含鹅膏肽类毒素致命鹅膏中毒可导致患者肝功能障碍，严重者出现死亡，经酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测鹅膏肽类毒素有助于早期临床确诊。本文三例患者经ELISA鉴定为含α-鹅膏毒肽的致命鹅膏中毒，中毒患者以消化系统损害为首发症状，后期出现肝功能损害，1例患者放弃治疗后死亡，予以吸附毒素、导泻、补液促进毒物代谢、保肝等支持治疗后，2例患者好转出院。

目的 探讨毒物检测技术在毒蕈中毒临床诊治中的应用价值,分析江苏省确诊毒蕈中毒患者的临床特征.方法 本研究是多中心回顾性队列研究.共收集2020年6月至2023年7月入组参与队列研究的江苏省内10家医院行毒物检测鉴定的32例毒蕈中毒患者的毒检结果、暴露信息及临床特征,分析毒检阳性即检出毒素患者的临床特征,对毒检采样情况与检测结果进行统计分析.结果 本研究共纳入32例进行毒检鉴定的临床诊断毒蕈中毒或可疑中毒患者.收集32例血液样本、31例尿液样本、22例蘑菇样本及1例呕吐物样本.其中蘑菇样本的毒素检测阳性结果18例,占比59.38％,检出α-鹅膏毒肽等8类毒素;1例呕吐物样本检出烟碱;所有患者血液、尿液样本中均未检出常见毒素.结论 通过毒物检测鉴定常见毒蕈毒素种类,能够辅助毒蕈中毒诊断,有助于更迅速、精准的明确蘑菇分型及其所含毒素类别,便于指导临床救治.

目的 调查2022年广东省梅州市发生的一起毒蘑菇中毒事件,为毒蘑菇中毒的防控提供科学依据.方法 对中毒原因开展流行病学调查,对可疑毒蘑菇样品进行鉴定,同时测定毒蘑菇样品和患者血液与尿液中的毒素.结果 本次毒蘑菇中毒事件4人均出现中毒症状,经治疗均治愈出院.涉事蘑菇样品经鉴定为致命鹅膏(Amanita exitialis).剩余毒蘑菇汤、已煮毒蘑菇子实体、未煮毒蘑菇子实体残余组织和事发地采集的毒蘑菇中均检出α-鹅膏毒肽;患者血液和尿样样本中均未检出α-鹅膏毒肽.结论 本次事件是因误食致命鹅膏引起的中毒事件,当地村民食品安全防范意识薄弱,需加强对野生蘑菇知识的普及,建立毒蘑菇中毒快速检测技术体系,减少毒蘑菇中毒和死亡事件的发生.

目的 基于液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术建立快速检测血液、尿液中6种蘑菇毒素的分析方法,并将其应用于临床实际中毒案例.方法 将0.1 mL血液、尿液经蛋白沉淀、氮吹复溶、超声过滤后用ACQUITY UPLC HSS T3液相色谱柱分离,质谱检测采用多反应监测模式(MRM).结果 该分析方法经过验证,符合方法学验证要求,其定量结果准确可靠,并于9例患者血液和(或)尿液样品中检出目标毒素,血液样品中浓度为1.12～5.63 ng/mL,尿液样品中浓度为1.01～9.27 ng/mL,检出物多为γ-鹅膏毒肽(γ-AMA).新鲜蘑菇样品中检出目标物浓度为1.48～41.54 ng/mg,两份新苦粉孢牛肝菌样品中均检出羧基二羟基鬼笔毒肽(PCD)16.51～41.54 ng/mg.结论 本研究中建立的LC-MS/MS方法前处理过程简单快速,具有较高的灵敏度,能同时检测多种蘑菇毒素类化合物,可为临床毒蕈中毒快速诊断提供策略和参考.

致命鹅膏最早发现于我国广东,是我国蘑菇中毒事件中最常见的剧毒蘑菇之一,因含有鹅膏肽类毒素,可以造成急性肝损害型中毒,引起相关食物中毒事件已有73起.本研究系统分析了致命鹅膏的生物学特征、毒素检测、毒素基因组学、中毒事件流行病学及毒理学等方面的研究历程和最新进展,以期为该种剧毒蘑菇中毒的有效防控和精准救治提供科学依据.

目的 建立超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometer detector quadrupole time of flight,UPLC-Q-TOF)定性定量检测毒蘑菇中鹅膏肽类毒素的分析方法.方法 样品加入甲醇后均质,超声离心提取,待测液采用ACQUITY UPLC? HSS T3 1.8 μm色谱柱(2.1×50 mm)进行分离,以0.1％氨水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱 0 min,2％B;0～0.5 min,2％B;0.5～6.0 min,95％B;6.0～7.0 min,95％B;7.0～8.0 min,2％B,流速0.3 mL/min,柱温40℃,进样量2.0 μL.采用超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱仪对毒蘑菇进行分离、鉴定鹅膏菌中的毒素成分.结果 毒蘑菇样品中1、2、3、5、6、7、8号样品均未检出鹅膏肽类毒素;4号样品共检出6种组分,经鉴定为已知的鹅膏肽类毒素,分别是α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽和二羟鹅膏毒肽酰胺.进一步建立鹅膏肽类毒素快速定量方法,5种鹅膏肽类毒素在25～1 000μg/L范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.991 2～0.998 9,平均加标回收率为89.5％～110.5％,相对标准偏差为3.80％～7.80％.其中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽的含量分别是(19.701±0.175)、(0.098±0.014)、(1.548±0.001)、(0.331±0.002)及(0.108± 0.060)mg/kg,二羟鹅膏毒肽酰胺与羧基二羟鬼笔毒肽相对含量为0.754 mg/kg.结论 该方法用于测定毒蘑菇中多种鹅膏肽类毒素,方法简单、快速、可靠,为进食毒蘑菇突发中毒患者的快速临床诊断和及时治疗提供了有效的科学依据.

