-
载阿霉素新型改性壳聚糖纳米微粒控释载体对骨肉瘤细胞的影响
编辑人员丨1周前
目的:构建一种新型阿霉素-壳聚糖乳酸盐纳米缓释载体用于骨肉瘤治疗研究。方法:2%乳酸水溶液制备水溶性的壳聚糖乳酸盐,pH 5.0的反应体系中,壳聚糖乳酸盐与TPP以10:1的投料比制备载阿霉素的壳聚糖乳酸盐纳米微粒(ChLa-Dox NPs),动态光散射(DLS)分析其粒径、多分散系数、Zeta电位,扫描电镜进行微观形貌学表征,ChLa-Dox NPs的生物学效应检测则通过缓释载体体外缓释动力学、MG63骨肉瘤细胞系细胞毒性实验、细胞迁徙能力及流式细胞术检测。结果:在pH 5.0及壳聚糖乳酸盐:TPP的投料比为10:1的反应条件下制备的ChLa-DoxNPs平均粒径为142.4±1.21 μm,多分散系数(PDI)为0.14±0.01,Zeta电位为+29.2 mV。ChLa-DoxNPs在体外10h时阿霉素达到缓释平台期,缓释12 h内阿霉素累积释放率为(69.4±2.6)%;MG63细胞系骨肉瘤细胞模型实验中,空载纳米微粒组细胞存活率为92.36±3.17%,而不同载药量的ChLa-Dox NPs组具备显著的骨肉瘤细胞杀伤作用。相比空载体组,ChLa-Dox NPs对骨肉瘤细胞迁徙能力有显著的抑制作用,明显促进骨肉瘤凋亡的发生[(凋亡率为(54.08±2.53%)]。结论:经改良制备的载阿霉素壳聚糖乳酸盐纳米微粒符合抗肿瘤纳米载体的理化特性要求,生物相容性好,体外缓释动力学及抗骨肉瘤相关分子-细胞生物学检测表明其具备较好的阿霉素缓释特性,体外能有效的抑制骨肉瘤细胞增殖、迁徙并促进其凋亡,具有较明确的临床转化前景。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
RNaseH-1抑制端粒酶阴性骨肉瘤并增强放射敏感性
编辑人员丨1周前
目的:研究核酸内切酶RNaseH-1对使用端粒的替代延长(ALT)机制来延长端粒的骨肉瘤细胞放射敏感性影响及机制。方法:通过慢病毒转染构建过表达RNaseH-1的ALT骨肉瘤细胞U2OS和端粒酶阳性骨肉瘤细胞143B。对转染后的细胞使用CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期。克隆形成实验检测放射敏感性,免疫荧光实验检测细胞DNA损伤(γ-H 2AX灶点)情况,蛋白印迹法实验检测相关蛋白表达水平。 结果:过表达RNaseH-1后U2OS细胞的增殖能力显著降低,且细胞周期阻滞于G 1期(均 P<0.05)。U2OS细胞中RNaseH-1的过表达使ATM和Chk2的磷酸化水平显著升高、同源重组相关蛋白RAD51和BRCA1的表达显著降低,并导致细胞中DNA损伤水平显著上升、细胞放射敏感性增强(均 P<0.05)。而过表达RNaseH-1不对端粒酶阳性的143B细胞产生抑制效应( P>0.05)。 结论:过表达RNaseH-1抑制了端粒酶阴性骨肉瘤细胞并增强了放射敏感性,其机制可能是RNaseH-1在ALT细胞中抑制同源重组修复并激活ATM信号通路。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
骨肉瘤组织中circ_0000880表达及其对细胞增殖的影响
编辑人员丨1周前
目的:观察骨肉瘤组织和细胞株中环状RNA circ_0000880表达,及其对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法:选取经病理确诊的骨肉瘤的标本共16例,采用circRNA高通量测序技术检测表达差异的circRNA。提取骨肉瘤及其癌旁组织总RNA,依据circ_0000880序列,设计divergent primer,扩增包含backsplice junction区域片段,随后连接入pGM-T载体进行测序鉴定。采用SYBR Green荧光定量PCR,分别检测骨肉瘤及其癌旁组织,骨肉瘤细胞MG63、SAOS-2、U2OS及正常人成骨细胞hFOB1.19中circ_0000880的表达水平。将circ_0000880小干扰RNA(siRNA)和circ_0000880 NC慢病毒转染至骨肉瘤细胞后检测细胞中circ_0000880的表达水平,并通过细胞计数试剂盒(CCK-8)及克隆形成实验检测对骨肉瘤细胞增殖的影响。两样本两组间比较用 t检验。 结果:采用circRNA高通量测序技术检测结果显示骨肉瘤组织及细胞中circ_0000880的表达显著上调,并通过测序鉴定证实circ_0000880在骨肉瘤组织中存在、且为环状RNA。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示circ_0000880在骨肉瘤组织中的表达量(2.032±0.165)显著高于其癌旁组织(1.105±0.155, t=16.393, P<0.05)。