目的 建立衍生化GC-M S法测定甲磺酸萘莫司他原料药中甲磺酸甲酯与甲磺酸乙酯.方法 采用柱前衍生技术、程序升温法,以氦气为载气,以甲磺酸丁酯为内标,测定甲磺酸萘莫司他中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的含量.结果 甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的线性范围均为3.0～200.0 ng·mL-1,相关系数分别为0.9975和0.9999;检测限分别为0.9643和1.0078 ng·mL-1;定量限分别为2.8928和3.0223 ng·mL-1;进样精密度的RSD值分别为0.9％ 和1.3％;平均加样回收率分别为102％(RSD=2.9％)和106％(RSD=1.2％).结论 该方法简单方便、快速易行,可作为控制甲磺酸萘莫司他中甲磺酸甲酯与甲磺酸乙酯含量的有效方法.

目的 探讨生化快速测定技术诊断需氧菌性阴道炎的临床价值.方法 以随机抽选的模式从2016年3月至2017年3月于南京市鼓楼区妇幼保健所进行需氧菌性阴道炎诊断的患者中抽选出86例患者,对其进行临床采样,分别进行生化快速测定技术检测和Donders湿片镜检法检测,比较两种检测方法的检测结果.结果 采用生化快速测定技术检测患者的阳性率为91.86%,阴性检测率为8.14%,与Donders湿片镜检法结果(阳性率87.20%,阴性率12.80%)比较差异无统计学意义(P>0.05);患者采用生化快速测定技术的敏感度为94.93%、阳性预测值为91.86%、阴性预测值为63.63%、特异度为63.63%;采用生化快速测定技术能快速检测pH值、唾液酸苷酶、白细胞脂酶、H2O2浓度、β-葡萄糖醛酸酶以及凝固酶等这些常用于判断患者确诊需氧菌性阴道炎的较好指标.结论 采用生化快速测定技术诊断需氧菌性阴道炎效果显著,具有较高的特异度以及敏感度,操作方法简单快捷.

目的 基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)建立早期血流感染致病菌检测体系.方法 选取大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯杆菌、屎肠球菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、变形杆菌、肺炎链球菌等10种临床最常见的病原菌作为检测对象,结合多重PCR技术和Mass ARRAY iPLEX单碱基延伸技术、MALDI-TOF MS技术,模拟细菌感染血液样本建立MALDI-TOF MS细菌核酸检测体系,测定其灵敏度;选取2017年3-5月在解放军总医院急诊科收集的疑似脓毒症患者血液样本33例对该体系进行验证,并将检测结果与微生物科血培养结果进行比较.结果 本研究所建立的MALDI-TOF质谱血液致病菌检测系统可同时检测分属两组的10种细菌,所有细菌样本均可见延伸峰;灵敏度为100CFU/ml;与33例临床血培养鉴定结果的阴性符合率为100％(27/27),6例血培养阳性样品中有2例为摩氏摩根菌和人葡萄球菌感染,因这两种细菌不包含在10种检测对象之内而未能通过质谱检出,其余4例血培养阳性样品与质谱检测结果的符合率为100％.结论 本研究建立的MALDI-TOF质谱检测体系可从全血样本中直接检测10种临床常见血流感染致病菌,无需进行培养,与传统血培养及生化鉴定相比具有耗时短、灵敏度高、准确度高等优势,可在一定程度上满足临床早期、快速诊断血流感染致病菌的需求.

酶分子在长期进化过程中形成一系列氨基酸残基组成的活性架构,参与底物的识别、结合与催化过程,而活性架构中相应氨基酸残基是如何影响酶分子结合底物的能力,进而影响酶分子的催化效率,一直是酶分子理性改造研究的热点.利用亲和电泳技术,可以快速展示内切纤维素酶TrCel12A和木聚糖酶TlXynA活性架构中不同突变体的催化活性及其迁移率的变化,进而通过在不同底物浓度凝胶中蛋白质相对迁移率变化程度的定量回归分析,发现由氨基酸单点突变导致蛋白质迁移率的相对变化,可以定量表征酶分子突变前后结合底物能力的变化.亲和电泳测定的有效阻滞常数Kb值与等温滴定量热法和荧光光谱法测定的相关参数比较具有明显相关性.由于亲和电泳技术在测定酶分子与底物的结合能力时具有简便、快速、灵敏的特点,因而可作为常规生化实验室常规普筛技术来检测突变文库中系列突变体导致结合力的变化.

