目的:食品与环境中49株豚鼠气单胞菌菌种鉴定、毒力与耐药性检测。方法:VITEK、API 20NE生化鉴定， gyrB、 rpoD系统发育分析；PCR检测 act、 alt、 ast、 lip、 ahp、 aerA、 hlyA、 ompA1、 fla基因；AST-GN16药敏试验。 结果:生化鉴定为豚鼠/嗜水气单胞菌株54株，经系统发育分析豚鼠气单胞菌49株，嗜水气单胞菌4株，中国台湾省气单胞菌1株。毒力基因 alt、 lip、 ompA1、 fla、 act、 aerA、 hlyA检出率依次为100.00%、100.00%、79.59%、14.29%、2.04%、2.04%、2.04%，未检出 ast、 ahp；存在4种毒力基因组合，优势组合为 alt/ lip/ ompA1(32/49)。豚鼠气单胞菌氨苄西林、头孢唑林、头孢西丁、阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、复方新诺明、安曲南耐药率依次为79.59%、14.29%、10.20%、6.12%、4.08%、4.08%、2.04%，哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星、替加环素、呋喃妥英均敏感；2株多重耐药菌株。 结论:gyrB、 rpoD可有效鉴定豚鼠/嗜水气单胞菌， rpoD可区分近亲缘关系豚鼠与中国台湾省气单胞菌；所有豚鼠气单胞菌均携带2种以上毒力基因，1株环境源菌携带7种毒力基因；青霉素类普遍耐药，产生β-内酰胺酶是最主要耐药机制；未发现碳青霉烯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类、呋喃类耐药菌株；食品和生活饮用水存在多重耐药菌。

目的:分析猴痘患者的流行病学、临床症状和实验室检查特征。方法:对义乌市中心医院2023年7月确诊的4例猴痘患者进行流行病学、临床症状和体征、实验室血液及生化分析，并取疱疹液及病变皮肤组织使用非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离培养和全基因测序鉴定。结果:4例患者均为男性，年龄24~35岁，发病前21 d内均有男男性行为。其中，1例患者患有艾滋病，1例患者患有梅毒。4例患者均出现会阴部皮损伴瘙痒，3例入院时查体发现有淋巴结肿大。实验室检测中，病例4血常规显示淋巴细胞异常，为4.57×10 9/L，病例1降钙素原升高，为0.25 ng/mL。3例患者细胞因子异常，其中病例2和3白细胞介素10(IL-10)升高，分别为7.11和9.42 ng/L，病例3 IL-6为66 ng/L，病例2 IL-4为3.24 ng/L。病例2心肌酶谱异常，乳酸脱氢酶为313 U/L，其他指标未见明显异常。在病变皮损组织及疱疹液中成功分离到猴痘病毒，全基因测序鉴定均为Ⅱb进化分支B.1.3亚型，对Vero细胞具有典型的病变效应。 结论:4例猴痘患者的临床症状较轻，男男性行为中密切接触可能在猴痘传播中起关键作用。病毒株均为Ⅱb进化分支B.1.3谱系。

患者，50岁男性，2020年4月1日以“高处坠落致志不清伴呕吐1 h”为主诉入院，拟急诊行“开颅减压术”。术后3 d出现间歇性发热，最高38 ℃，血液标本炎症指标均高于参考值上限，经验性抗感染治疗，仍反复发热。4月12日患者脑脊液标本常规与生化检测指标提示颅内感染，予以万古霉素联合美罗培南治疗。脑脊液与血液标本培养48 h后，见针尖样、透明小菌落生长，经16S rRNA基因鉴定结果为人型支原体。患者最终因病情严重且并发症多，治疗无效判定死亡。

