目的 研究白头翁皂苷B4的抗动脉粥样硬化作用及其机制.方法 将雄性的C57小鼠设为对照组,共6只,给予正常饮食;给予ApoE-/-小鼠高脂饮食喂养9周后,随机分为4组:模型组、辛伐他汀(阳性对照,5mg·kg-1)组及白头翁皂苷B4低、高剂量(5、20 mg·kg-1)组,每组7只.ig给药9周,C57对照组和ApoE-/-模型组给予等量的0.9％的氯化钠溶液.给药的同时造模小鼠仍给予高脂饮食,每周统计1次体质量,给药9周后进行取材.通过兽用血常规分析仪检测全血中血小板(PLT)、白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neu)及淋巴细胞(Lym)水平;ELISA法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)的水平;试剂盒法检测血清中总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;通过全长主动脉油红染色检测主动脉中脂质积累情况;通过苏木精-伊红染色法、Masson染色法和油红O染色法检测主动脉窦的组织病理变化.结果 与模型组比较,在白头翁皂苷B4及辛伐他汀给药后,体质量呈降低趋势;PLT、WBC、Neu、Lym、IL-6水平均显著降低(P＜0.05、0.01、0.001);血清TC、FC、TG、LDL-C水平显著降低(P＜0.001),HDL-C水平显著升高(P＜0.001);全长主动脉被染红区域显著缩小(P＜0.001);主动脉窦油红染色区域面积明显减少,小鼠主动脉窦斑块减少,可见少量泡沫细胞,炎症细胞浸润减少,中膜层平滑肌及弹性纤维排列增厚不明显,胶原含量多且分布规律,胶原间的腔隙减少,油红染色区域面积明显减少.结论 白头翁皂苷B4对高脂饮食诱导的ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化具有治疗作用,其作用机制与减少脂质浸润和炎症反应有关.

目的:基于网络药理学预测和动物实验验证探讨白头翁汤对外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginal candidiasis,VVC)的治疗作用及机制.方法:通过文献查阅及TCMSP、Gene Cards等数据库收集白头翁汤成分、靶点及VVC疾病靶点,Cityscape 3.6.0软件构建"药物活性成分-靶点-通路"网络;String数据库构建蛋白互作网络.通过DAVID平台进行基因功能(GO)分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;使用AutoDock软件对核心成分及关键靶点进行分子对接.将SPF级KM小鼠采用随机数表法分为正常组,模型组,白头翁汤低、中、高剂量组,氟康唑组(n=12).阴道腔内接种白色念珠菌建立VVC模型.连续给药14 d后,革兰氏染色法和平板计数法观察阴道灌洗液中真菌载量;HE染色观察阴道组织形态改变;ELISA 法检测血清 IL-17、IL-23、IL-1β 的含量;Western blot 法验证主要靶点 TNF-α、HSP90、ESR、STAT3和 IL-23/IL-17 轴核心调控因子ROR-γT蛋白表达.结果:筛选得到白头翁皂苷B4、二氢尼洛替星、黄柏酮、β-谷甾醇、小檗碱为治疗VVC的核心成分;筛选出18个关键作用靶点和75条通路.动物实验结果显示,与模型组比较,白头翁汤给药后可降低阴道内真菌载量和血清炎症因子IL-17、IL-23和IL-1β含量,降低阴道组织内TNF-α、HSP90、ESR、STAT3和ROR-γT蛋白表达,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:白头翁汤通过调控STAT3、TNF-α等靶点以及IL-23/IL-17轴发挥治疗VVC作用.