circ_000088在骨肉瘤细胞系MG63(2.252±0.140)、SAOS-2(2.134±0.176)、U2OS(2.011±0.226)中表达量均显著高于正常人成骨细胞(1.000±0.092, F=71.299, P<0.05)。转染circ_0000880 siRNA的MG63细胞中circ_0000880表达量明显下降(0.646±0.058),转染circ_0000880 NC的MG63细胞中circ_0000880表达水平(1.005±0.121)与空白组(1.000±0.201)比较差异无统计学意义( F=17.977, P<0.05)。CCK-8及克隆形成试验结果显示,与空白组和阴性对照组比较,转染circ_0000880 siRNA的骨肉瘤细胞增殖能力显著受到抑制。 结论:骨肉瘤组织及细胞中circ_0000880表达显著上调,敲低circ_0000880表达可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖能力。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
具有聚集诱导发光性质的脂滴靶向光敏剂用于骨肿瘤细胞成像和光动力治疗
编辑人员丨1周前
目的:探讨聚集诱导发光材料LD-Orange对骨肿瘤细胞的生物相容性,肿瘤细胞内吞能力,细胞器定位和对骨肿瘤细胞的光动力杀伤效果。方法:采用骨肿瘤细胞系143B作为模型细胞,应用激光共聚焦成像探究LD-Orange与143B细胞孵育后的荧光成像以评估其内吞性能,用商业脂滴染料尼罗红(Nile Red)和LD-Orange共染,应用激光共聚焦成像确定其亚细胞定位并评估其细胞器靶向性能,用DCFH-DA作为活性氧指示剂,探究LD-Orange的细胞内、外活性氧产生能力,用Calcein-AM/碘化丙锭(PI)细胞活性检测试剂盒和噻唑蓝(MTT)实验评估研究细胞杀伤和生物相容性,采用 t检验确定实验组和对照组之间的显著性。 结果:LD-Orange能够被骨肉瘤细胞系143B内吞,定位于细胞脂滴中,且其与商业脂滴染料具有95%的共染率,是一种靶向脂滴的染料。在30 mW/cm 2的低功率普通LED白光的照射下,LD-Orange表现出优异的活性氧产生能力。MTT细胞毒性实验表明,与对照组143B细胞存活率比较LD-Orange为15 μmol/L时,143B细胞存活率不受影响( t=0.474, P>0.05),差异无统计学意义。而实验组经过白光(30 mW/cm 2)照射后,143B细胞的杀伤率为98.27%( t=39.610, P<0.01)。 结论:LD-Orange具有良好的生物相容性,其能够被骨肉瘤细胞143B内吞,具有高的脂滴靶向性,具备较为优异的活性氧产生能力。LD-Orange对骨肿瘤细胞的脂滴良好的靶向成像能力和荧光成像引导下对骨肉瘤细胞的光动力治疗效果确认其为一种有效的脂滴细胞器靶向性光敏剂,为协助下的骨肉瘤外科手术等治疗手段的效果提升提供了较为有效的尝试。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
整合素α7表达下调维持骨肉瘤的失巢凋亡抵抗
编辑人员丨1周前
目的:探究整合素α7(ITGA7)在骨肉瘤中的表达,及其在骨肉瘤肺转移过程中的作用及其机制。方法:利用基因表达数据库(GEO)数据库(52例骨肉瘤组织和12例对照)和细胞系(HOS细胞和hFOB 1.19细胞)明确骨肉瘤中ITGA7的mRNA和蛋白表达水平。采用慢病毒转染技术对HOS细胞中ITGA7进行敲减和过表达后,细胞球漂浮培养条件下比较6组独立样本的HOS细胞球生长。采用RNA-seq技术检测3组独立样本的HOS细胞过表达ITGA7后下游基因变化。两组间连续变量比较采用非配对的 t检验,3组间比较采用单因素方差分析。 结果:GEO数据库结果显示骨肉瘤组织中ITGA7的mRNA水平较对照组织显著降低(7.45±0.10比7.61±0.04, t=9.64, P<0.01),骨肉瘤细胞系中ITGA7在mRNA水平(0.59±0.16比1.02±0.25, t=3.59, P<0.01)和蛋白水平(1.32±0.28比2.34±0.40, t=5.03, P<0.01)均表达下调。敲减ITGA7后骨肉瘤细胞球直径显著大于对照组[(310.21±32.62) μm比(230.84±21.66) μm, t=4.96, P<0.01],而过表达ITGA7后细胞球直径显著小于对照组[(116.03±12.91) μm比(230.84±21.66) μm, t=11.12, P<0.01]。RNA-seq结果显示过表达ITGA7组391个基因表达显著上调,293个基因显著下调,其中37个失巢凋亡相关基因表达上调,12个失巢凋亡相关基因表达下调。