背景:研究表明大黄游离蒽醌能够保护肠黏膜细胞结构和功能的稳定, 但尚未有将其与脂肪干细胞联合治疗大鼠急性胰腺炎的报道.目的:观察并探讨大黄游离蒽对脂肪干细胞移植治疗大鼠急性胰腺炎的影响及其机制.方法:体外快速复苏并培养购自中国医学科学院的冻存鼠脂肪干细胞, 随后采用MTT比色法测定脂肪干细胞的细胞存活率并行PKH-26标记.将北京维通利华动物实验技术有限公司提供的SD大鼠随机平均分为4组, 病理模型组大鼠采用肠壁穿刺逆行胰胆管注射体积分数5％牛黄胆酸钠建立急性胰腺炎病理模型, 然后尾静脉注射0.5 mL的L-DMEM完全培养液;大黄游离蒽组建模后给予大黄游离蒽醌200 mg/kg灌胃;脂肪干细胞组建模后尾静脉注射0.5 mL细胞浓度1×107 L-1脂肪干细胞;联合治疗组建模后同时给予以上2种干预.各个实验组中所有干预治疗措施每日进行1次且连续治疗3 d.结果与结论: (1) 与理模型组的大鼠相比, 大黄游离蒽醌组和脂肪干细胞组大鼠血清淀粉酶活性以及白细胞介素6水平显著降低 (P <0.05), 胰蛋白酶原激活肽水平显著升高 (P <0.05);经过脂肪干细胞移植和大黄游离蒽醌灌胃处理联合治疗, 上述3指标水平较大黄游离蒽醌组和脂肪干细胞组进一步降低 (P<0.05); (2) 苏木精-伊红染色结果显示, 此2个单独治疗组大鼠胰腺组织中脂肪变性、出血、细胞坏死及炎症细胞浸润等病理变化程度均有明显减轻, 联合治疗组中大鼠的病理变化的缓解程度则更为明显; (3) 荧光显微镜下观察可见, PKH-26标记的阳性细胞数联合治疗组最多, 脂肪干细胞组次之, 而在大黄游离蒽组及病理模型组则未见 (P <0.05); (4) TUNEL法检测可见, 与病理模型组比较, 2个单独治疗组中胰腺组织中的细胞凋亡数明显降低, 联合治疗组进一步降低 (P <0.01); (5) RT-PCR和Western blot法检测显示, 病理模型组大鼠胰腺组织转化生长因子β1及Smad2/3基因和蛋白表达最高, 联合治疗组最低 (P <0.01), 而2个单独干预组均较病理模型组显著较低 (P <0.05); (6) 结果证实, 大黄游离蒽干预联合脂肪干细胞移植治疗大鼠急性胰腺炎可以有效改善模型大鼠急性胰腺炎的血液生化指标水平;并可明显地缓解急性胰腺炎模型大鼠炎症反应程度和胰腺组织形态学病变以及胰腺细胞的凋亡, 这可能与降低转化生长因子β/Smad信号通路有关.

目的:建立柱前在线自动衍生-高效液相色谱法快速测定染发剂中过氧化氢的含量,并与《化妆品安全技术规范》(2015年版)高效液相色谱柱前衍生法进行方法学比较.方法:对照品和样品在自动进样器中完成自动衍生反应后直接进入高效液相色谱系统进行分析(将被测样品中的过氧化氢与三苯基膦进行衍生化反应,生成氧化三苯基膦),由安捷伦ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱分离.结果:柱前在线自动衍生-高效液相色谱法和《化妆品安全技术规范》(2015年版)高效液相色谱柱前衍生法的线性范围分别为2.4～192.7 μg·mL-1和9.6～192.7 μg·mL-1,线性回归方程分别为Y=39.19X-187.9(r=0.999 6)和Y=43.15X-160.8(r=-0.999 7),加样回收率分别为92.7％～99.5％和91.4％～99.0％,精密度RSD分别为0.70％和0.30％(n=6),检测下限分别为18.1 μg·g-1和23.5 μg· g-1.柱前在线自动衍生-高效液相色谱法和《化妆品安全技术规范》(2015年版)高效液相色谱柱前衍生法测定3种不同品牌染发剂中过氧化氢的含量分别为5.83％～8.40％和5.68％～8.27％,RSD为1.6％～2.6％.结论:柱前在线自动衍生-高效液相色谱法快速测定化妆品中过氧化氢的重复性好,灵敏度高,且比《化妆品安全技术规范》(2015年版)检测方法操作简单,检出下限更低,适用于染发剂中过氧化氢的常规分析检测.

