差异;定喘汤治疗热哮与射干麻黄汤治疗冷哮药物作用机制在信号转导与转录活化因子3(STAT3)、辣椒素受体(TRPV1)与Ras同源基因(RHO)靶点存在差异.结论 2种中药方剂调节哮喘寒热证候引起的不同分子和生物过程反映了冷哮和热哮2种中医证候之间的生物学差异.

目的 探讨甘草查尔酮A(LA)在小鼠烟曲霉菌(AF)性角膜炎中的抗炎作用.方法 采用CCK-8实验检测不同浓度的LA溶液(12、24、36、48、60 μmol/L)对小鼠来源巨噬细胞(RAW264.7)增殖活力的影响;采用免疫荧光法检测AF感染后第3天小鼠角膜中性粒细胞的浸润程度;使用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验方法检测各组RAW264.7细胞中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血红素加氧酶(HO-1)的mRNA及蛋白表达水平.结果 60 μmol/L的LA对RAW264.7细胞没有毒性(P＞0.05),并显著降低感染后小鼠角膜的中性粒细胞浸润(t=5.94,P＜0.01);60 μmol/L的LA显著下调AF诱导的IL-6、IL-1β、TNF-α 的 mRNA 和蛋白表达(F=15.35～507.53,P＜0.001)并上调 HO-1 mRNA 表达(F=1 633.06,P＜0.001).结论 LA能够通过减少中性粒细胞浸润、下调炎症因子表达和增强HO-1表达,在AF性角膜炎中起到抗炎作用.

目的 探讨甘草查尔酮A对结直肠癌细胞恶性行为的影响,分析其作用机制是否与调控蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导子与激活子3(STAT3)信号通路有关.方法 用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验、流式细胞术和Western blot检测不同浓度(0、5、10、20 nmol/ml)甘草查尔酮A对结直肠癌细胞LoVo增殖、迁移、凋亡以及p-JAK2和p-STAT3蛋白水平的影响.用AG490抑制JAK2/STAT3信号通路,通过CCK-8、Transwell实验和流式细胞术评估LoVo细胞增殖、迁移、凋亡.结果 5、10、20 nmol/ml的甘草查尔酮A处理LoVo细胞48 h和72 h后的A450值、凋亡率显著升高(P＜0.05),迁移数以及p-JAK2和p-STAT3蛋白水平显著降低(P＜0.05).AG490处理LoVo细胞48 h和72 h后的A450值、凋亡率显著升高(P＜0.05),迁移数以及p-JAK2和p-STAT3蛋白水平显著降低(P＜0.05).AG490和甘草查尔酮A联合处理LoVo细胞48 h和72 h后的A450值、凋亡率显著升高(P＜0.05),迁移数显著降低(P＜0.05).结论 甘草查尔酮A通过抑制JAK2/STAT3信号通路来抑制结直肠癌细胞增殖和迁移,并促进细胞凋亡.

目的 建立测定比格犬血浆中甘草查尔酮A含量的UPLC-MS/MS分析方法,并研究甘草查尔酮A单剂量静脉注射和灌胃给药后在比格犬体内药代动力学模式.方法 比格犬以3 mg·kg-1的剂量分别进行静脉注射和灌胃给药甘草查尔酮A,采集不同时间点的血浆样品,采用UPLC-MS/MS方法测定血浆中甘草查尔酮A的浓度,采用DAS 2.1.1版软件对血药浓度-时间曲线进行统计矩拟合,计算甘草查尔酮A的药代动力学参数.结果 血浆中甘草查尔酮A的线性回归方程为:Y=0.039X+0.1959,R2=0.9997,线性范围为2～2000 μg·L-1.静脉注射甘草查尔酮A在血浆中的半衰期t1/2为6.57 h,药时曲线下面积(AUC0～t)为1665 h·mg·L-1,平均驻留时间(MRT0～t)为5.68h,清除率(CL)为2106L·h-1·kg-1.灌胃给药甘草查尔酮A在血浆中的t1/2为8.23 h,AUC0～,为397 h·mg·L-1,MRT0～t为9.35 h,口服生物利用度为23.8％.结论 甘草查尔酮A在血浆的UPLC-MS/MS方法具有良好的专属性与灵敏度.灌胃给药甘草查尔酮A具有良好的血浆暴露量及口服生物利用度.