进一步通过定量聚合酶链反应(qPCR)结果证实过表达ITGA7组B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)(1.74±0.30比0.92±0.15, t=5.98, P<0.01)和Bak1(3.52±0.57比1.06±0.21, t=9.82, P<0.01)的表达水平显著上调,而B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)(0.43±0.22比1.09±0.24, t=4.85, P<0.01)的表达水平显著下调。 结论:ITGA7在骨肉瘤中表达下调,过表达ITGA7促进骨肉瘤失巢凋亡。骨肉瘤中低水平的ITGA7对于维持其失巢凋亡抵抗能力具有重要作用,并可能在骨肉瘤肺转移过程中发挥重要作用。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路介导的p53基因对骨肉瘤血管生成的抑制作用
编辑人员丨1周前
目的:观察p53基因在骨肉瘤血管生成中的作用并探讨其作用。方法:采用3×10 4接种数量的人共基底膜毛细血管形成试验模拟体内血管生成,应用免疫印迹及免疫荧光观察肌动蛋白纤维内蛋白水平及分布。最终使用免疫组织化学方法对196例人骨肉瘤临床样本检测S2448p哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。采用独立样本 t检验。 结果:观察到p53基因对骨肉瘤MG63细胞系的抑制作用明显,当p53浓度接近100 nmol/L时,其可以抑制人工基底膜上hFOB1.19细胞系内50%的血管生成;而当浓度大于200 nmol/L时,p53几乎可以完全抑制血管的生成血管分支点(2.37±1.56)个,低于0 nmol/L组的(26.79±3.24)个,差异有统计学意义( t=2.796, P<0.05)。在41.8%(82/196)的样本中观察到血管内皮细胞中S2448P-mTOR的表达,经验证抑制作用源于p53基因对包括蛋白激酶B(Akt)、mTOR在内的磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)下游因子磷酸化的抑制作用。 结论:p53基因能够通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制骨肉瘤的血管形成。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
circTNPO1通过下调miR-338-3p的表达促进骨肉瘤增殖迁移
编辑人员丨1周前
目的:探讨circTNPO1通过下调miR-338-3p的表达促进骨肉瘤细胞增殖迁移的作用及其分子机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞中circTNPO1、miR-338-3p、Ki-67和Vimentin的表达水平。构建circTNPO1稳定敲降的143B细胞系,细胞计数试剂盒8实验与细胞划痕实验检测细胞增殖迁移能力,荧光素酶报告基因实验验证circTNPO1与miR-338-3p的关系。建立裸鼠sh-circTNPO1 143B细胞皮下成瘤模型,瘤内注射miR-338-3p抑制剂与miR阴性对照,观察肿瘤重量与体积的变化。免疫组化法检测肿瘤组织中Ki-67的表达。结果:骨肉瘤细胞系U2OS、HOS、MG63、143B、ZOS和ZOSM中circTNPO1 mRNA表达水平分别为2.73±0.27、3.18±0.54、4.33±0.52、5.75±0.65、4.50±0.49和3.96±0.35,均高于成骨细胞hFOB1.19(1.00±0.09,均 P<0.05)。培养48和72 h后,sh-circTNPO1#1组143B细胞吸光度( A)值分别为0.81±0.05和1.09±0.06,sh-circTNPO1#2组143B细胞 A值分别为0.84±0.04和1.2±0.04,均低于对照组(1.00±0.06和1.49±0.06,均 P<0.05)。转染48和72 h时,sh-circTNPO1#1+miR-338-3p抑制剂组143B细胞 A值分别为0.92±0.06和1.32±0.07,均高于sh-circTNPO1#1+miR阴性对照组(分别为0.82±0.04和1.07±0.08,均 P<0.05)。细胞划痕实验显示,sh-circTNPO1#1组和sh-circTNPO1#2组143B细胞迁移率分别为(24.43±2.15)%和(39.70±4.20)%,均低于对照组[(56.51±3.27)%,均 P<0.05]。