目的 对生脉注射液所含化学成分进行全面、系统的定性研究.方法 分别采用柱前衍生-气质联用、高分离度快速液相-离子阱-多级质谱、离子交换色谱-柱后衍生化等技术对样品中糖、皂苷、木脂素、氨基酸等成分进行了鉴别,并采用分子排阻色谱-蒸发光散射法对大分子物质的检查做出了初探.结果 生脉注射液中含有果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、5-羟甲基糠醛、19种皂苷、14种木脂素和17种氨基酸.结论 所建方法简便、准确,基本阐明了该品种的化学物质基础,为后续单个成分的含量测定研究提供了实验基础.

目的 调查2020年6月湖南省郴州市发生的一起毒蘑菇中毒事件,分析事件发生的原因,为制定防控措施提供依据.方法 对中毒原因开展流行病学调查,采集可疑毒蘑菇样品并进行形态学鉴定,同时应用液质联用法测定蘑菇样品和患者血液中的蘑菇毒素.结果 本次毒蘑菇中毒事件发病7人,死亡1人;患者均进食了自行采摘的野生蘑菇,潜伏期14～23 h,早期临床表现为呕吐、腹痛、腹泻等胃肠道症状,进而出现进行性肝损害,严重者因急性肝衰竭而死亡;患者血液生化检测丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶异常升高;采集现场剩余可疑毒蘑菇样品,经外观形态学鉴定和蘑菇毒素检测,综合鉴定为灰花纹鹅膏.结论 本次事件是因误采误食灰花纹鹅膏引起的中毒事件,建议加大毒蘑菇中毒宣传力度,建立蘑菇毒素快速筛查技术,完善食源性疾病监测网络,以减少毒蘑菇中毒和死亡的发生.

目的 建立丹磺酰氯(DNSCl)衍生-液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测野生菌中鹅膏蕈氨酸(IBA)和毒蝇母(MUS)法,为毒蘑菇中毒事件的病因鉴定提供技术支持.方法 样品用盐酸溶液超声提取10 min,离心后加0.38 mL水、0.5 mL 5％NaHCO3溶液和0.6 mL 30 mmol/L DNSCl丙酮溶液进行双分子DNSCl衍生化,于60℃反应30 min,经乙腈稀释和沉淀无机盐后,采用Waters XBridgeTM BEH C18色谱柱分离,LC-MS/MS测定IBA和MUS(多反应监测模式).结果 野生菌中IBA和MUS在0.5～250 mg/kg范围内线性关系良好,相关系数分别为0.997和0.999;检出限分别为0.15 mg/kg和0.1 mg/kg.在0.5、10、250 mg/kg水平下IBA回收率为84.5％～102.0％,相对标准偏差(RSD)为4.7％～8.6％;MUS回收率为88.6％ ～ 95.4％,RSD为4.9％～7.5％.结论 通过优化提取和双分子DNSCl衍生化反应等前处理条件,采用LC-MS/MS法可以快速准确测定野生菌中的IBA和MUS.

[目的]为明确南美斑潜蝇Liriomyza huidobrensis经快速冷耐受(Rapid cold hardening,RCH)处理后的基础耐寒性的变化,以探究南美斑潜蝇RCH的生理生化机制.[方法]根据初步筛选的胁迫温度和驯化时间的结果,将南美斑潜蝇蛹直接进行低温胁迫(Cold shock,Cs)和先进行RCH驯化后再进行低温胁迫(RCH+CS)后,记录南美斑潜蝇蛹的羽化率;利用热电偶方法测定驯化后和未驯化蛹的过冷却点;分别采用气相色谱-质谱仪联用法(GC-MS)、液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)及分光光度计测定不同处理模式下南美斑潜蝇的脂肪酸、糖类以及甘油的含量.[结果]经RCH驯化后再进行低温胁迫的南美斑潜蝇蛹的羽化率显著增加(由20.00％增至45.56％,F4.10=10.37,P＜0.05),但过冷却点(SCP)却没有明显变化(未驯化-19.90 ℃,驯化后-20.10 ℃,t=0.703,P＞0.05);RCH驯化后南美斑潜蝇体内棕榈油酸含量增加(由5.96％增至19.26％,F3,8=52.717,P＜0.05),棕榈酸含量下降(由24.32％降至2.94％,F3,8=65.456,P＜0.05),总不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸比值升高(由2.17增至10.94,F3,8=64.347,P＜0.05);RCH驯化后南美斑潜蝇体内的海藻糖(由5.46 μg/mg增至7.71 μg/mg,F3.8=9.912,P＜0.05)和甘油的含量升高(由1.177 μg/mg增至1.314 μg/mg,F3,8=6.428,P＜0.05),而葡萄糖含量下降(由1.84 μg/mg降至1.22 μg/mg,F3,8=191.298,P＜0.05).[结论]南美斑潜蝇RCH与脂肪酸的不饱和度增加以及海藻糖、葡萄糖和甘油这3种抗冻物质均有关.