目的 探究甘草查尔酮A(LA)对急性髓系白血病(AML)细胞HL-60的作用及其机制.方法 将人AML细胞系HL-60细胞分为对照组、LA组(30μmol/L)、IL-6组(100 ng/mL,JAK2/STAT3信号通路激活剂)和LA+IL-6组.培养48 h后,采用MTT法和克隆形成实验检测HL-60细胞增殖活性;采用流式细胞术检测HL-60细胞周期分布和细胞凋亡;采用Tran-swell 实验检测 HL-60 细胞侵袭和迁移;采用 Western blot 检测 p21、p27、cyclin E2、CDK2、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3、p-JAK2,JAK2,p-STAT3和STAT3蛋白表达水平.结果 与对照组比较,LA组细胞活力、克隆形成数、侵袭和迁移细胞数均降低(P＜0.05),Bcl-2、cyclin E2和CDK2蛋白表达量均降低(P＜0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均降低(P＜0.05);G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均升高(P＜0.05),p21、p27、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达量均升高(P＜0.05).与对照组比较,IL-6组细胞活力、克隆形成数、侵袭和迁移细胞数均升高(P＜0.05),Bcl-2、cyclin E2和CDK2蛋白表达量均升高(P＜0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均升高(P＜0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均降低(P＜0.05),p21、p27、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达量均降低(P＜0.05).与IL-6组比较,LA+IL-6组细胞活力、克隆形成数、侵袭和迁移细胞数均降低(P＜0.05),Bcl-2、cyclin E2和CDK2蛋白表达量均降低(P＜0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均降低(P＜0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均升高(P＜0.05),p21、p27、Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达量均升高(P＜0.05).LA+IL-6组和LA组间上述指标差异没有统计学意义.结论 甘草查尔酮A可抑制AML细胞系HL-60细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡并将细胞阻滞在G0/G1期,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关.

目的 探讨甘草查尔酮A对TNF-α和IFN-γ联合诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)炎症因子分泌的影响及其抗炎机制.方法 CCK8法筛选甘草查尔酮A作用质量浓度.将细胞分为正常组、模型组(10 ng/mL TNF-α和10 ng/mL IFN-γ)和甘草查尔酮A组(5、10 μg/mL).CCK8法检测细胞活性,ELISA法和RT-qPCR法检测炎症因子及相关趋化因子的分泌和 mRNA 表达,Western blot 法检测 TNF-α、IL-6、NF-κB p65、p-NF-κBp65、STAT3、p-STAT3、JAK1、p-JAK1蛋白表达,DCFH-DA荧光探针法、流式细胞术分别检测细胞活性氧(ROS)水平和细胞凋亡情况.结果 甘草查尔酮A质量浓度在10 μg/mL及以下时对HaCaT细胞活性无显著影响(P＞0.05),且在5、10 μg/mL时对HaCaT细胞炎性损伤具有保护作用(P＜0.01).与模型组比较,甘草查尔酮A可降低TNF-α、IL-6、IL-1β水平,TNF-α、IL-6、IL-1β、RANTES、TARC、MDC mRNA 表达,TNF-α、IL-6、p-NF-κB p65、p-STAT3 和 p-JAK1 蛋白表达,ROS水平和凋亡率(P＜0.01).结论 甘草查尔酮A能够减轻TNF-α和IFN-γ诱导的HaCaT细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-KB/STAT3信号通路活化,进而抑制相关炎症因子表达和ROS水平有关.

目的:基于前期研究成果并结合网络药理学及分子对接技术,探讨益金方治疗肺癌的作用机制.方法:从多个开放数据平台获取益金方药物作用基因和肺癌相关基因.基于Cytoscape探索药物成分-靶点关系谱,探寻关键化合物.基于STRING平台完成蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络的建立,采用Cytoscape-CytoNCA拓扑分析筛选核心靶点.通过R-ClusterProfiler对靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书富集分析.最后,利用AutoDock对关键有效成分与肺癌通路相关核心靶点进行对接验证.结果:益金方的主要药物有效成分有 157 个,其包含潜在治疗靶点 235 个.通过 5 个数据平台共获得了 8 585 个肺癌相关靶点.药物潜在治疗靶点和数据平台的共享靶点为 215 个.从PPI核心网络中筛选核心靶点 18 个.GO功能富集分析结果显示,相关靶点在各种生物过程、细胞功能方面富集显著,靶点与肺癌信号通路关系密切.根据分子对接结果,紫杉叶素、槲皮素、柚皮素、木犀草素、甘草查尔酮A、山柰酚、异鼠李素、薯蓣皂苷元和刺槐素能够与肺癌通路相关的核心靶点紧密结合.结论:益金方的主要药物有效成分可能通过多个靶点和信号通路干预肺癌,这可能是该方产生治疗效果的机制之一.