目的:了解一株分离自临床血液标本中罕见菌——阿尔塔米拉金色单胞菌( Aureimonas altamirensis)的生物学特点、鉴定方法、基因组结构和临床意义。 方法:对一株血培养分离菌的培养特性、简单生化特征观察了解；用实验室常规的生化鉴定仪、MALDI-TOF质谱仪和16S rRNA基因序列分析鉴定分离菌，并将测得的16S rRNA基因序列与相关菌株构建16S rRNA系统进化树；对分离菌基因组进行测序和组装，利用相关软件对基因组作基因预测和功能注释。将分离菌与GenBank数据库中收录的相近菌株作基于31个House-Keeping基因进化树分析和全基因组同源核苷酸平均一致性(average nucleotide identity，ANI)分析。结果:分离菌为过氧化氢酶、脲酶、氧化酶反应阳性的革兰阴性无芽孢需氧小杆菌，在血平板上生长缓慢，不能被自动化细菌生化鉴定仪和MALDI-TOF质谱鉴定仪可靠鉴定，16S rRNA基因序列分析和进化树显示：该菌16S rRNA基因序列与GenBank收录的NML070722和IARI-ABL-26阿尔塔米拉金色单胞菌16S rRNA基因序列(序列号为EU442518.1和KC581669.1)一致性最高，相似性均为99.93%。全基因测序结果表明该菌基因组(国家微生物科学数据中心基因序列号：NMDC60043566)总长为4 332 458 bp，GC含量65.14%；编码4 088个基因，功能基因注释显示功能基因主要富集于蛋白质、氨基酸、碳水化合物转运和代谢类功能区，致病基因分析预测到两个可靠性高毒力因子基因，未预测到耐药基因。基因组House-Keeping基因进化树分析显示该菌与阿尔塔米拉金色单胞菌DSM21988和C2P003(NCBI基因组序列号为GCF 001463885.1和GCF 000800175.1)高度同源，但全基因组ANI分析显示其基因组与两菌存在较大差异。结论:在国内临床标本中分离出罕见的阿尔塔米拉金色单胞菌，其生物学和基因组特点还没有被充分认识，目前常规方法难以正确鉴定，其对免疫低下患者的致病性和在临床标本中分离的意义可能还需要更多的病例研究。

目的:研究骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合常温机械灌注(NMP)对大鼠心脏死亡供肝移植术后早期肝细胞凋亡的影响及其机制。方法:贴壁法分离培养BMMSCs并鉴定。SD大鼠随机数字表法分为5组：假手术组(Sham组)、冷保存组(SCS组)、NMP组、BMMSC组和BMMSCs联合NMP组(BP组)，每组每个时间点6只大鼠。分别在术后1 d和7 d取各组大鼠肝组织和血清，血生化检测肝脏酶学；HE染色观察肝组织病理变化；TUNNEL染色检测肝细胞凋亡；免疫组化检测肝细胞转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)表达；Western Blot检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP-78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、活化转录因子4(ATF4)、CHOP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3剪切体(Cleaved caspase-3)的表达。结果:与SCS组相比，NMP组、BMMSC组和BP组肝脏损伤和炎症明显减轻，BP组损伤改善最明显( P<0.05)。BP组肝细胞凋亡在1 d和7 d时较SCS组显著减少，差异有统计学意义( P<0.05)。SCS组中GRP-78、p-PERK和ATF4表达增加，并且促凋亡蛋白CHOP和Cleaved caspase-3表达显著升高，而在BP组中均明显降低，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:BMMSCs联合NMP能够显著改善DCD供肝移植术后早期肝细胞凋亡和炎症反应，其机制可能与抑制移植肝的内质网应激有关。

目的:基于CRISPR/Cas9和Cre-loxP基因编辑技术建立多囊肾病1（polycystic kidney disease 1， Pkd1）基因条件敲除小鼠模型，为深入研究 Pkd1基因在多囊肾病发生中的作用提供动物模型。 方法:采用In-Fusion技术构建打靶载体，根据 Pkd1基因制备对应的gRNA、Cas9 mRNA及携带loxP位点的供体载体，共同注射于C57BL/6N小鼠的受精卵内。将受精卵转移至有假孕状态雌性小鼠的输卵管内部。幼鼠出生后经PCR鉴定及测序分析分选出 Pkd1 flox/flox基因型F0代阳性小鼠，后者与野生型小鼠配繁，筛选出后代基因型为 Pkd1 flox/+的F1代杂合子小鼠，内部扩繁获得基因型为 Pkd1 flox/flox的F2代纯合子小鼠，该基因型小鼠再与 Cre阳性表达的 Ggt1- Cre小鼠杂交，获得 Pkd1 flox/+Ggt1 Cre基因型的F3代小鼠，F3代自交或与F2代 Pkd1 flox/flox回交得到 Pkd1 flox/floxGgt1 Cre基因型的F4代小鼠，即肾脏特异性 Pkd1基因敲除（ Ggt1-cKO）小鼠。采用PCR法鉴定小鼠基因型，按基因鉴定结果分为野生型对照（WT）组（ n=6）、 Pkd1纯合子对照（PKD）组（ n=6）和 Ggt1-cKO敲除验证（CKO）组（ n=6）。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组小鼠肾脏和其他器官组织中 Pkd1 mRNA的表达；HE染色检查各组小鼠肾组织病理改变；自动生化检测仪检测小鼠血清尿素氮和血清肌酐含量，并计算肾脏系数。 结果:PCR检测结果显示，CKO组子代小鼠基因型符合 Pkd1 flox/floxGgt1 Cre。 Pkd1基因仅在肾脏特异性表达，其余组织中均未见表达。RT-qPCR结果显示，CKO组小鼠肾脏髓质 Pkd1 mRNA相对表达量显著低于WT组和PKD组（均 P<0.05）。肉眼可见CKO组小鼠肾脏体积较WT组增大了1倍左右，光镜下可观察到CKO组小鼠肾脏有多个大小形态不一的空泡，髓质组织间隙明显增加。CKO组小鼠肾脏系数、血清尿素氮和血清肌酐含量均显著高于WT组和PKD组（均 P<0.05）。 结论:基于CRISPR/Cas9和Cre-loxP基因编辑技术可成功构建 Pkd1基因条件敲除小鼠，为进一步研究 Pkd1基因在多囊肾病发生中的作用机制提供动物模型。