目的 基于RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路探讨白头翁汤对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜愈合的影响及作用机制.方法 30只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组、白头翁汤组、英夫利西单抗组和联合组(白头翁汤+英夫利西单抗),每组6只.采用3.5%葡聚糖硫酸钠溶液自由饮用7 d建立溃疡性结肠炎小鼠模型,造模结束后,白头翁汤组每日予8 g/kg白头翁汤药液灌胃,英夫利西单抗组予5 mg/kg英夫利西单抗腹腔注射,联合组同步灌胃和腹腔注射,对照组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续7 d.每日记录小鼠体质量,观察粪便性状并进行疾病活动指数(DAI)评分,干预结束后测量结肠长度,ELISA检测血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,HE染色观察结肠组织形态,RT-qPCR检测结肠组织受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1、RIPK3、混合系激酶区域样蛋白(MLKL)mRNA表达,Western blot和免疫荧光染色检测结肠组织RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠体质量降低(P<0.01),DAI评分升高(P<0.01),结肠长度缩短(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量升高(P<0.01);结肠黏膜破坏,隐窝及腺体结构消失,大量炎性细胞浸润,结肠组织病理评分升高(P<0.01);结肠组织RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA和蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05).与模型组比较,各给药组小鼠体质量增加(P<0.01),DAI评分降低(P<0.01),结肠长度增加(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量降低(P<0.05,P<0.01);结肠黏膜屏障破坏减轻,结肠组织病理评分降低(P<0.05);结肠组织RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01).结论 白头翁汤能减轻溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜损伤、缓解炎症,其作用机制可能与抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路有关.

基于转录组学研究白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol extract of Pulsatilla Decoction,BEPD)含药血清通过调控表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对光滑念珠菌刺激下阴道上皮细胞的保护作用及机制.首先构建外阴阴道念珠菌病(VVC)模型小鼠,然后将该组小鼠连同空白对照组与BEPD干预组小鼠的阴道黏膜组织进行转录组测序分析基因表达差异,同时制备BEPD含药血清与氟康唑含药血清.将人阴道上皮细胞系(A431 细胞)分为对照组、模型组、空白血清组、氟康唑含药血清组、BEPD含药血清组、EGFR激动剂组、EGFR抑制剂组.以细胞增殖与活性检测(CCK-8)法分别确定光滑念珠菌、含药血清及药物对A431 细胞的安全浓度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、趋化因子配体 20(CCL20)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平;革兰染色观察光滑念珠菌黏附阴道上皮细胞;流式细胞术检测光滑念珠菌对A431 细胞凋亡的影响;根据转录组学结果,以免疫荧光检测细胞p-EGFR、p-ERK1/2 蛋白的表达,免疫印迹法检测细胞中p-EGFR、p-ERK1/2、p-C-Fos、p-P38、Bax、Bcl-2蛋白的表达.转录组测序显示,相对于模型组,BEPD治疗后出现 1 075 个基因上调和 927 基因下调,主要富集于包括MAPK等在内的免疫炎症相关通路.细胞学实验显示,BEPD含药血清能够降低细胞上清液中IL-1β、IL-6、GM-CSF、G-CSF、CCL20 炎症因子的水平,缓解由光滑念珠菌引起的细胞中LDH的释放,减少光滑念珠菌对A431 细胞的黏附,降低光滑念珠菌诱导的细胞凋亡,下调促凋亡相关蛋白Bax和上调抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并显著下调p-EGFR、p-ERK1/2、p-C-Fos与p-P38 的表达.该研究提示,BEPD对光滑念珠菌所致VVC的干预效应可能与其通过调节EGFR/MAPK通路保护阴道上皮细胞有关.

目的 研究白头翁汤含药血清对口腔扁平苔藓上皮细胞生物活性及Hippo信号通路的作用机制.方法 将体外建立的口腔扁平苔藓炎症模型细胞采用数字随机法分为4组,对照组、空白组、低剂量组、高剂量组.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HOK细胞Toll样受体(TLR)4、肿瘤坏死因子(TNF)-α及核因子(NF)-κB mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HOK细胞中白细胞介素(IL)-6、IL-8水平;Western印迹检测HOK细胞中转录共激活因子相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶(Mst1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Lats)1/2蛋白表达.结果 与对照组相比,空白组HOK细胞增殖明显降低,凋亡率、TLR4、TNF-α、NF-κB mRNA、IL-6、IL-8、YAP、Mst1、Lats1/2表达明显升高(P＜0.05).与空白组相比,低剂量组HOK细胞增殖明显升高,凋亡率、TLR4、TNF-α、NF-κB mRNA、IL-6、IL-8、YAP、Mst1、Lats1/2表达明显降低(P＜0.05).与低剂量组相比,高剂量组HOK细胞增殖明显升高,凋亡率、TLR4、TNF-α、NF-κB mRNA、IL-6、IL-8、YAP、Mst1、Lats1/2表达明显降低(P＜0.05).结论 白头翁汤通过降低炎性水平抑制人口腔黏膜角质形成细胞凋亡、促进其增殖,改善病情严重程度,其作用机制与调控Hippo信号通路有关.