sh-circTNPO1#1+miR-338-3p抑制剂组143B细胞迁移率[(46.10±5.71)%]高于sh-circTNPO1#1+miR阴性对照组[(26.70±2.21)%, P=0.005]。sh-circTNPO1#1+miR阴性对照组裸鼠肿瘤重量[(262.50±82.09)mg]与体积[(203.30±144.20)mm 3]均低于对照+miR阴性对照组[分别为(458.80±158.10)mg和(593.00±228.40)mm 3,均 P<0.05]。sh-circTNPO1#1+miR-338-3p抑制剂组裸鼠肿瘤重量[(395.40±137.60)mg]与体积[(488.60±208.60)mm 3]均高于sh-circTNPO1#1+miR阴性对照组(均 P<0.05)。 结论:circTNPO1通过靶向吸附miR-338-3p并下调miR-338-3p的表达促进骨肉瘤细胞的增殖与迁移,circTNPO1下调miR-338-3p可能是参与骨肉瘤进展的新机制。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
沉默环状RNA circ_0052012对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响
编辑人员丨1周前
目的:观察骨肉瘤中环状RNA circ_0052012表达和沉默环状RNA circ_0052012表达对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测2017年10月至2018年12月郑州大学第一附属医院确诊的31对骨肉瘤标本癌组织和癌旁正常组织circ_0052012表达水平。使用针对circ_0052012的小干扰RNA(siRNA)转染骨肉瘤细胞系MG63,将体外培养的MG63细胞分为空白组(未转染)、阴性对照组(转染阴性对照si-NC)和沉默组(转染si-circ)。采用细胞增殖实验和Transwell实验,检测沉默RNA circ_0052012表达对MG63细胞增殖和侵袭的影响。采用生物信息学方法预测circ_0052012与微小RNA(miRNA,miR)-7的结合位点,利用双荧光素酶报告实验、RT-qPCR技术和Pearson相关分析,验证circ_0052012对miR-7的靶向调控作用及其在骨肉瘤中表达水平的相关性。两组间数据比较采用 t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析(ANOVA)。 结果:骨肉瘤组织中circ_0052012的表达水平显著高于对应癌旁正常组织,差异有统计学意义(2.452±1.061比1.007±0.644, t=10.180, P<0.01),且circ_0052012表达水平与骨肉瘤TNM分期、远处转移呈明显正相关( P<0.05)。在骨肉瘤细胞系MG63中,培养24、48、72 h后,circ_0052012沉默组细胞的增殖(0.297±0.012、0.607±0.074、0.797±0.067)均明显低于空白对照组(0.407±0.035、0.820±0.070、1.287±0.050)和阴性对照组(0.383±0.012、0.853±0.064、1.240±0.092),差异有统计学意义(24 h, t=-5.154、-9.192, P<0.01;48 h, t=-3.635、-4.391, P<0.05;72 h, t=-10.170、-6.778, P<0.01)。沉默组细胞的侵袭能力(39.400±6.066)也明显低于空白对照组(132.600±8.620)和阴性对照组(126.000±10.950),差异有统计学意义( t=-19.770、-15.460, P<0.01)。双荧光素酶报告实验证实circ_0052012与miR-7靶向结合,且在骨肉瘤组织中的表达呈明显负相关( r=-0.661, P<0.05)。通过抑制miR-7,可部分逆转沉默circ_0052012对MG63细胞增殖和侵袭的抑制作用。 结论:在骨肉瘤细胞中,沉默circ_0052012可通过上调miR-7表达,抑制细胞的增殖和侵袭。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
METTL3 N6-甲基腺嘌呤修饰circSAFB2调控骨肉瘤细胞侵袭和凋亡
编辑人员丨1周前