目的:探讨低密度脂蛋白颗粒（low-density lipoprotein particles，LDL-P）与其他脂蛋白指标相关性，结合冠状动脉造影结果分析LDL-P及其亚组颗粒（LDL1-P~LDL6-P）浓度与冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary atherosclerotic heart disease，CHD）患者冠状动脉狭窄程度的相关性，探索脂蛋白亚组颗粒预防CHD患者冠状动脉狭窄严重程度的价值。方法:横断面研究，连续选取2019年8至12月泰达国际心血管病医院心内科3个月内未服用降脂药行冠状动脉造影检查的259例患者，同期选取健康体检者52名。采用全自动生化分析仪检测血清超敏C反应蛋白（high sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）水平及其他生化指标，核磁共振波谱法（nuclear magnetic resonance spectroscopy，NMRS）检测血浆LDL-P、LDL1-P~LDL6-P及其他生化指标，分析各生化指标与冠状动脉狭窄程度的相关性。采用方差分析及非参数检验比较各组间指标差异，Pearson相关判断所测指标之间的相关性，Logistic回归进行多因素分析，ROC曲线评估相关指标的辅助诊断价值。结果:低密度脂蛋白颗粒（low-density lipoprotein particles，LDL-P）与低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、载脂蛋白B（apolipoprotein B，ApoB）、总胆固醇（total cholesterol，TC）具有高度相关性（ r= 0.927， P<0.001； r=0.921， P<0.001； r=0.844， P<0.001）。冠状动脉重度狭窄患者LDL-P、LDL4-P、LDL5-P和LDL6-P水平较冠状动脉轻度狭窄患者水平高（ U=4 172.000， Z=4.256， P<0.001； t=2.573， P=0.011； U=3 995.000， Z=4.621， P<0.001； t=5.223， P<0.001），LDL-P和LDL6-P水平较冠状动脉中度狭窄患者水平高（ U=1 159.000， Z=2.294， P=0.022； t=2.075， P=0.041）。高水平hs-CRP、LDL5-P、LDL6-P是冠状动脉狭窄程度的危险因子（ OR=1.095， P=0.036； OR=1.015， P=0.046； OR=1.012， P=0.039）。ROC分析LDL-P、LDL5-P、LDL6-P对冠状动脉狭窄程度的鉴定价值，AUC分别为0.67、0.68、0.69，hs-CRP联合LDL5-P与LDL6-P对冠状动脉狭窄程度的辅助诊断价值最大（AUC= 0.70）。 结论:LDL-P与LDL-C、ApoB、TC高度相关，冠状动脉重度狭窄患者LDL-P和LDL6-P水平较轻、中度狭窄患者明显升高，hs-CRP与LDL5-P、LDL6-P为冠状动脉狭窄程度的危险因子，三者联合检测有助于辅助诊断冠状动脉狭窄严重程度，有可能进一步成为风险预测指标。