目的 探究白头翁含药血清对口腔扁平藓上皮细胞增殖、凋亡及Fas/FasL信号通路的影响.方法 选取人口腔黏膜角质形成细胞(HOK)用脂多糖诱导建立口腔扁平藓细胞模型,分别比较空白组(正常培养)、脂多糖组(10 μg/ml 脂多糖)、低剂量组(10 μg/ml 脂多糖+2.5%的白头翁汤含药血清培养)、中剂量组(10 μg/ml 脂多糖+5.0%的白头翁汤含药血清培养)、低剂量组(10 μg/ml脂多糖+10.0%的白头翁汤含药血清培养)细胞的增殖、凋亡及炎性因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6 和肿瘤坏死因子(TNF)-α]的表达;对5 组细胞中凋亡诱导配体(FasL)受体(Fas)、FasL蛋白和mRNA进行检测.结果 脂多糖组细胞分泌的炎性因子较空白组显著增加(P＜0.05);低剂量组、中剂量组和高剂量组细胞中炎性细胞表达较脂多糖组均显著降低,且呈逐渐递减趋势(P＜0.05).与空白组相比,脂多糖组细胞的增殖能力明显下降,凋亡率显著升高(P＜0.05);低、中、高剂量组细胞的增殖能力较脂多糖组得到明显回升,凋亡率较脂多糖组明显回降(P＜0.05).与空白组相比,脂多糖组细胞中Fas和FasL蛋白和mRNA表达显著增加(P＜0.05);与脂多糖组相比较,低、中、高剂量组细胞中Fas和FasL蛋白和mRNA表达均明显回降,呈逐渐递减趋势(P＜0.05).结论 白头翁含药血清可调节口腔扁平藓上皮细胞的生物学活性,促进口腔黏膜角质形成细胞增殖,抑制其凋亡,降低炎性水平,其作用机制可能与调控Fas、FasL蛋白有一定相关性.

目的 观察久泻宁颗粒联合白头翁汤治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎(CUC)临床疗效,以及对血清几丁质酶-3样蛋白-1(Chtinase-3-like-1 protein,YKL-40)含量的影响.方法 将60例CUC患者随机分为2组,治疗组30例予久泻宁颗粒联合白头翁汤治疗,对照组30例予美沙拉嗪颗粒剂治疗.2组均治疗8周后统计综合疗效、中医证候疗效及肠镜下黏膜疗效,并观察2组治疗前后症状积分、疾病活动指数评分(DAI)及YKL-40情况.结果 临床综合疗效:治疗组总有效率90.0％,对照组总有效率76.7％,2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).中医证候疗效:治疗组总有效率90.0％,对照组总有效率76.7％,2组比较差异有统计学意义(P＜0.05),治疗组疗效优于对照组.肠镜下黏膜疗效:治疗组总有效率83.33％,对照组总有效率73.33％,2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).2组治疗后症状总积分与本组治疗前比较差异均有统计学意义(P＜0.05),但2组治疗后症状总积分组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).2组治疗后主要症状积分均降低(P＜0.05),且治疗组治疗后腹泻、里急后重症状积分降低优于对照组(P＜0.05).2组治疗后DAI评分与本组治疗前比较差异均有统计学意义(P＜0.05),但2组治疗后组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).2组治疗后血清YKL-40水平与本组治疗前比较差异均有统计学意义(P＜0.05),但2组治疗后组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 久泻宁颗粒联合白头翁汤治疗CUC疗效确切,并可改善患者的临床症状及中医症状,同时降低血清YKL-40水平.