目的 建立血清和尿液中α-鹅膏毒肽β-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽毒素的超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱测定方法.方法 血清样品先用乙腈沉淀蛋白,再用含0.1％ TFA的二氯甲烷提取,残渣用含2mmol/L乙酸铵的甲醇-水(30∶70)溶解;尿液样品直接过0.22μm微孔滤膜;样品溶液经HSS T3色谱柱分离后用Q-TOF MS进行测定.结果 毒素准分子离子准确质量数及其同位素特征、色谱峰保留时间可作为毒素定性鉴定的依据,血清和尿液样品的检出限分别为10 ng/ml和5ng/ml,定量限为20 ng/ml和10 ng/ml,加标回收率分别为77.4％～ 95.6％和73.8％～103.8％,相对标准偏差在3.0％～18.0％和1.2％ ～ 25.4％之间.应用该方法测定了大鼠染毒尿液中鹅膏肽类毒素.结论 本方法简便、准确、可靠,适用于中毒事件生物样品中4种鹅膏肽类毒素的检测和确证分析.

目的 建立血清和尿液中4种鹅膏肽类毒素的超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱测定方法,考察和分析4种鹅膏肽类毒素在大鼠体内的代谢特征,为中毒样品的采集提供科学依据.方法 血清样品用乙腈+0.1％TFA二氯甲烷提取,残渣用流动相溶解;尿液样品则直接过0.22μm微孔滤膜;样品溶液经HSS T3色谱柱分离后用ESI-QTOF MS进行测定;选取SD健康大白鼠分别用4种鹅膏肽类毒素染毒,按需收集不同时间段的尿液和血液进行分析.结果 血清和尿液样品的检出限分别为10 ng/ml和5 ng/ml,加标回收率分别为77.4％～95.6％和73.8％～103.8％,相对标准偏差在3.0％～18.0％和1.2％～25.4％.大鼠染毒尿液中均检出4种毒素,鹅膏毒肽的含量明显比鬼笔毒肽的含量高,大鼠染毒血清中仅14％检测到毒素的存在.结论 检测方法适用于中毒事件生物样品中4种鹅膏肽类毒素的检测和确证分析,采集中毒8 h内的尿液对检出鹅膏毒肽的几率最大.

目的 探讨不同胆酸减轻受鹅膏毒肽攻击人肝细胞(L-O2)损伤的作用及机制.方法 根据鹅膏毒肽的质量浓度将实验分为0.00 g/L、0.26 g/L、0.40 g/L、1.40 g/L、2.80 g/L共5个剂量组,将培养至指数生长期的L-O2铺于96孔板,每孔1×103细胞,24 h加入上述浓度的鹅膏毒肽,每组设3个复孔,分别与药物作用24、48、72 h采用四唑盐(MTT)比色法检测肝细胞活性,确定肝细胞生存的最小鹅膏菌毒素攻击剂量.实验分为空白对照组、损伤组和胆酸组,每个组均设3个时间点:攻击24、48、72 h,在攻击24h后使用牛磺胆酸、鹅脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸和牛磺鹅脱氧胆酸分别保护损伤肝细胞,在倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,MTT法进行活细胞计数,生化法检测培养上清液中AST和ALT.结果 肝细胞生存的鹅膏毒肽体外最小攻击剂量为1.40 g/L.空白对照组、损伤组、牛磺胆酸组、鹅脱氧胆酸组、甘氨胆酸组、甘氨鹅脱氧胆酸组及牛磺鹅脱氧胆酸组在鹅膏毒肽攻击肝细胞72 h时吸光度分别为0.812 ±0.035、0.345 ±0.021、0.363±0.018、0.387±0.027、0.431 ±0.018、0.465 ±0.015及0.452±0.030.胆酸各组较损伤组攻击72 h时吸光度逐渐升高,其中鹅脱氧胆酸组、甘氨胆酸组、甘氨鹅脱氧胆酸组、牛磺鹅脱氧胆酸组与损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.05).胆酸各组AST和ALT活性下降,其中甘氨鹅脱氧胆酸组AST和ALT活性最低,与损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 胆酸对鹅膏毒肽攻击L-O2有保护作用,作用机制可能与鹅膏毒肽和胆酸同为钠离子-牛磺酸共同转运多肽和有机阴离子转运多肽底物有关.

目的 查明一起毒蘑菇引起的食物中毒事件的原因,为临床救治提供参考,并警示公众以防止类似事件再次发生.方法 对中毒患者进行流行病学调查,收集可疑食物进食史、 临床表现、 实验室检测结果 和治疗情况等,对蘑菇进行形态学鉴定,采集患者24 h急诊血样、 尿样、 病后7日血样和蘑菇进行毒素检测.结果患者有2种毒蘑菇进食史,潜伏期1.5～2 h,临床表现为恶心、 呕吐和腹泻等胃肠道症状,毒蕈样症状,横纹肌溶解,肝肾损伤,肌酸激酶急骤上升,远高于正常值.给予对症营养支持治疗、 血液灌流、 连续性肾脏替代治疗和血浆置换等救治方案后患者康复出院.在毒蘑菇样本和患者24 h急诊血样中均检出鹅膏毒肽.毒蘑菇经形态学鉴定,分别为毒环柄菇(Lepiota venenata)和亚稀褶红菇(Russula subnigricans).结论 这是一起因误食毒环柄菇(Lepiota venenata)和亚稀褶红菇(Russula subnigricans)引起的中毒事件,应加大食品安全宣传力度,增强公众意识,明令禁止采摘野生蘑菇.