目的:观察甲基转移酶(METTL3)介导N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰修饰circSAFB2对骨肉瘤细胞侵袭和凋亡的影响。方法:选取经病理确诊的骨肉瘤标本16例及骨肉瘤细胞株MG63,qRT-PCR检测骨肉瘤组织与MG63细胞中METTL3 mRNA和circSAFB2的表达水平。使用SRAMP prediction server在线预测软件对circSAFB2中m6A甲基化位点进行预测,并通过m6A MeRIP-qPCR对骨肉瘤组织和MG63细胞中circSAFB2存在m6A甲基化修饰进行验证。应用MeRIP-qPCR检测骨肉瘤组织和MG63细胞中circSAFB2 m6A甲基化修饰水平。分别将METTL3 siRNA重组慢病毒、METTL3 NC重组慢病毒感染骨肉瘤细胞后,通过放线菌素D、Transwell和流式细胞仪分别检测各组细胞RNA稳定性、侵袭和凋亡,两样本两组间比较用 t检验;多组间比较采用单因素方差分析、组间比较采用LSD法。 结果:METTL3 mRNA(2.354±0.224)和circSAFB2(2.072±0.264)在骨肉瘤组织中的表达量高于癌旁组织(1.000±0.089、1.000±0.104, P<0.05)。骨肉瘤细胞系MG63中METTL3(2.429±0.211)和circSAFB2 mRNA(2.271±0.214)表达量高于正常人成骨细胞(1.000±0.100、1.000±0.136, P<0.05)。SRAMP在线m6A甲基化位点预测结果显示,circSAFB2的115和234位存在m6A甲基化修饰位点;骨肉瘤组织和MG63细胞中,m6A抗体免疫共沉淀的circSAFB2丰度(18.397±1.627、23.338±2.225)均显著高于IgG抗体(1.000±0.130、1.000±0.060, P<0.01),证实circSAFB2上存在m6A甲基化修饰。MeRIP-qPCR检测结果显示,骨肉瘤组织circSAFB2 m6A RNA甲基化修饰水平(3.264±0.217)高于癌旁组织(1.000±0.070, P<0.05);MG63细胞中circSAFB2 m6A RNA甲基化修饰水平(3.379±0.205)高于正常人成骨细胞(1.000±0.064, P<0.05)。转染METTL3 siRNA重组慢病毒的MG63细胞(si-METTL3组),放线菌素D处理6 h和12 h,circSAFB2表达水平(72.570±4.809、52.195±3.081)低于转染METTL3 NC重组慢病毒组(si-NC组)(87.540±5.539、71.131±4.320, P<0.05)。si-METTL3组侵袭数量(54.333±6.429)低于si-NC组(124.667±13.577, P<0.05);凋亡率[(25.105±1.638)%]高于si-NC组[(7.241±0.533)%, P<0.05]。 结论:骨肉瘤组织细胞中METTL3可通过m6A修饰circSAFB2调控骨肉瘤细胞的侵袭和凋亡。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
siRNA干扰URG11表达对骨肉瘤细胞系MG63的生物学功能和Wnt/β-catenin信号通路的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨siRNA干扰URG11表达后骨肉瘤细胞系MG63的生物学功能和Wnt/β-catenin信号通路的变化。方法:将体外培养的MG63细胞分为Control组(未转染)、NC-siRNA组(转染非特异性NC-siRNA)和URG11-siRNA组(转染URG11-siRNA),采用逆转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)检测各组细胞中URG11 mRNA的表达,分别用CCK-8法、Transwell实验和流式细胞仪检测细胞增殖、侵袭和凋亡,用Western blot法检测各组细胞中URG11蛋白以及Wnt/β-catenin信号通路中周期性调控因子D1(Cyclin D1)、原癌基因(c-Myc)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和凋亡抑制基因(Survivin)的表达。结果:与Control组相比,URG11-siRNA转染可使MG63细胞中URG11 mRNA和URG11、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、MMP-2、Survivin蛋白的表达水平降低,同时细胞增殖、侵袭能力显著减弱,细胞凋亡明显增强(均 P<0.05);而NC-siRNA转染后MG63细胞的变化无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:干扰URG11表达可抑制MG63细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