目的:研究青海省从高海拔牧区搬迁定居城镇的藏族牧民中MS的流行状况及相关因素，尤其是膳食因素。方法:采用横断面研究，纳入920名藏族成年人（男性419名，女性501名），进行一般情况问卷调查、膳食频率调查、体格检查和生化检测。问卷调查包括社会经济、生活方式和食物消费指标。采用主成分分析鉴定膳食模式，采用logistic回归分析MS及其组分的相关因素。结果:MS及组分的患病率分别为32.8%（MS）、83.7%（HDL-C降低）、62.1%（中心性肥胖）、36.7%（血压升高）、11.8%（TG升高）和7.9%（血糖升高）。超重率为31.2%，肥胖率为30.3%。吸烟是HDL-C降低（ OR=1.239，95% CI：1.025~1.496）及TG升高（ OR=1.277，95% CI：1.038~1.571）的相关因素；饮酒是TG升高（ OR=1.426，95% CI：1.055~1.927）的相关因素；体力活动是中心性肥胖、HDL-C降低和TG升高的相关因素。城镇膳食和西方膳食模式依从性随年龄增长而下降，牧区传统膳食模式随年龄增长而上升。按膳食模式得分五分位数分类，城镇膳食和MS显著相关（趋势检验 P=0.016）。 结论:藏族牧民中MS及肥胖高发。吸烟、饮酒、城镇膳食模式、体力活动不足是MS及其组分的相关因素。

目的:探讨血浆蛋白质组学在高原红细胞增多症（HAPC）诊断和发病机制研究中的应用价值。方法:选取2020年1月至2021年1月青海省人民医院10例HAPC患者为试验组，其中男4例，女6例，年龄（46±4）岁。筛选同期同海拔健康对照者10名为对照组，其中男5名，女5名，年龄（44±4）岁。运用高效液相色谱-质谱联用方法进行差异蛋白鉴定和定量，针对筛选出的差异蛋白进行基因本体（GO）功能富集分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）功能富集分析和互作网络分析。结果:试验组和对照组共筛选出有定量值的差异蛋白共117个，只在试验组有定量值的显著上调蛋白数为45个，只在对照组有定量值的显著下调蛋白数为40个，试验组与对照组均有定量值的差异表达蛋白为32个。与对照组比较，试验组32个差异表达蛋白中，11个表达下调，21个表达上调。GO功能富集分析结果显示，差异蛋白参与的生物学过程主要包括免疫反应、补体激活、蛋白级联激活、凝血系统；KEGG功能富集分析结果显示，差异蛋白参与的主要生化代谢途径和信号转导途径为轴突导向、溶酶体、细胞黏附分子、脂质和动脉粥样硬化、造血细胞谱系、胆固醇代谢；显著富集的结构域主要在免疫球蛋白样结构域、类EGF域、纤维连接蛋白Ⅲ型超家族、丝氨酸蛋白酶、Sushi/SCR/CCP超家族；差异蛋白互作分析结果显示，互作评分>700分，节点数最多的前10个差异蛋白分别为MPO、RPS27A、ARG1、GM2A、TIMP1、CRP、FABP5、HBB、S100A7、RHOA。结论:血浆蛋白质组学分析技术有助于识别在HAPC发展中的相关蛋白标志物，为HAPC的诊断及发病机制研究提供参考。

目的:探讨人乳头瘤病毒16(human papillomavirus type 16，HPV16)整合感染宫颈上皮细胞(H8细胞)恶性转化的相关基因、信号通路和可能机制。方法:构建H8细胞恶性转化的细胞模型，采用Transwell试验检测恶性转化后H8细胞的细胞侵袭能力、细胞迁移能力的变化，平板克隆形成实验法检测恶性转化后H8细胞克隆形成能力的变化。提取恶性转化的H8细胞、H8细胞的总RNA，采用Illumina Novaseq 6000测序平台对两组细胞进行转录组学测序，鉴定和分析差异表达基因(DEGs)，并进行基因本体(gene ontology，GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集分析以及蛋白互作网络分析。结果:恶性转化的H8细胞侵袭能力[(6 503±62.43)个比(298±32.19)个， P<0.001]、迁移能力[(15 241±93.83)个比[(7 753±76.32)个， P<0.001]，克隆形成能力[(428.3±5.03)个比[(281.3±12.10)个， P<0.001]较H8细胞显著升高。转录组学测序结果显示，与H8细胞组相比，恶性转化的H8细胞组共有203个基因存在表达差异，其中98个上调，105个下调。GO富集分析表明DEGs主要参与了细胞内进程、生物调节和代谢过程等生物过程，KEGG分析发现主要与丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢通路、P53信号通路、TGF-β信号通路、PI3K-Akt信号通路相关。PPI分析筛选得到DDIT3、TRIB3、ASNS等10个关键基因。 结论:与H8细胞相比，恶性转化的H8细胞在转录水平出现大量差异表达基因和通路，可进一步为恶性转化致癌的机制提供新思路，以及为预防恶性转化寻找新靶点。