目的 研究白头翁复方灌肠治疗溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠的疗效及机制.方法 采用三硝基苯磺酸(TNBS)制备 UC模型大鼠,随机分为正常对照组(CON 组)、TNBS 造模组(TNBS 组)、中药白头翁复方治疗组(ZY组)和柳氮磺砒啶肠溶片治疗组(SASP组).观察大鼠一般情况、肠黏膜大体形态学和组织学改变,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测大鼠血清 IL-6、IL-10水平,实时荧光定量PCR法检测大鼠结肠组织 IL-6、IL-10含量,免疫组织化学法检测大鼠结肠组织 MUC2表达情况.结果 与 TNBS组相比,ZY组与 SASP 组均可减轻 UC 模型大鼠的炎症程度,DAI评分、CMDI评分和组织病理学评分明显改善,血清及组织 IL-6水平下降,IL-10水平升高,结肠黏膜 MUC2表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 白头翁复方灌肠对 TNBS 复制的大鼠UC模型有治疗作用效果,可能通过降低促炎因子 IL-6的表达、升高抑炎因子 IL-10的表达和上调黏蛋白 MUC2表达量,进而增强肠道黏膜免疫屏障和抗炎能力,对 UC起到治疗作用.

目的:探讨白头翁汤加减联合双歧杆菌制剂治疗溃疡性结肠炎的效果及其作用机制研究.方法:SPF级SD大鼠60只,随机抽取8只大鼠作为正常组,剩余52只造模.采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法复制溃疡性结肠炎模型,第3天随机抽取2只解剖,观察造模是否成功.剩余的50只大鼠随机分为5组,每组10只,分别为模型组,丽珠肠乐(双歧杆菌制剂)组(丽珠肠乐组),丽珠肠乐+白头翁汤加减高、中、低浓度组(联合高、中、低剂量组),定时给药持续14 d,评估大鼠疾病活动指数(diseaseactivityindex,DAI).取材后行苏木素-伊红(HE)染色;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清D-乳酸(D-lactic acidosis,D-LA),二胺氧化酶(double amine oxidase,DAO)水平及结肠细胞因子白细胞介素-8(IL-8),IL-13水平;实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测双歧杆菌及IL-1β mRNA的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量明显降低,DAI和HE染色评分均明显升高,血清D-LA,DAO及结肠组织IL-8水平明显升高,IL-13水平明显降低,双歧杆菌mRNA明显降低及IL-1βmRNA明显升高(P＜0.05);联合组高剂量组死亡率低于丽珠肠乐组,各给药组大鼠体质量均高于模型组(P＜0.05);联合组高剂量组死亡率低丽珠肠乐组,且体质量高于丽珠肠乐组(P＜0.05);联合组高剂量组DAI低于丽珠肠乐组(P＜0.05);联合组高剂量组HE评分低于丽珠肠乐组(P＜0.05);与丽珠肠乐组比较,联合组高剂量组D-LA,DAO和IL-8降低,IL-13升高(P＜0.05);各用药组大鼠结肠组织中双歧杆菌mRNA相对含量均有增加(P＜0.05);联合组高剂量组双歧杆菌mRNA相对含量高于丽珠肠乐组(P＜0.05);联合组高剂量组IL-1β的相对表达量低于丽珠肠乐组(P＜0.05).结论:高剂量白头翁汤加减联合双歧杆菌制剂可能通过促进溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜修复,加强肠道双歧杆菌定植,降低D-LA,DAO和IL-8,升高IL-13水平,下调IL-1β mRNA表达发挥协同治疗作用.

研究白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对DSS诱导+白念珠菌(CA)定植状态下的小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的作用机制.将小鼠随机分为正常对照组,DSS组,DSS+ CA组,BAEB高、中、低剂量组,阳性药Mesalazine组.观察小鼠一般情况,平板法检测小鼠肠道内容物真菌载荷量,HE染色观察小鼠结肠病理变化;ELISA法检测小鼠血清ASCA及结肠黏膜组织IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的含量变化.结果表明,与DSS模型组相比,DSS+ CA组小鼠一般状况及血清ASCA无明显变化,但肠道CA载荷量、组织病理损伤程度、结肠黏膜组织IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的蛋白水平均超过DSS组,BAEB高剂量与Mesalazine治疗能改善结肠组织病理,降低IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的表达水平.上述结果提示,BAEB能有效改善DSS+ CA定植下的UC小鼠结肠病理及免疫性损伤,对肠道真菌过度定植相关肠炎的治疗具有重要价值.